云南新產區楊梅枝枯的病原菌鑒定及土壤營養元素分析

吳陽春，任海英，戚行江，*，鄭錫良，梁森苗

(1.浙江師范大學 化學與生命科學學院，浙江 金華 321004； 2.浙江省農業科學院 園藝研究所， 浙江 杭州 310021)

云南新產區楊梅枝枯的病原菌鑒定及土壤營養元素分析

吳陽春1，2，任海英2，戚行江2，*，鄭錫良2，梁森苗2

(1.浙江師范大學 化學與生命科學學院，浙江 金華 321004； 2.浙江省農業科學院 園藝研究所， 浙江 杭州 310021)

為了明確云南新產區楊梅枝枯的原因，利用科赫氏法則確定了引起枝枯的病原菌，依據形態學特征，結合ITS序列分析對病原菌進行鑒定，并且對發病定植苗及其容器苗、健康定植苗和本地生長的楊梅樹土壤元素含量進行了分析。結果表明：引起云南楊梅枝枯的病原菌為異色擬盤多毛孢菌(Pestalotiopsisversicolor)；果園內的發病定植苗與健康定植苗相比，磷、硼、鉀、鈣、鋅元素含量都顯著升高，升高幅度在55.8%～511.5%，氮的含量也略有升高(9.2%)，說明果園內的定植苗處于一種相對富營養的土壤環境；與本地生長的健康楊梅樹土壤相比，容器內的植株土壤磷、鉀含量大大升高，升高幅度為203.2%～431.6%，鎂的含量也略有升高(27.6%)，其他營養元素含量都顯著降低，降低幅度為28.6%～96.9%，表明容器苗的土壤相對本地生長的健康楊梅樹來說，各元素含量不太均衡。該研究結果可為指導云南楊梅新產區的病害防控提供依據。

楊梅；枝枯；病原菌；異色擬盤多毛孢菌；土壤營養元素含量

楊梅(Myricarubra)是我國南方特有水果，果實甜酸適口，風味獨特，營養價值和經濟價值較高，在國內外享有盛譽。目前，全國楊梅栽培面積已超過33.33萬hm2。近年來，楊梅病害逐年增加。國內外對楊梅病害研究有以下報道：楊梅根腐病[1]、楊梅銹病[1]、楊梅干枯病[1]、楊梅枝枯病[1]、楊梅褐斑病[2]、楊梅癌腫病[3]、楊梅根結線蟲病[4]、楊梅梢枯病[5]，以及近年來發現的具有發病快、傳染性強等特點的楊梅凋萎病[6]。2015年，在云南德宏芒市的果園調查發現，當地楊梅出現了一種新的病害，初始現癥狀為當年生枝梢急性凋萎，即楊梅枝梢葉片首先急性青枯，后漸漸呈枯黃、褐黃直至枯死，癥狀初現時葉片不脫落，1～2個月后葉片才漸漸開始脫落，病害導致植株大面積死亡。本文通過病原菌分離、致病性測定，形態特征結合基因序列分析，明確了該病的病原菌。對發病的定植苗、容器苗以及健康的定植苗和健康植株的根圍土壤進行營養元素測定和比較，初步探究發病后土壤營養元素含量的變化，為云南當地楊梅病害防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

定植楊梅苗、容器楊梅苗和本地健康生長楊梅樹樣品均采自云南德宏芒市的果園，定植楊梅苗和容器楊梅苗為3年生，本地健康生長楊梅樹為20年生。采樣同時，對田間自然感病植株進行拍照記錄，并對發病癥狀進行觀察和描述。菌株接種檢測致病性的健康植株枝條采自浙江嘉興海寧的8年生東魁楊梅。

1.2 菌株分離純化

云南楊梅病原菌的分離采用常規的組織分離法：從發病植株上剪下發病枝條，分離成樹皮和樹干；在超凈工作臺上，用75%乙醇浸泡30 s，25%次氯酸消毒1 min，再用75%乙醇浸泡30 s，最后用無菌水漂洗3次；切成5 mm×5 mm小塊，放置于PDA、NA、GS培養基上，每個培養基接5個點，重復3次，以及1個對照試驗。待平板上長出菌落后，真菌挑取邊緣菌絲進行純化，細菌采用平板劃線法進行純化，每個樣均純化15個，然后置于28 ℃恒溫箱中培養。

1.3 分離菌的致病性測定

參考任海英等[7]的病原菌接種方法，選擇直徑為0.6～0.9 cm的1年生東魁楊梅枝條，每根枝條在離頂端5 cm處小心去除葉片1枚，在葉痕位置接種分生孢子懸浮液20 μL，以接種滅菌水作為對照，脫脂棉吸水保濕，保鮮膜輕輕纏繞固定。接種后的枝梢用適當大小的塑料袋輕輕套住保濕96 h，并置于25～30 ℃、相對濕度75%～85%的恒溫箱內，用三角瓶進行水培養，定期觀察各枝條的發病情況，發病后再對病枝進行菌株回分離，確認致病菌為接種菌株并與原接種菌進行比較，如果一致則明確為致病菌。

1.4 病原菌形態觀察

針對1.3節病原菌接種的楊梅枝條進行菌株形態觀察，同時觀察病原菌在PDA、NA、GS平板上的菌落特征，顯微觀察菌絲體、分生孢子等的形態特征，對病原菌進行形態學鑒定。

1.5 菌株分子生物學鑒定

將純化后的菌株轉接至新的平板，細菌培養2 d，真菌培養7 d。刮取細菌菌落或真菌菌絲，提取其基因組DNA，按照生工生物工程(上海)股份有限公司的基因組DNA快速抽提試劑盒使用說明提取。

用16S rDNA序列的通用引物對細菌總DNA進行擴增。16S rDNA序列擴增上游引物：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，下游引物：5′-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3′。PCR擴增體系(25 μL)：TaqPCR Master Mix[生工生物工程(上海)股份有限公司]12.5 μL，DNA擴增模板0.5 μL，上下游引物(10 μmol·L-1)各1 μL，ddH2O 10 μL。PCR擴增條件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，30個循環；72 ℃ 10 min。反應終止后，取2 μL PCR產物，用1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測。

ITS4/5的上游引物5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′，下游引物5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′，擴增菌株的ITS DNA序列。反應體系25 μL：TaqPCR Master Mix[生工生物工程(上海)股份有限公司]12.5 μL，上下游引物 (10 μmol·L-1) 各1 μL，基因組DNA(50～100 ng·μL-1) 0.5 μL，ddH2O 補足至25 μL。反應程序為：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 80 s，33個循環；72 ℃ 7 min。PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳回收目標DNA片段。

按照寶生物工程(大連)有限公司的pMD18-T載體說明書進行上述擴增序列的連接轉化，挑選白色克隆，進行PCR驗證。選擇陽性克隆送生工生物工程(上海)股份有限公司測序，采用Blast軟件在GenBank數據庫中進行同源性比對。

1.6 土壤營養元素檢測

取發病楊梅園內健康楊梅樹和發病楊梅樹周圍10～20 cm土壤，及云南本地生長健康的楊梅樹體周圍土壤，送浙江省農業科學院農產品質量標準研究所檢測土壤的營養成分。

1.7 數據處理

用Excel和SPSS 17.0軟件對數據進行處理分析。

2 結果與分析

2.1 病害癥狀分析

楊梅發病后，初始現癥狀為當年生枝梢急性凋萎(圖1-A)，即楊梅枝梢葉片首先急性青枯，后漸漸呈枯黃、褐黃直至枯死；癥狀初現時葉片不脫落(圖1-B)，1～2個月后葉片才漸漸開始脫落(圖1-C)。9—10月雨水多、濕度大時，落葉后的葉痕位置有白色絨毛狀菌絲長出，有時會蔓延到枝干上，枝條傷口處也會出現白色絨毛狀菌絲(圖1-C)。這與求盈盈等[6]和Ren等[8]報道的楊梅凋萎病癥狀相似。

2.2 致病菌形態學鑒定

菌株在PDA培養基上菌絲呈白色絨毛狀，生長迅速，菌落背面成花瓣狀，培養一段時間后出現分生孢子(圖2-A)。分生孢子呈紡錘形，4隔，中間3個細胞著色，上面2個色胞呈深褐色，第3個色胞呈淡褐色，頂部和尾部無色孢均呈近三角形，頂端多數著生3根無色透明附著絲，基部附屬絲1根，初步鑒定該菌為異色擬盤多毛孢菌Pestalotiopsisversicolor。(圖2-B)。

圖1 云南的楊梅病害癥狀Fig.1 Symptoms of diseased bayberry in Yunnan Province

圖2 病原菌菌落(A)和分生孢子(B)形態Fig.2 Morphology of colone (A) and conidia (B) of the pathogen

2.3 致病菌的分子生物學鑒定

PCR擴增病原菌的DNA，獲得500～600 bp的DNA序列。對PCR擴增產物進行測序，然后在GenBank中進行Blast分析，發現所得序列與擬盤多毛孢屬同源性最高，與異色擬盤多毛孢菌(P.versicolor)的ITS序列(ITS1-5.8S-ITS2 rDNA，JN861774.2)的相似性達99%。結合形態學與分子生物學鑒定結果，將該病原菌鑒定為異色擬盤多毛孢菌。

2.4 土壤營養元素分析

與健康楊梅樹相比，果園內發病定植楊梅苗周圍土壤的磷、硼、鉀、鈣、鋅元素含量均顯著升高(55.8%～511.5%)，氮含量也略有升高(9.2%)，這說明果園的發病定植苗處于一種相對富營養的土壤環境。與本地健康生長楊梅樹周圍土壤相比，容器內的楊梅苗土壤磷和鉀含量大大升高，升高幅度為203.2%～431.6%，鎂含量略有升高(27.6%)，其他營養元素含量都顯著降低，降低幅度為28.6%～96.9%，這說明相對本地健康生長楊梅樹來說，容器苗的土壤各元素含量不均衡(表1)。

表1 云南發病楊梅和健康楊梅根圍土壤營養元素含量

Table 1 Rhizosphere soil nutrient contents of diseased and healthy bayberry in Yunnan Province

mg·kg-1

Dps， 發病定植楊梅苗；Dcs，發病容器楊梅苗；Hps，健康定植楊梅苗；Nhp， 本地健康生長楊梅樹；表中同列數據后無相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Dps， Disease planting-stocks; Dcs， Disease container seedlings; Hps， Healthy planting-stocks; Nhp， Native healthy trees; Data marked without the same lowercase letter in the same column indicated significant differences atP<0.05.

3 討論

本研究表明，引起云南德宏芒市楊梅發生枝枯的致病菌是異色擬盤多毛孢菌，這與Ren等[8]報道的楊梅凋萎病菌相同。本研究采用rDNA-ITS序列分析法[9-11]，結合傳統形態學特征，確定了該病菌為異色擬盤多毛孢菌，這是首次在云南發現由該病菌引起的楊梅病害。果園內發病定植苗與健康定植苗相比，磷、硼、鉀、鈣、鋅元素含量均顯著升高，氮含量也略有升高，這說明果園內定植苗處于一種相對富營養的土壤環境中。與健康本地生長樹相比，容器內的植株土壤磷、鉀和鎂含量大大升高，但是其他營養元素含量均顯著降低，說明容器苗的土壤各元素相對來說不均衡。

擬盤多毛孢屬真菌是一類分布廣泛的植物病原菌，分為寄生、腐生和內生種類[11]。擬盤多毛孢菌可使番石榴(Psidiumguajava)產生果腐癥狀[12]，引起藍莓(Vacciniumcorymbosum)的頂梢發生枯死和潰瘍癥狀[13]，也可使采后鱷梨莖端腐爛[14]，使杧果(Mangiferaindica)產生灰色葉斑癥狀[15]，導致采后枇杷(Eriobotryajaponica)腐爛[16]，并能引起杧果果腐病[17]和杧果苗圃葉枯病[18]。異色擬盤多毛孢菌侵染植物引起病害的報道較多，例如能引起紅海欖赤斑病[19]、澳洲堅果葉斑病[20]、楊梅凋萎病[8]和葉斑病[21]。楊梅凋萎病的致病菌是異色擬盤多毛孢菌(P.versicolor)和小孢擬盤多毛孢菌(P.microspora)[8]，而從云南德宏芒市枝枯病害樹體樣品中只分離出異色擬盤多毛孢菌，這可能是由于采樣地點不同引起的，或者云南分離樣品數量較少。擬盤多毛孢菌萌發和侵染的最適宜溫度為20～30 ℃和25～35 ℃，最適宜相對濕度是60%～80%，其分生孢子能夠利用多種營養萌發。對擬盤多毛孢菌致病菌傳播規律進行研究發現，浙江地區的楊梅凋萎病周年發生，發病高峰期集中在9月中旬至11月初，且果園內海拔低、流水沖刷嚴重的位置先發病[22-23]。由于浙江和云南環境和氣候差異較大，發病規律可能存在較大差異，云南的異色擬盤多毛孢菌侵染楊梅的規律需要深入研究。目前，已經篩選出包括苯醚甲環唑和咪鮮胺等低毒高效防控藥劑，生物有機肥強壯樹勢等一套綜合防控技術防治楊梅凋萎病[24]，云南的楊梅枝枯病害防控可以借鑒此方法。由于云南是楊梅的新產區，在苗木引進時要注意引進抗病及健康苗木[25]。還可以利用實時熒光定量PCR的方法檢測苗木是否攜帶病原菌[26]，杜絕病菌隨著苗木進入新種植區。

營養元素對植物的健康生長以及抗病性至關重要。研究表明，氮素信號會影響植物的感病性或抗病性[27]，鉀元素和硼元素可以增強植物抗病性[28-30]，植物產生抗病反應的早期信號之一是鈣離子的流入，并且鈣離子參與過敏性壞死反應[31-33]。楊梅凋萎病與營養元素也有著密切關系。與健康楊梅樹根圍土壤相比，浙江成年楊梅樹發生凋萎病后，鈣含量顯著升高[34]，但是氮含量降低[35]。本研究中云南的3年生幼苗發病后，土壤鈣和氮含量均高于健康植株，這種差異可能是因為云南定植楊梅是3年生小苗，人工施氮肥量大，幼樹部分枝梢死亡后失去吸收氮元素的能力，但是健康樹氮吸收量大，所以取樣檢測的健康樹體根圍土壤氮含量低于病樹；而浙江成年楊梅樹人工施肥量低，而且健康樹需氮量低，導致病樹根圍土壤氮含量低于健康樹，這也從側面說明土壤中營養元素含量與楊梅發病相關，但不是根本病因。生產中培養健康樹勢，增強樹體抗病性，必須根據樹齡、樹勢、土壤不同做到均衡營養。

[1] 方華生， 曹若彬. 浙江省楊梅和山核桃初次報道的幾種病害 [J]. 浙江農業大學學報， 1986 (4): 433-438. FANG H S， CAO R B. Several new diseases of bayberry andCathayhickory[J].JournalofZhejiangAgriculturalUniversity， 1986 (4): 433-438. (in Chinese with English abstract)

[2] 繆松林， 戚行江， 方華生. 楊梅褐斑病的初步研究 [J]. 果樹科學， 1985 (1): 16-19. MIAO S L， QI X J， FANG H S. Priliminary studies on arbutus brown spot disease (Mycosphaerellamyricae) [J].JournalofFruitScience， 1985 (1): 16-19. (in Chinese with English abstract)

[3] 方華生， 曹若彬. 楊梅癌腫病病原細菌的鑒定 [J]. 浙江農業大學學報， 1984 (3): 309-314. FANG H S， CAO R B. Identification of causal organism of bacterial gall of bayberry [J].JournalofZhejiangAgriculturalUniversity， 1984 (3): 309-314. (in Chinese with English abstract)

[4] 陳寶永， 張紹升， 李增華. 楊梅根結線蟲病研究 [J]. 果樹科學， 1994 (3): 161-165. CHEN B Y， ZHANG S S， LI Z H. Studies on red bayberry root-knot nematodes [J].JournalofFruitScience， 1994 (3): 161-165. (in Chinese with English abstract)

[5] 鄭紀慈， 孟賜福. 楊梅枯梢病致病原因及防治對策的研究 [J]. 浙江農業科學， 1988 (3): 140-143. ZHENG J C， MENG C F. Research of cause and prevention strategy on shoot blight disease of bayberry [J].JournalofZhejiangAgriculturalSciences， 1988 (3): 140-143. (in Chinese)

[6] 求盈盈， 任海英， 王漢榮， 等. 楊梅突發性枝葉凋萎病發病調查與病原接種研究 [J]. 浙江農業科學， 2011 (1): 98-100. QIU Y Y， REN H Y， WANG H R， et al. Investigation and inoculation of pathogen on twig blight disease of bayberry [J].JournalofZhejiangAgriculturalSciences， 2011 (1): 98-100. (in Chinese)

[7] 任海英， 戚行江， 梁森苗， 等. 楊梅凋萎病綜合防治技術試驗 [J]. 浙江農業科學， 2014 (12): 1849-1855. REN H Y， QI X J， LIANG S M， et al. Integrated prevention on twig blight disease of bayberry [J].JournalofZhejiangAgriculturalSciences， 2014 (12): 1849-1855. (in Chinese)

[8] REN H Y， LI G， QI X J， et al. Identification and characterization ofPestalotiopsisspp. causing twig blight disease of bayberry (MyricarubraSieb. & Zucc) in China [J].EuropeanJournalofPlantPathology， 2013， 137(3): 451-461.

[9] 韋繼光， 徐同， 郭良棟， 等. 根據形態學和分子系統學特征界定擬盤多毛孢屬的種 [J]. 廣西農業生物科學， 2005 (4): 304-313. WEI J G， XU T， GUO L D， et al. Delimitation ofPestalotiopsisspecies based on morphological and molecular phylogenetic characters [J].JournalofGuangxiAgriculturalandBiologicalScience， 2005 (4): 304-313. (in Chinese with English abstract)

[10] JEEWON R， LIEW E C， SIMPSON J A， et al. Phylogenetic significance of morphological characters in the taxonomy ofPestalotiopsisspecies [J].MolecularPhylogenrticsandEvolution， 2003， 27(3): 372-383.

[11] JEEWON R， LIEW E C Y， HYDE K D， et al. Phylogenetic evaluation of species nomenclature ofPestalotiopsisin relation to host association [J].FungalDiversity, 2004， 17(1): 39-55.

[12] KEITH L M， VELASQUZE M E， ZEE F T. Identification and characterization ofPestalotiopsisspp. causing scab disease of guava，Psidiumguajava， in Hawaii [J].PlantDisease， 2006， 90(1): 16-23.

[13] JOSE＇G E， ERIKAX B， LISAM K， et al. Canker and twig dieback of blueberry caused byPestalotiopsisspp. and aTruncatellasp. in Chile [J].PlantDisease， 2008， 92(10): 1407-1414.

[14] VALENCIA A L， TORRES R， LATORRE B A. First report ofPestalotiopsisclavisporaandPestalotiopsisspp. causing postharvest stem end rot of avocado in Chile [J].PlantDisease， 2011， 95(4): 492.

[15] ISMAIL A M， CIRVILLERI G， POLIZZI G. Characterisation and pathogenicity ofPestalotiopsisuvicola， andPestalotiopsisclavispora， causing grey leaf spot of mango (MangiferaindicaL.) in Italy [J].EuropeanJournalofPlantPathology， 2013， 135(4): 619-625.

[16] PALOU L， MONTESINOS-HERRERO C， GUARDADO A， et al. First report ofPestalotiopsisclavisporacausing postharvest fruit rot of loquat in Spain [J].JournalofPlantPathology， 2013， 95(4): 69-77.

[17] 胡美姣， 楊波， 李敏， 等. 海南芒果果腐病病原菌鑒定及其生物學特性研究[J]. 熱帶作物學報， 2013， 34(8): 1564-1569. HU M J， YANG B， LI M， et al. Identification and biological characteristics of mango fruit rot pathogen [J].ChineseJournalofTropicalCrops， 2013， 34(8): 1564-1569. (in Chinese with English abstract)

[18] 丁榕， 王延麗， 李博勛， 等. 杧果擬盤多毛孢葉枯病菌鑒定及其生物學特性研究[J]. 中國南方果樹， 2010， 39(4): 20-24. DING R， WANG Y L， LI B X， et al. Identification and characterization of mango leaf blight disease pathogenPestalotiopsismangiferae[J].SouthChinaFruits， 2010， 39(4): 20-24. (in Chinese with English abstract)

[19] 張小媛， 何紅， 胡漢橋， 等. 紅海欖赤斑病病原菌鑒定及其生物學特性研究[J]. 植物病理學報， 2009， 39(6): 584-592. ZHANG X Y， HE H， HU H Q， et al. Identification and biological characteristics ofRhizophorastylosaleaf spot caused byPestalotiopsisversicolor[J].ActaPhytopathologicaSinica. 2009， 39(6): 584-592. (in Chinese with English abstract)

[20] 柳鳳， 楊順錦， 詹儒林， 等. 澳洲堅果葉斑病病原鑒定及其生物學特性[J]. 植物保護學報， 2011， 38(5): 437-442. LIU F， YANG S J， ZHAN R L， et al. Identification and biological characteristics of macadamia leaf spot caused byPestalotiopsisversicolor[J].ActaPhytophylacicaSinica， 2011， 38(5): 437-442. (in Chinese with English abstract)

[21] 孫化田， 曹若彬. 寄生果樹上的擬盤多毛孢屬真菌的鑒定[J]. 浙江農業大學學報， 1990， 16(S2): 179-185. SUN H T， CAO R B. Identification ofPestalotiopsisspp. parasiting on fruit trees [J].JournalofZhejiangAgriculturalUniversity， 1990， 16(S2): 179-185. (in Chinese with English abstract)

[22] 任海英， 戚行江， 梁森苗， 等. 環境因子對楊梅凋萎病菌分生孢子萌發及侵染的影響[J]. 果樹學報， 2015 (3): 474-480. REN H Y， QI X J， LIANG S M， et al. Effects of environmental factors on conidial germination and infection ofPestalotiopsisspp. causing twig blight disease of bayberry (Myricarubra) in China [J].JournalofFruitScience， 2015 (3): 474-480. (in Chinese with English abstract)

[23] 任海英， 梁森苗， 鄭錫良， 等. 楊梅凋萎病菌侵染、傳播及樹體內分布規律[J]. 浙江農業學報， 2016， 28(4): 630-639. REN H Y， LIANG S M， ZHENG X L， et al. Infection， spread and distribution of pathogens of twig blight disease on bayberry [J].ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2016， 28(4): 630-639. (in Chinese with English abstract)

[24] 任海英， 戚行江， 陳安良， 等. 十種殺菌劑對楊梅凋萎病的藥效評價[J]. 果樹學報， 2013 (5): 848-853. REN H Y， QI X J， CHEN A L， et al. Effects of fungicides on twig blight disease of bayberry [J].JournalofFruitScience， 2013 (5): 848-853. (in Chinese with English abstract)

[25] 張振蘭， 朱瀟婷， 任海英， 等. 楊梅種質資源對凋萎病抗性評價[J]. 浙江農業科學， 2014 (10): 1567-1569， 1571. ZHANG Z L， ZHU X T， REN H Y， et al. The resistance evaluation of twig blight disease on the bayberry germplasms [J].JournalofZhejiangAgriculturalSciences， 2014 (10): 1567-1569， 1571. (in Chinese)

[26] 任海英， 戚行江， 梁森苗， 等. 利用常規PCR和實時熒光定量PCR檢測楊梅凋萎病菌 [J]. 植物病理學報， 2016， 46(1): 1-10. REN H Y， QI X J， LIANG S M， et al. Use of conventional and real-time quantitative PCR to detectPestalotiopsis， the cause of bayberry twig blight [J].ActaPhytopathologicaSinica， 2016， 46(1): 1-10. (in Chinese with English abstract)

[27] SNOEIJERS S S， PéREZ-GARCA A， JOOSTEN M H A J， et al. The effect of nitrogen on disease development and gene expression in bacterial and fungal plant pathogens [J].EuropeanJournalofPlantPathology， 2000， 106(6): 493-506.

[28] PERRENOUND S. Potassium and plant health [M]. Basel， Switzerland: International Potash Institute， 1990: 1-5.

[29] RUARO L， LIMA N V D C， RIBEIRO J P J. Influence of boron， nitrogen sources and soil pH on the control of club root of crucifers caused byPlasmodiophorabrassicae[J].TropicalPlantPathology， 2009， 34(4): 231-238.

[30] THOMIDIS T， EXADAKTVLOU E. Effect of boron on the development of brown rot (Monilinialaxa) on peaches [J].CropProtection， 2010， 29 (6): 572-576.

[31] MA W， WALKER R， VERMA K， et al. Ca2+， cAMP and transduction of non-self perception during plant immune responses [J].ProceedingoftheNationalAcademyofScienceoftheUSA， 2009， 106(49): 995-1000.

[32] GRANT M， BROWN I， ADAMS S， et al. The RPM1 plant disease resistance gene facilitates a rapid and sustained increase in cytosolic calcium that is necessary for the oxidative burst and hypersensitive cell death [J].PlantJournal， 2000， 23(4): 441-450.

[33] XU H X. Role of calcium in signal transduction during the hypersensitive response caused by basidiospore derived infection of the cowpea rust fungus [J].PlantCell， 1998， 10: 585-597.

[34] 鄭錫良， 任海英， 徐云煥，等. 凋萎病對楊梅樹體鈣吸收和分配的影響 [J]. 浙江農業科學， 2013 (2): 183-185. ZHENG X L， REN H Y， XU Y H， et al. Effects of bayberry twig blight disease on calcium absorption and distribution [J].JournalofZhejiangAgriculturalSciences， 2013 (2): 183-185. (in Chinese)

[35] 鄭錫良， 任海英， 徐云煥， 等. 凋萎病對楊梅的氮吸收和分配的影響[J]. 中國南方果樹， 2013， 42(1): 64-66. ZHENG X L， REN H Y， XU Y H， et al. Effects of bayberry twig blight disease on nitrogen absorption and distribution [J].SouthChinaFruits， 2013， 42(1): 64-66. (in Chinese with English abstract)

(責任編輯 侯春曉)

Identification of twig blight pathogens ofMyricarubraand analysis on soil nutrient contents in Yunnan Province

WU Yangchun1，2， REN Haiying2， QI Xingjiang2，*， ZHENG Xiliang2， LIANG Senmiao2

(1.CollegeofChemistryandLifeScience，ZhejiangNormalUniversity，Jinhua321004，China; 2.InstituteofHorticulture，ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Hangzhou310021，China)

In order to clarify the cause of bayberry twig blight in Yunnan Provinces pathogens were isolated and identified by Koch’s rule， morphology and rDNA-ITS sequences. The soil nutrient contents of diseased planting-stocks， diseased container seedlings， healthy container seedlings and native healthy bayberry trees were tested. The results showed that the pathogens were identified asPestalotiopsisversicolor. The contents of phosphorus， boron， potassium， calcium and zinc in diseased planting-stocks significantly increased with 55.8%-511.5% and nitrogen increased with 9.2%， compared with the healthy planting-stocks， which meaned that the planting-stocks grew in the rich-nutrient soil. In addition， compared with the natively healthy bayberry trees， phosphorus and potassium in the diseased container seedlings were significantly increased with 203.2% and 431.6%， respectively， magnesium increased with 27.6%， other nutrient contents were all decreased， with 28.6%-96.9%， which indicated that nutrient contents in container seedlings soil were imbalance. The results of this study provided important base for bayberry disease prevention and control in Yunnan Province.

Myricarubra; twig blight; pathogen;Pestalotiopsisversicolor； soil nutrient content

10.3969/j.issn.1004-1524.2017.02.13

2016-07-25

浙江省重大科技專項重點農業項目(2012C12009-5)；公益性行業(農業)科研專項(201203089)

吳陽春(1990—)，男，浙江衢州人，碩士研究生，主要從事果樹病理學研究。E-mail: 460330840@qq.com

*通信作者，戚行江，E-mail:qixj@mail.zaas.ac.cn

S667.6

A

1004-1524(2017)02-0270-07