液相色譜—質譜聯用技術在水產品安全檢測中的應用

王 麗 陳韓飛 王 甜

(新疆維吾爾自治區水產科學研究所 新疆 烏魯木齊 830000 )

液相色譜—質譜聯用技術在水產品安全檢測中的應用

王 麗 陳韓飛 王 甜

(新疆維吾爾自治區水產科學研究所 新疆 烏魯木齊 830000 )

液相色譜-質譜聯用技術逐漸成為水產品中獸藥殘留檢測的重要手段。本文介紹了液相色譜-質譜聯用儀的基本原理和特點，以及在水產品安全檢測中的應用。

液相色譜-質譜聯用儀；水產品；安全檢測

水產品在養殖過程所用獸藥種類較為復雜，經常攝入含有低劑量藥物殘留的水產品，殘留的藥物即可在人體內慢慢蓄積而導致體內各器官的功能紊亂或病變，嚴重危害人體健康。水產品安全日益受到國家和有關國際組織的關注和嚴格控制，人們對水產品的營養性和安全性的關注均趨于理性化、科學化的同時，也對水產品中有害物質的檢測水平也提出了更高的要求。液相色譜-質譜(LC-MS/MS)聯用既發揮了現代色譜對復雜樣品的高分離能力,其質譜具有的高選擇性、高靈敏度以及能夠準確提供化合物的分子量與結構信息的優點,在水產品安全檢測中發揮著越來越大的作用。LC-MS/MS憑借其超低的檢測限、優異的定性能力，逐漸成為水產品安全檢測領域的主力軍。

1 液相色譜-質譜聯用儀的原理

液相色譜-質譜聯用儀主要由液相色譜、接口裝置(LC與MS之間的連接裝置，同時也是電離源)和質譜儀組成。色譜可作為質譜的樣品導入裝置，并對樣品進行初步分離純化，再由質譜檢測器檢測依次得到化合物的分子離子及碎片信息。因為色譜可得到化合物的保留時間，質譜可給出化合物的分子量和結構信息，由此可以根據質譜峰的位置進行物質的定性和結構分析，根據峰的強度進行定量分析。因此色譜/質譜聯用技術可對復雜體系進行分離分析，故對復雜體系或混合物中化合物的鑒別和測定非常有效。

2 液相色譜-質譜聯用儀在水產品質量安全檢測中的應用

水產品的基質相對其他食品來說，較為復雜，含有較多的蛋白質、脂肪等物質，很容易對所檢測的目標化合物造成干擾。液相色譜-質譜聯用技術對樣品的提取、純化和濃縮等前處理過程沒有嚴格要求，并且它具有抑制基質干擾的特點，與液相的方法相比，樣品前處理的過程更加簡便。此外，水產養殖過程中使用的獸藥也越來越多樣化，對獸藥的檢測需求也從以前的單一類別獸藥檢測發展到現在的多種不同類別獸藥同時檢測，液相色譜-質譜聯用技術因其良好的適用性，可同時定性、定量、高靈敏度及分析時間短等特點，已成為多種獸藥殘留同時檢測的主要方法。

2.1 水產品抗生素殘留的測定

2.1.1 硝基呋喃類

硝基呋喃類藥物作為人工合成的廣譜抗菌藥，主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因等，因其具有抑菌性和殺菌性而廣泛用于水生動物細菌性疾病預防及治療。趙東豪等研究了利用高效液相色譜-串聯質譜法檢測水產品中殘留的呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮等4種硝基呋喃類代謝物，優化了前處理方法及液相色譜條件。硝基呋喃類代謝物經衍生化后，調節樣品pH，乙酸乙酯提取，提取液經氮氣吹干后，用乙腈-甲酸(0.1%)水溶液定容，4℃高速離心后上機測定。采用梯度洗脫法，4種代謝物在C18柱中分離良好。該法有效地提高硝基呋喃類代謝物的檢測效率，且檢測結果準確。

2.1.2 氯霉素類

該類藥物主要有氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素(氟苯尼考)，氯霉素對人的造血系統、消化系統具有嚴重的毒性反應，有可能引發人的再生障礙性貧血；同時還會引起視神經炎、皮疹等不良反應，現已被禁止使用。萬譯文等建立了水產品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素藥物殘留量同時測定的高效液相色譜-串聯質譜方法。以氘代氯霉素做內標，乙酸乙酯提取，HLB固相萃取柱凈化，洗脫液氮氣吹干，采用負離子模式進行定性、定量分析。結果表明：氯霉素的檢出限為0.01μg/kg，甲砜霉素和氟甲砜霉素檢出限為0.03μg/kg，檢測結果的相對標準偏差為3.3%～9.7% (n=6)，加標回收率達到78.6%～110.5%。該方法在水產品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素藥物的殘留測定中具有很好的應用前景。

2.1.3 喹諾酮類

喹諾酮類是人工合成的含4-喹諾酮基本結構的抗菌藥。其因具有廣譜、高效及低毒等優勢而被廣泛應用于水產養殖中治療和預防多種細菌和支原體疾病。常見的喹諾酮類藥物有諾氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星等。劉正才等建立了快速測定鰻魚肌肉中氧氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、環丙沙星、氟甲喹和惡喹酸6種喹諾酮類藥物殘留的超高效液相色譜-串聯質譜方法。樣品經勻漿、提取、脫脂、凈化后，以乙腈-乙酸銨溶液(0.2%甲酸)為流動相，用多反應監測正離子掃描方式進行質譜檢測，內標法定量。結果表明，該方法對以上6種喹諾酮類藥物的線性范圍為0.1～50μg/kg，相關系數(r)均大于0.9976；檢出限為0.03～0.25μg/kg，定量限為0.1～0.8μg/kg，在1.0、2.0、10μg/kg 3個添加水平的回收率為84.8%～97.8%，相對標準偏差為4.5%～11.3%。該法簡單、靈敏、特異性強，適用于鰻魚肌肉中喹諾酮類藥物多殘留的檢測。

2.1.4 磺胺類

磺胺類藥物是指具有對氨基苯磺酰胺結構的一類藥物總稱。人體中長期存在磺胺會導致許多細菌對磺胺藥物產生抗藥性，磺胺類殘留還能破環人的造血系統，造成溶血性貧血癥。孫偉紅等建立水產品中18種磺胺類藥物殘留量的HPLC-MS/MS測定方法。以氘代試劑為內標，采用正離子模式測定，可同時對水產品中的18種磺胺類藥物進行定性和定量。其檢出限在0.5μg/kg以下，定量限為1.0μg/kg；在5.0～200.0μg/mL時峰強度與質量濃度的線性關系良好(r＞0.99)。方法的平均回收率范圍為70%～120%。該法簡便快捷，在一定程度上實現了藥物殘留的快速檢測。

2.2 水產品禁用漁藥的檢測

于慧娟等建立了水產品中己烯雌酚的LC-MS/MS檢測方法，樣品用甲基叔丁基醚和乙酸乙酯提取，C18固相萃取柱凈化，甲醇洗脫，以0.02%氨水-甲醇為流動相，在LC-MS/MS多反應監測模式下進行定性與定量分析。在魚、蝦和蟹三類樣品中，己烯雌酚在2μg/kg加標水平時，批內相對標準偏差為5.3%～15%，在2μg/kg加標水平時，批內相對標準偏差為2.3%～8.2%，以上回收率均在75%以上。祝璟琳等建立了羅非魚肌肉中甲基睪丸酮殘留量的UPLC-MS/MS測定方法，以氘代試劑為內標，采用正離子監測模式測定，可對羅非魚肌肉中甲基睪丸酮殘留進行定性和定量檢測，檢出限為0.4μg/kg，定量限為1μg/kg。線性范圍為1～60μg/kg(r＞0.999)，方法的平均回收率范圍為71.06%～83.06%，相對標準偏差為7.4%～15.3%。王慧龍等優化了液相色譜-串聯質譜法測定水產品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留量的檢測方法。樣品經勻漿、萃取、凈化和濃縮后，用乙腈-乙酸銨溶液定容，采用液相色譜-三重四級桿串聯質譜儀、多反應監測掃描模式檢測和同位素內標法定量。孔雀石綠和無色孔雀石綠檢測的線性范圍為0.25～10.0ng/mL，檢出限均為0.50μg/kg。在加標量為 2.50μg/kg時，樣品加標平均回收率分別為98.1%和93.4%，相對標準偏差小于10%。

2.3 多種獸藥組分同時測定

水產品中的獸藥殘留檢測范圍已逐步從單一類別的獸藥檢測發展為多種不同類別獸藥的定性與定量分析。李仲超等運用液相色譜-質譜技術建立水產品(魚、蝦和貝)中78種獸藥的同時測定方法。目標獸藥在0.1～100μg/kg范圍內線性良好；以基底匹配工作曲線和替代物法分別進行定量和質控，4μg/kg和20μg/kg兩個加標量條件下魚、蝦、貝肉的加標回收率和相對標準偏差(n=4)分別為40.8%～125.6%和0.1%～16.0%(魚)、42.9%～131.9%和0.1%～14.0%(蝦)、及43.5%～136.4%和0.3%～15.8%(貝)，方法檢測限為0.1～0.5μg/ kg。劉正才等建立鰻魚中15種磺胺、3種喹諾酮類以及4種四環素族抗生素殘留的超高效液相色譜-串聯質譜同時測定方法。添加水平為 5、10、20μg/kg時各種化合物的平均回收率范圍為72.4%～97.3%，相對標準偏差值均小于14.4%。該法簡單、快速、靈敏，適用于鰻魚中多磺胺組分、喹諾酮及四環素族組分殘留的同時測定。

3 結語

液相色譜-質譜聯用技術解決了傳統液相檢測器靈敏度和選擇性不夠的缺點，提供了可靠、精確的相對分子質量及結構信息，簡化了實驗步驟，節省了樣品準備時間和分析時間。水產品中獸藥殘留也從單一類別檢測發展到多種類別獸藥殘留的定性定量分析，但水產品基質復雜，利用現有的技術建立簡單、高效、環保且低成本的分析方法仍然是水產品檢測的主要發展方向。隨著現代技術的發展，液相色譜-質譜聯用技術將會在水產品檢測分析方面發揮舉足輕重的作用。

（略）

王麗（1988-），女，碩士研究生，助理工程師，主要從事水產品安全質量檢測工作，E-mail: 845357500@qq.com；

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