血小板—中性粒細胞聚集體在急性ST段抬高型心肌梗死患者中表達的研究

董海秋，董梅，任法新

冠心病研究

血小板—中性粒細胞聚集體在急性ST段抬高型心肌梗死患者中表達的研究

董海秋，董梅，任法新

目的：本文探討血小板—中性粒細胞聚集體（PNA） 在急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者中的表達。

心肌梗死；血小板聚集；血小板—中性粒細胞聚集體

(Chinese Circulation Journal, 2017, 32:145.)

急性心肌梗死的主要發病機制是由冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂繼發血栓形成，突然阻塞冠狀動脈管腔，導致心肌缺血壞死引起。在這個過程中，活化的血小板和白細胞發揮了重要作用。大量白細胞和血小板在急性缺血心肌組織中活化[1]，活化后的血小板ɑ顆粒表達釋放大量的P-選擇素，一方面促進炎癥性血小板介質在內皮細胞表面沉積，增強對單核細胞的趨化作用[2]；另一方面與白細胞P-選擇素糖蛋白配基-1（PSGL-1）結合形成血小板—白細胞聚集體（PLA）。PLA形成后，通過血小板的橋接作用，促進白細胞在局部損傷內皮細胞的黏附、滾動和滲出，進入內皮細胞下，促進附壁血栓的形成[3]。因此，PLA是反映體內血栓負荷及炎癥反應的敏感指標[4]。新近有研究發現，高水平PLA與急性冠狀動脈綜合征發生風險呈正相關，是預測急性冠狀動脈綜合征的重要指標之一[5]。也有研究表明，高水平的PLA是急性非ST段抬高型心肌梗死預后不良的標志物[6]。本研究主要探討血小板—中性粒細胞聚集體（PNA）在STEMI患者中的表達。

1 資料與方法

研究對象：選擇2015-10至2016-04在我院心內科住院的急性ST段抬高型心肌枉死（STEMI）患者40例為STEMI組，平均年齡（70.0±5.4）歲。納入標準：持續性胸痛（>30 min），且對硝酸甘油反應差；12導聯標準心電圖示兩個或兩個以上相鄰導聯ST段抬高≥0.2 mV；肌酸激酶、肌酸激酶同工酶或相對指數≥正常值上限2倍；發病12 h以內。另選擇同期體檢中心健康查體者30例作為對照組，均不伴冠心病，平均年齡（68.4±1.6）歲。所有入院患者無陳舊性心肌梗死、風濕性心臟病、原發性心肌病、甲狀腺疾病、結核病、惡性腫瘤、急性感染、自身免疫病等疾病。

PLA測定方法：納入患者均在抗血栓治療前，肘靜脈采血3 ml并放入含檸檬酸鈉抗凝血試管中，采血時不能壓迫壓脈帶，并棄去開始2 ml，血標本2 h內應用流式細胞儀（BD FACSCanto Ⅱ流式細胞儀）分析檢測。根據CD45熒光、CD45-FS(直向散射光)及CD45-SS(側向散射光)設門，將外周血白細胞分為中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞三群細胞。每群細胞分為CD41a陽性（與血小板結合）和CD41a陰性（無血小板結合）2組亞群，計算相應細胞群中血小板—白細胞數量百分比，分別記錄PNA、血小板—單核細胞聚集體（PMA）、血小板—淋巴細胞聚集體（PlyA）值。通過流式細胞儀分析血

統計學處理: 采用SPSS20.0進行統計學分析。計量資料以均數±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗和方差分析，計數資料的比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。清中PNA、PMA、PlyA濃度。心肌肌鈣蛋白I檢測采用心肌肌鈣蛋白I檢測卡，肌酸激酶同工酶測定采用酶法。

2 結果

2.1 一般臨床資料

兩組患者一般臨床資料比較（表1）。兩組在年齡、性別、冠心病危險因素（如體重指數、吸煙、高血壓、糖尿病及高血脂）等方面差異均無統計學意義（P均>0.05）。STEMI組PNA明顯高于對照組（P<0.05），STEMI組肌酸激酶同工酶與肌鈣蛋白I水平明顯高于對照組（P<0.01）；差異均有統計學意義。

表1 兩組患者一般臨床資料比較（）

表1 兩組患者一般臨床資料比較（）

注：STEMI：急性ST段抬高型心肌梗死；PNA：血小板—中性粒細胞聚集體；PMA：血小板—單核細胞聚集體； PlyA：血小板—淋巴細胞聚集體

項目 對照組 (n=30) STEMI組 (n=40) P值年齡 (歲) 68.4±1.6 70.0±5.4 0.218男性[例 (%)] 18 (60.0) 26 (65.0) 0.362體重指數 (kg/m2) 24.0±1.9 24.8±1.8 0.972吸煙[例 (%)] 15 (50.0) 23 (57.5) 0.459高血壓[例 (%)] 19 (63.3) 23 (71.9) 0.472糖尿病[例 (%)] 10 (33.3) 15 (37.3) 0.851空腹血糖 (mmol/L) 5.1±2.0 5.2±1.5 0.751尿酸 (μmol/L) 326.3±15.6 324.2±15.7 0.918總膽固醇 (mmol/L) 5.5±1.1 5.7±1.2 0.428高密度脂蛋白膽固醇 (mmol/L) 1.1±0.1 1.0±0.4 0.458低密度脂蛋白膽固醇 (mmol/L) 3.4±0.7 3.3±0.7 0.644甘油三酯 (mmol/L) 1.5±0.2 1.5±0.2 0.733血小板計數 (×109/L) 254±47 233±55 0.136白細胞計數 (×109/L) 7.4±3.2 12.1±2.5 0.089 PNA (%) 20.1±18.9 30.6±9.3 <0.05 PMA (%) 77.3±6.2 81.1±11.9 0.312 PlyA (%) 7.7±4.3 8.2±3.7 0.254肌酸激酶同工酶峰值 (ng/ml) 3.6±14.2 187.0±129.0 <0.01肌鈣蛋白I (μg/L) 0.3±0.1 15.9±2.4 <0.01

2.2 外周血各型白細胞的流式細胞分析圖譜比較

流式細胞分析圖譜顯示：與對照組相比，入院時STEMI組PlyA水平（P=0.245）和PMA水平（P=0.312）升高，但差異無統計學意義，而PNA水平（P<0.05)明顯高于對照組水平，差異有統計學意義。

2.3 相關性分析

PLA水平與肌酸激酶同工酶和肌鈣蛋白I相關性的比較（圖1、圖2）：分析表明，PLA水平與肌酸激酶同工酶（r=0.4992，P<0.01）和肌鈣蛋白I（r=0.4365，P<0.01） 呈正相關。

圖1 血小板—白細胞聚集體水平與肌酸激酶同工酶的相關性

圖2 血小板—白細胞聚集體水平與肌鈣蛋白I的相關性

3 討論

相關報道表明，臨床上約有25%的STEMI患者早期發病癥狀不典型[7]。盡早對該類患者進行診斷并確定治療方法對改善不典型癥狀STEMI患者預后具有重要的意義。本研究表明，在STEMI患者中PNA水平明顯增高，提示高水平的PNA可以作為急性心肌梗死的新指標，對診斷STEMI具有一定預測價值。

PLA從廣義上講包括PNA、PMA和PlyA。在腦梗死和糖尿病患者中，PLA水平明顯升高，而且在一定程度上能夠反映斑塊穩定性[8,9]。有報道已證實與非急性冠狀動脈綜合征患者相比，急性冠狀動脈綜合征患者中PNA、PMA、PlyA水平明顯升高，具有顯著差異[10-12]。另外，對于非STEMI患者，高水平的PLA提示患者臨床預后不佳[6,13]。最近研究表明，在STEMI患者中，增加的白細胞及血小板計數提示臨床預后不佳[14]。其原因可能是中性粒細胞在心肌缺血—再灌注過程中分泌多種激素（如血栓素-B2、白三烯-B4），不僅導致血管收縮，同時產生PNA[15]。活化的PNA誘導中性粒細胞胞外誘捕網的釋放[16,17]，而中性粒細胞胞外誘捕網通過調節血栓形成過程中的中介產物，參與血栓的形成，導致微血管的堵塞[18,19]。

本研究結果證實在STEMI患者中PNA、PMA、PlyA水平明顯升高，這與既往研究結果一致。在STEMI患者中大量血小板和白細胞被激活，PLA水平顯著升高，且PLA水平與病情嚴重程度呈正相關[20,21]。在急性心肌梗死患者中，PLA水平升高是炎癥和血栓機制相互作用的結果，炎癥可導致局部血栓形成，而血栓形成又可加劇炎癥反應，形成惡性循環。本研究從炎癥—血栓機制角度探討PLA與急性心肌梗死的關系，證實PLA對預測STEMI的發生具有一定價值。更重要的是，本研究發現PLA水平與肌酸激酶同工酶和肌鈣蛋白I呈正相關，這可能與PNA促進梗死區域處炎癥反應有關。

總之，本研究表明，在STEMI患者中，PLA包括PNA、PMA、PlyA水平均較對照組升高，尤以PNA更顯著，提示高水平的PLA尤其是PNA可以作為急性心肌梗死的一個新指標，但有關其是否可作為預測急性心肌梗死發生的指標，仍需進一步研究。

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Expression of Platelet-neutrophil Aggregates in Patients With ST-segment Elevation Myocardial Infarction

DONG Hai-qiu, DONG Mei, REN Fa-xin.
Department of Cardiology,Yantai Yuhuangding Hospital Affiliated to Qingdao University Medical College,Yantai (264000), Shandong, China

REN Fa-xin, Email:drren@163.com

Objective: This work studied platelet-neutrophil aggregates (PNA) expression in patients with acute ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI).Methods: Our research included in 2 groups: STEMI group, n=40 patients admitted in our hospital and Control group, n=30 normal subjects. Blood levels of PNA, platelet-monocyte aggregates (PMA) and platelet-lymphocyte aggregates (PlyA) were measured by flow cytometry at admission and the results were compared between 2 groups.Results: Compared with Control group, STEMI group had similar blood levels of PlyA and PMA, P=0.245 and P=0.312; while increased blood level of PNA, P<0.05. Correlation analysis showed that platelet-leukocyte aggregates (PLA) level was positively related to CK-MB (r=0.4992, P<0.01) and cTnI (r=0.4365, P<0.01).Conclusion: Blood level of PLA, especially PNA was significantly higher in STEMI patients which suggested that increased PNA might be sued as a new index for AMI diagnosis in clinical practice.

Myocardial infarction; Platelet aggregation; Platelet-neutrophil aggregates

2016-06-08）

（編輯：漆利萍）

山東省自然科學基金聯合專項（ZR2015HL004）；煙臺市科技發展計劃（ 2015WS031）

264000 山東省煙臺市，青島大學醫學院附屬煙臺毓璜頂醫院 心血管內科

董海秋 碩士研究生 研究方向為 急性心肌梗死 Email:943118755@qq.com 通訊作者：任法新 Email:drren@163.com

R542.22

A

1000-3614（2017）02-0145-04

10.3969/j.issn.1000-3614.2017.02.008

方法：共計納入于我院心內科住院的STEMI患者40例為STEMI組，同期收集健康查體者30例為對照組。于入院即刻抽取靜脈血，應用流式細胞儀分別檢測PNA、血小板—單核細胞聚集體（PMA）和血小板—淋巴細胞聚集體（PlyA）表達水平。比較兩組PNA、PMA和PlyA表達水平的差異。

結果：與對照組相比，STEMI組PlyA（P=0.245）和PMA（P=0.312）水平升高，但差異無統計學意義。STEMI組PNA水平明顯高于對照組（P<0.05)，差異具有統計學意義。相關性分析表明，血小板-白細胞聚集體（PLA） 水平與肌酸激酶同工酶（r=0.4992，P<0.01）和肌鈣蛋白I（r=0.4365，P<0.01）呈正相關。

結論：本研究表明，在STEMI患者中PLA尤其是PNA水平明顯增高，提示高水平的PNA可以作為急性心肌梗死的一個新指標。