核定位信號肽在超聲靶向破壞微泡介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染治療犬心肌梗死中的促進(jìn)作用

崔晶晶 曹省 陳金玲 鄧傾 王益佳 周青 胡波

·實驗研究·

核定位信號肽在超聲靶向破壞微泡介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染治療犬心肌梗死中的促進(jìn)作用

崔晶晶 曹省 陳金玲 鄧傾 王益佳 周青 胡波

目的 探討超聲靶向破壞微泡（UTMD）技術(shù)聯(lián)合核定位信號（NLS）肽增強(qiáng)犬心肌hAng-1基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率的可行性及應(yīng)用價值。方法構(gòu)建犬急性心肌梗死模型并分組進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染治療，每組8只。A組：建模成功后未行治療，即空白對照組；B組：建模成功后超聲介導(dǎo)質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染；C組：建模成功后超聲介導(dǎo)質(zhì)粒DNA加經(jīng)典NLS肽轉(zhuǎn)染；D組：建模成功后超聲介導(dǎo)質(zhì)粒DNA加突變NLS肽轉(zhuǎn)染；E組：建模成功后超聲介導(dǎo)質(zhì)粒DNA加經(jīng)典NLS肽和入核阻滯劑轉(zhuǎn)染。建模后轉(zhuǎn)染前，HE染色觀察心肌梗死后病理變化情況。轉(zhuǎn)染后3 d，心肌冰凍切片檢測EGFP標(biāo)記的hAng-1基因表達(dá)情況，RT-PCR和Western Blot分別從基因和蛋白水平方面檢測心肌組織hAng-1基因表達(dá)效率。轉(zhuǎn)染后28 d，α-SMA免疫組化定位新生毛細(xì)血管，并在顯微鏡下計數(shù)新生微血管密度；Masson染色及心臟大體標(biāo)本評價心肌梗死區(qū)纖維化程度及面積。建模前、建模后1周基因轉(zhuǎn)染前及基因轉(zhuǎn)染后28 d分別應(yīng)用二維超聲心動圖檢測各組犬射血分?jǐn)?shù)及室壁運動情況，比較各組基因治療效果。結(jié)果①A、B、C組心肌組織中綠色熒光蛋白表達(dá)量逐漸增高，C、D、E組逐漸減少，Western Blot和RT-PCR檢測結(jié)果顯示hAng-1蛋白及基因表達(dá)趨勢與綠色熒光蛋白一致，C組與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。②免疫組化結(jié)果顯示C組毛細(xì)血管密度最高，與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；……