金華地區(qū)Ki—67在乳腺癌中的表達(dá)及意義

樓立新　林恒軍　王榮飛

[摘要] 目的 探討金華地區(qū)Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)水平、與乳腺癌亞型的關(guān)系及其對患者行改良乳腺癌根治術(shù)后局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的預(yù)測價值。 方法 選取我院行改良乳腺癌根治術(shù)治療的乳腺癌患者134例，術(shù)后均隨訪至少3年。檢測其乳腺癌組織Ki-67、ER、PR及Her-2表達(dá)水平和癌旁組織Ki-67表達(dá)水平，分析乳腺癌Ki-67蛋白表達(dá)水平及其與乳腺癌亞型的關(guān)系、乳腺癌Ki-67蛋白表達(dá)水平與局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其預(yù)測局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況的價值。 結(jié)果 乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達(dá)率高于癌旁組織（P<0.05）。Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者不同亞型的蛋白陽性表達(dá)率分別為Luminal A型53.57%、Luminal B型77.27%、Her-2陽性型94.29%、三陰型96.30%（P<0.05）。Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達(dá)水平與乳腺癌亞型密切相關(guān)。Ki-67陽性表達(dá)患者的局部復(fù)發(fā)率及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率均高于陰性表達(dá)患者（P<0.05）。Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達(dá)水平與局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)，且其預(yù)測局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的價值良好。結(jié)論 金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)與乳腺癌亞型和局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況均相關(guān)，且對預(yù)后情況的預(yù)測價值良好，可作為乳腺癌亞型和預(yù)后評估的參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌；免疫組化法；Ki-67；乳腺癌亞型；復(fù)發(fā)；轉(zhuǎn)移

[中圖分類號] R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2016）31-0009-05

乳腺癌在全球女性惡性腫瘤發(fā)病中居首位，近年來乳腺癌的發(fā)病隨著生活方式、飲食結(jié)構(gòu)等的改變而不斷增加，且呈現(xiàn)年輕化趨勢[1-3]。盡管目前臨床對乳腺癌的早期診斷和治療手段有長足進(jìn)展，但患者的預(yù)后情況仍較差，乳腺癌仍是女性死亡的重要原因之一[4，5]。乳腺癌的發(fā)生受到多個因子的影響，近年來Ki-67逐漸成為一個新的研究熱點(diǎn)，且有研究提示其與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6-8]。因此，Ki-67亦可能與浙江金華地區(qū)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，可能用于病情和預(yù)后評估從而指導(dǎo)干預(yù)。然而目前關(guān)于金華地區(qū)Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)和意義的分析研究仍較少。因此，本研究采用免疫組化法檢測金華地區(qū)乳腺癌患者Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)水平及其與乳腺癌亞型及復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況的關(guān)系，旨在為該地區(qū)乳腺癌的預(yù)后評估及治療干預(yù)提供指導(dǎo)從而改善預(yù)后情況，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年4月～2013年8月金華市人民醫(yī)院行改良乳腺癌根治術(shù)治療且病理確診的乳腺癌患者134例。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查確診，性別均為女性，年齡不限，志愿入組。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除入選時即已合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、治療期間死亡、中途退出研究等患者。實驗經(jīng)我院倫理委員會審核批準(zhǔn)，且所有入選的患者及其家屬均已簽署知情同意書。134例乳腺癌患者中年齡最小30歲，最大82歲，平均（51.83±9.88）歲，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例，病變部位在左側(cè)66例，病變部位在右側(cè)68例；病理分型：浸潤性導(dǎo)管癌67例，浸潤性小葉癌58例，其他病理類型9例。

1.2方法

采用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP染色法檢測乳腺癌組織中Ki-67、雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factorreceptor-2，Her-2）的表達(dá)情況及癌旁組織中Ki-67表達(dá)水平，檢測采用的相關(guān)試劑盒均由武漢博士德生物工程有限公司提供。將手術(shù)切除所得的乳腺癌組織及癌旁組織進(jìn)行甲醛固定并常規(guī)行石蠟包埋，采用切片機(jī)將組織切成厚度約0.4 μm的連續(xù)切片。由同一臨床檢驗經(jīng)驗豐富的醫(yī)師采用免疫組化SP法對乳腺癌組織的Ki-67、ER、PR及Her-2的表達(dá)情況及癌旁組織中Ki-67表達(dá)水平進(jìn)行檢測，每張病理切片均隨機(jī)選擇10個高倍視野，以100個腫瘤細(xì)胞作為觀察對象，進(jìn)行蛋白表達(dá)情況的評價。

1.3觀察指標(biāo)

采用免疫組化檢測患者乳腺癌組織Ki-67、ER、PR及Her-2表達(dá)水平和癌旁組織Ki-67表達(dá)水平，分析患者乳腺癌亞型，并比較乳腺癌不同亞型患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)水平。術(shù)后均隨訪至少3年，統(tǒng)計患者隨訪期間局部復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)[9]

Ki-67、ER、PR染色定位于細(xì)胞核，Her-2染色定位于細(xì)胞膜，以細(xì)胞膜或細(xì)胞核存在棕黃色顆粒為陽性標(biāo)準(zhǔn)，觀察乳腺癌組織各切片中Ki-67、ER、PR、Her-2陽性表達(dá)情況及癌旁組織中Ki-67蛋白陽性表達(dá)情況。乳腺癌亞型判斷標(biāo)準(zhǔn)[10]：Luminal A型：ER（+）或PR（+）且Her-2（-）；Luminal B型：ER（+）或PR（+）且Her-2（+）；Her-2陽性型： ER（-），PR（-）且Her-2（+）；三陰型：ER（-），PR（-）且Her-2（-）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS14.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，采用Logistic多因素分析法分析乳腺癌Ki-67蛋白表達(dá)水平及其與乳腺癌亞型、局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并采用受試者操作特性曲線（ROC）分析乳腺癌Ki-67蛋白表達(dá)水平預(yù)測局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況的價值，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1乳腺癌組織和癌旁組織Ki-67蛋白表達(dá)情況比較

134例乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2乳腺癌患者乳腺癌亞型分析

金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌亞型比例分別為Luminal A型20.90%、Luminal B型32.83%、Her-2陽性型26.12%、三陰型20.15%，見表2。

2.3乳腺癌不同亞型患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)水平比較

Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者不同亞型的蛋白陽性表達(dá)率分別為Luminal A型53.57%、Luminal B型77.27%、Her-2陽性型94.29%、三陰型96.30%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)水平與乳腺癌亞型的關(guān)系分析

Logistic多因素分析結(jié)果顯示，Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達(dá)水平與乳腺癌亞型密切相關(guān)（P<0.05）。見表4。

2.5乳腺癌患者隨訪期間局部復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率預(yù)后情況分析

134例乳腺癌患者隨訪3年期間局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者例數(shù)分別為45例和38例，局部復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率分別為33.58%（45/134）和28.36%（38/134），提示局部復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率高，患者預(yù)后情況差，急需改善。

2.6 乳腺癌組織中Ki-67陽性表達(dá)和陰性表達(dá)患者的預(yù)后比較

Ki-67陽性表達(dá)患者的局部復(fù)發(fā)率及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率均高于陰性表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表 5。

2.7乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)水平與預(yù)后的關(guān)系

Logistic多因素分析結(jié)果顯示Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達(dá)水平與局部復(fù)發(fā)密切相關(guān)，其β、SE、Wald、P、OR和95%CI分別為1.535、0.342、4.488、0.000、9.475和2.268～9.735。Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達(dá)水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移亦密切相關(guān)，其β、SE、Wald、P、OR和95%CI分別為1.506、0.314、4.796、0.000、9.278和2.205～9.563。

2.8 金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)預(yù)測其預(yù)后的價值分析

進(jìn)一步ROC曲線分析結(jié)果顯示，金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達(dá)預(yù)測局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的曲線下面積、敏感度、特異度、準(zhǔn)確性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值等均較高，金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達(dá)預(yù)測局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的價值均良好，見表6及圖1、2。

3討論

近年來，隨著生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)改變及環(huán)境變化增加各類惡性腫瘤的發(fā)生，其中女性常見惡性腫瘤之一的乳腺癌的發(fā)病亦呈逐年上升趨勢。乳腺癌是女性發(fā)病率首位的惡性腫瘤，其在金華地區(qū)的發(fā)病率高，可明顯影響女性患者的健康，甚至直接威脅著女性患者的生命安全[11]。因此，對乳腺癌早期進(jìn)行疾病確診，并根據(jù)患者的組織分型、腫瘤直徑等確定治療方案，有利于預(yù)后的改善。乳腺癌的早期診治技術(shù)目前已取得了較大進(jìn)展，然而患者術(shù)后復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移甚至死亡等不良預(yù)后情況仍時有發(fā)生[12-14]。本研究分析134例行乳腺癌根治術(shù)治療的乳腺癌患者隨訪3年的局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生情況，本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者隨訪期間局部復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率分別為33.58%和28.36%，其局部復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率均較高，極易導(dǎo)致死亡等不良預(yù)后情況，乳腺癌患者的預(yù)后情況差。因此，對乳腺癌患者的病情和預(yù)后進(jìn)行評估從而及時采取更有效的治療措施進(jìn)行相關(guān)治療具有重要意義。

現(xiàn)階段，分子生物學(xué)在腫瘤診治中得到廣泛應(yīng)用，對確定治療靶點(diǎn)具有較高的臨床價值。乳腺癌的發(fā)生受到多個基因的調(diào)控，其中雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，Her-2）等在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用亦得到多項研究的認(rèn)可，并可根據(jù)乳腺癌蛋白表達(dá)水平確定乳腺癌分型從而指導(dǎo)治療[15-17]。近年來Ki-67逐漸成為一個新的研究熱點(diǎn)，是目前較為肯定的核增殖標(biāo)記物，由于其半衰期短，故已成為檢測腫瘤細(xì)胞增殖活性最可靠的指標(biāo)[18-22]。因此對Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)水平和意義進(jìn)行研究可在分子學(xué)水平上加深對乳腺癌生物學(xué)行為的認(rèn)識，對預(yù)測乳腺癌臨床治療的療效、判斷乳腺癌患者的預(yù)后、優(yōu)化個體化治療方案等均有重要意義。因此，本研究對134例采用乳腺癌根治術(shù)治療患者的乳腺癌組織Ki-67、ER、PR及Her-2表達(dá)水平進(jìn)行檢測分析，根據(jù)ER、PR及Her-2表達(dá)確定乳腺癌分型，并分析Ki-67乳腺癌組織表達(dá)水平與乳腺癌亞型的關(guān)系，結(jié)果顯示，乳腺癌組織中的Ki-67蛋白陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，提示Ki-67與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，與前文的假設(shè)及Ignatiadis M等[23]的研究結(jié)果一致。Ki-67的乳腺癌組織表達(dá)水平在金華地區(qū)三陰型乳腺癌中的陽性表達(dá)率最高，其次為Her-2 陽性型乳腺癌，再次為Luminal B型乳腺癌，在Luminal A型乳腺癌中的陽性表達(dá)率最低，提示金華地區(qū)乳腺癌組織Ki-67表達(dá)水平與乳腺癌分型可能相關(guān)。進(jìn)一步的Logistic多因素分析結(jié)果顯示，Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織中的蛋白表達(dá)水平與乳腺癌亞型密切相關(guān)，對乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測有助于了解乳腺癌亞型，指導(dǎo)臨床對乳腺癌進(jìn)行更準(zhǔn)確有效的治療，從而有助于療效和預(yù)后的改善。

本研究亦比較金華地區(qū)不同乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)情況患者的局部復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率，發(fā)現(xiàn)金華地區(qū)Ki-67陽性表達(dá)的患者的局部復(fù)發(fā)率及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率均高于陰性表達(dá)患者，提示金華地區(qū)乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)情況與局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，進(jìn)一步的Logistic多因素分析結(jié)果顯示Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達(dá)水平與局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)，乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)情況可反映預(yù)后情況，可用于局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況的評估。本研究進(jìn)一步采用ROC曲線分析金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達(dá)預(yù)測局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況的價值。在ROC曲線下面積>0.5的情況時曲線下面積越接近于1則提示評估價值越好，而本研究中金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)預(yù)測局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等預(yù)后的曲線下面積均接近0.9，金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達(dá)預(yù)測局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的價值良好。因此，對金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織中Ki-67蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測有助于早期預(yù)知不良預(yù)后風(fēng)險，從而盡早采取積極措施改進(jìn)治療方案，提高療效和改善預(yù)后。而金華地區(qū)Ki-67蛋白表達(dá)情況與乳腺癌分型及預(yù)后等均相關(guān)，提示Ki-67可能成為乳腺癌基因治療的靶基因，對Ki-67進(jìn)行靶向抑制可能有助于乳腺癌療效和預(yù)后的改善，對Ki-67進(jìn)行靶向抑制治療乳腺癌的效果有待進(jìn)一步的實驗研究驗證。

綜上所述，金華地區(qū)乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達(dá)高、與乳腺癌亞型及局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況均相關(guān)，且其對預(yù)后情況的預(yù)測價值良好。因此，金華地區(qū)乳腺癌組織Ki-67蛋白表達(dá)情況的檢測有助于確定其乳腺癌亞型和預(yù)后的早期評估，為其臨床治療提供依據(jù)，從而有利于療效和預(yù)后的改善。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 羅湘濤，胡欣，胡巧英，等. 浙江省腫瘤醫(yī)院2008～2012年住院疾病譜和地區(qū)分布分析[J]. 中國腫瘤，2013，22（12）：949-952.

[2] García-Martínez E，Gil GL，Benito AC，et al. Tumor-infiltrating immune cell profiles and their change after neoadjuvant chemotherapy predict response and prognosis of breast cancer[J]. Breast Cancer Res，2014，16（6）：488.

[3] 徐強(qiáng)音，陳翔，陳燕玉，等. 新輔助化療聯(lián)合保乳術(shù)治療Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌的療效[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2013，34（4）：611-613.

[4] Cockburn JG，Hallett RM，Gillgrass AE，et al. The effects of lymph node status on predicting outcome in ER+/HER2-tamoxifen treated breast cancer patients using gene signatures[J]. BMC Cancer，2016，16（1）：555.

[5] 鄭亞軍，謝忠士. Ⅲ期可手術(shù)乳腺癌患者46例新輔助化療5年存活率[J]. 中國老年學(xué)雜志，2012，32（12）：2643.

[6] Dmitrenko AP. Lateral differences in Ki-67 in breast cancer[J]. Mol Clin Oncol，2016，4（6）：1041-1044.

[7] 魏曉麗，張玉，劉敏麗，等. 乳腺癌組織中Survivin、Ki67的表達(dá)變化及意義[J]. 山東醫(yī)藥，2013，53（3）：12-14.

[8] 謝靜靜，蘇永輝，姜永冬，等. Ki-67在三陰性乳腺癌中的臨床病理意義[J]. 國際免疫學(xué)雜志，2016，39（3）：218-221.

[9] 胡俊艷，趙春英. Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)與ER、CerbB-2的相關(guān)性研究[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2015，17（4）：334-336.

[10] 連臻強(qiáng)，何潔華，王曦，等. 乳腺癌不同分子亞型的臨床特點(diǎn)和生存分析[J]. 中華乳腺病雜志，2009，3（20）：139-146.

[11] 邵紅星，朱匡紀(jì)，蔡祖華，等. 2003～2005年金華市婺城區(qū)城市居民惡性腫瘤監(jiān)測分析[J]. 疾病監(jiān)測，2006，21（10）：544-547.

[12] 張振，馮云，曹效忠，等. 不同分子分型乳腺癌行保乳乳癌根治術(shù)的預(yù)后分析[J]. 中外醫(yī)療，2015，34（6）：19-21.

[13] Pimentel C，Becquet M，Lavoue V，et al. Ovarian metastases from breast cancer：A series of 28 cases[J]. Anticancer Res，2016，36（8）：4195-4200.

[14] Kos Z，Dabbs DJ. Biomarker assessment and molecular testing for prognostication in breast cancer[J]. Histopathology，2016，68（1）：70-85.

[15] 王冰濤，尚宏清，李偉，等. ER、PR、p53表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)研究和臨床意義[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2014， 16（2）：231-234.

[16] Li MH，Hou CL，Wang C，et al. HER-2，ER，PR status concordance in primary breast cancer and corresponding metastatic lesion in lymph node in Chinese women[J]. Pathol Res Pract，2016，212（4）：252-257.

[17] 李文婷，王瑩，張銀華，等. 年輕女性乳腺癌中ER、PR、HER-2和Ki67的表達(dá)與臨床病理意義[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，37（9）：783-786.

[18] 王寶娜，王翔，王靖，等. Ki67在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 中華腫瘤雜志，2014，36（4）：273-275.

[19] 李帆. ER、PR、HER-2、Ki67在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 醫(yī)學(xué)綜述，2014，20（13）：2361-2363.

[20] 楊麗麗，梁莉萍，趙峰，等. ER、PR、HER-2、Ki67、Nm23、P53在多中心性乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，37（11）：964-967.

[21] 王玉樓，張英艷，孫玉琢，等. 乳腺癌患者組織中EphA4和Ki67的表達(dá)及其臨床意義[J]. 中國老年學(xué)雜志，2016， 36（13）：3197-3198.

[22] 董歡，林燕蘋，應(yīng)學(xué)翔，等. Ki67、增殖細(xì)胞核抗原在不同分子分型乳腺癌組織中的表達(dá)及意義[J]. 中華乳腺病雜志（電子版），2013，7（2）：15-20.

[23] Ignatiadis M，Azim HA Jr，Desmedt C，et al. The genomic grade assay compared with Ki67 to determine risk of distant breast cancer recurrence[J]. JAMA Oncol，2016，2（2）：217-224.

（收稿日期：2016-09-02）