宮頸癌中自噬標記蛋白Beclin1、p62的表達及其臨床意義

陳 飛 余婷婷 李 俊

宮頸癌中自噬標記蛋白Beclin1、p62的表達及其臨床意義

陳 飛 余婷婷 李 俊

目的 研究宮頸癌中自噬標記蛋白Beclin1、p62表達的水平及其對臨床診斷及治療的意義。方法 選擇子宮頸鱗狀細胞癌組織標本140例，對納入的組織標本使用Beclin1和p62蛋白標記。陽性結果采用半定量評分方法進行判定。Beclin1、p62的表達與患者臨床特征相關性分析采用χ2檢驗。結果 Beclin1主要表達于細胞膜及細胞質，與正常子宮頸上皮相比，Beclin1在宮頸癌組織中的表達明顯降低(P<0.05)。但宮頸癌中Beclin1表達量與患者臨床病理特征無相關性(P>0.05)。p62在子宮頸鱗狀細胞癌組織細胞質中的表達明顯升高，且與淋巴結的轉移密切相關(P<0.05)。Beclin1和p62的陽性表達率之間未見明顯的相關性(P>0.05)。結論 Beclin1、 p62的表達量與子宮頸癌的發生發展相關，且p62的核漿轉移與子宮頸癌有相關性。臨床上，可根據Beclin1和p62的表達對疾病進展進行評估。

Beclin1；p62；宮頸癌；臨床意義

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:218～220)

子宮頸癌是常見女性惡性腫瘤之一，目前逐漸向年輕化發展[1]。子宮頸癌以鱗狀細胞癌最為常見，約為85%[2]。腫瘤的發生發展過程相對復雜，不僅僅是單個基因突變，而是多個不同復雜步驟以及環境共同作用的結果[3]。突變的基因不同、強度不同得到的結果也有差異。本次研究納入孝感市中心醫院收治的140例子宮頸鱗狀細胞癌組織標本進行Beclin1和p62蛋白標記，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2013年8月至2015年8月間醫院收治的140例子宮頸鱗狀細胞癌患者，年齡27～67歲，平均為(43.2±2.3)歲；其中82例年齡≤45歲，58例年齡>45歲；組織學分型：高分化24例，中分化78例，低分化38例；臨床分期：Ⅰ期76例，Ⅲa期64例；58例有淋巴結轉移；腫瘤直徑：66例≤4 cm，74例>4 cm。選擇同一時期40例子宮頸組織標本正常的人群作為正常對照組。

1.2 入選標準[4]

①患者術前進行病理分型為子宮頸鱗狀細胞癌，同時臨床分期處于Ⅰ～Ⅱa期；②無其他惡性腫瘤。③無糖尿病、高血壓病史。④無免疫系統疾病。⑤患者術前未實施過放化療以及免疫治療。

1.3 實驗室檢查

1.3.1 試劑 Beclin1檢測應用Anti-Beclin1兔抗人單克隆抗體(abcam公司生產，型號為ab51031)，p62檢測應用Anti-p62鼠抗人單克隆抗體(abcam公司生產，型號為ab56416)，試劑盒為SP免疫組化試劑盒(北京中杉金橋生物技術公司生產)，顯色劑為DAB(北京中杉金橋生物技術公司)。

1.3.2 方法 首先，石蠟包埋切片處理，之后進行HE染色和DBA顯色處理。然后，復染脫水處理。最后，顯微鏡下觀察。通過實驗室檢查可以得出，Beclin1蛋白在細胞膜及細胞質中表現為棕黃色顆粒物，p62陽性表達為棕黃色顆粒。運用雙盲法在光學顯微鏡下觀察切片(高倍×400)。每個高倍視野下計數100個細胞[5]，根據陽性細胞所占比值分為：無陽性細胞0分；陽性細胞所占比例<30.0%1分；陽性細胞所占比例≥30.0%2分。根據陽性細胞表達強弱分為：未出現著色0分，淺黃色或者黃色1分；棕黃色2分；棕褐色3分。將兩項的評分進行相乘，陰性為0～1分；陽性為2～6分。

1.4 統計學方法

統計學分析采用SPSS 15.0系統軟件，陽性結果采用半定量法判定。用卡方檢驗對Beclin1、p62的表達與子宮頸鱗狀細胞癌患者臨床特征之間的關系進行統計分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Beclin1與p62表達水平

宮頸癌組織中Beclin1與p62陽性表達率無相關性(P>0.05)。見表1。宮頸癌組織中Beclin1(膜)陽性率為22.1%、Beclin1(質)陽性率為13.6%；P62(核)陽性率為92.9%、P62(質)陽性率為62.9%。正常對照組Beclin1(膜)陽性率、Beclin1(質)陽性率為30.0%、15.0%；P62(核)陽性率和P62(質)陽性率為25.0%、12.5%。

表1 Beclin1與p62表達水平相關性

2.2 Beclin1、p62與臨床指標相關性

Beclin1 (核、質)、p62(核)表達與子宮頸鱗狀細胞癌臨床特征無顯著相關性(P>0.05)。p62(質)表達與淋巴結轉移相關(P<0.05)，而與其他指標無關，見表3。

表2 Beclin1與p62表達與臨床指標相關/例

3 討論

子宮頸癌是女性常見的一種惡性腫瘤，在女性生殖系統中發病率最高。地域性對宮頸癌的發病具有很大影響[6]。我國女性患有宮頸癌呈現各省市縣連接現象。大體趨勢為農村比城市高，山區比平原高。宮頸癌患者平均發病年齡與地區存在一定的差異，我國主要見于40～50歲之間的女性，在60～70歲之間再次出現高峰，而20歲之前相對較少[7]。具體發病機制尚未闡明，子宮頸癌與早育、早婚、性生活紊亂、多產、社會經濟地位低下以及HPV病毒感染等因素相關。

自噬是正常存在于真核細胞中的基礎代謝過程之一，具有高度保守性，在不同物種間均以雙層膜包裹細胞中廢棄細胞器或其他物質呈遞至溶酶體降解為主要過程，維持細胞內穩定及物質、能量再利用[8]。自噬可在應激或營養缺乏條件下被激活，而許多研究均發現部分腫瘤組織中也存在自噬現象。大量研究指出，自噬在抑制腫瘤中具有不可忽視的作用[9]。Beclin是一種自噬相關蛋白，研究發現Beclin基因敲除的小鼠比野生型小鼠更容易患有惡性腫瘤。然而將兩個Beclin小鼠的等位基因去除時，小鼠會出現宮內死亡現象。研究得出，Beclin基因缺失時，細胞多出現異常細胞器及特定蛋白質的積累[10]。自噬標記蛋白p62失去活性會導致自噬功能出現障礙，損傷DNA，將細胞的氧化還原反應破壞，增加退行性疾病出現，缺陷線粒體累及以及炎癥性疾病出現，進而導致腫瘤出現。大多數研究指出，在健康的細胞中，自噬的發生發展可對腫瘤生長產生一定影響，起到抑制腫瘤的效果[11]。但與此同時，自噬也可以通過對能量、細胞器等結構的循環為腫瘤生長提供前提條件。

在子宮頸鱗狀細胞癌組織，p62主要在細胞質中大量表達，且明顯高于周圍正常子宮頸上皮的表達，這一結論與其他研究基本相符，這可能與淋巴結轉移相關[12]。由此猜想，p62轉移至細胞質很可能與子宮頸麟狀細胞癌的發生發展存在一定關聯。而p62轉移過程不能直接通過細胞核的核膜進行轉移，可能是經由核孔進出，這主要是由核膜的特性所決定的。

本研究發現，Beclin1和p62不同，不僅在子宮頸鱗狀細胞癌細胞質中表達，在細胞膜上也有表達，但其在腫瘤組織中的表達明顯低于周圍正常宮頸上皮(P<0.05)。但對病理特征分析并未見Beclin1在宮頸癌組織中有表達的特異性。Beclin1和p62的陽性表達率之間未見明顯的相關性。研究指出，Beclin1和p62蛋白、對自噬活性進行判斷，能夠對子宮頸癌的轉移以及預后產生預測作用，臨床意義顯著[13]。

綜上所述，Beclin1、 p62的表達量與子宮頸癌的發生發展相關，且p62的核漿轉移與子宮頸癌有相關性。臨床上，可根據Beclin1和p62的表達對疾病進展進行評估。

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[2] 文普帥,高 靜.ARRB1融合蛋白表達載體ARRB1-EGFP的構建及其在神經膠質瘤細胞中的表達〔J〕.解放軍醫學院學報，2014,23(10)：694-695.

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[4] 張海亮,唐圣松.細胞自噬與腫瘤耐藥〔J〕.中國生物化學與分子生物學報,2014,18(3)：160-161.

[5] 李曉妍,周 穎,趙衛東.p62的功能及與腫瘤相關性的研究〔J〕.中國婦幼保健,2014,22(8)：182-183.

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[7] 韓正祥,張夢瑾,徐 杰,等.GST-NRP-1融合蛋白的原核表達及純化〔J〕.中國免疫學雜志,2015,23(10)：345-346.

[8] 陳 靜,朱 華,耿建祥,等.宮頸上皮內瘤變及宮頸鱗癌組織中HPV感染基因型的對比研究〔J〕.中國婦幼保健,2015,34(36)：748-749.

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[10] 劉 威,高文霞.宮頸癌患者組織及血清血管內皮生長因子的變化研究〔J〕.中國藥物經濟學,2013,40(4)：258-259.

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[12] Chen Y,Zhou Y,Qiu S,et al.Autoantibodies to tumor-associated antigens combined with abnormal alpha-fetoprotein enhance immunodiagnosis of hepatocellular carcinoma〔J〕.Cancer Lett,2010,289(1):32-39.

[13] Rodriguez A,Durán A,Selloum M，et al.Diez-Guerra,Juana María Flores,Manuel Serrano,Johan Auwerx,María T.Diaz-Meco,Jorge Moscat.Mature-onset obesity and insulin resistance in mice deficient in the signaling adapter p62〔J〕.Cell Metab,2006,3(3):211-222.

(編輯：甘 艷)

Expression of Cervical Autophagy Marker Protein Beclin1,p62 and Clinical Significance

CHENFei，YUTingting,LIJun.

XiaoganHospitalAffiliatedtoWuhanUniversityofScienceandTechnology,Xiaogan,432000

Objective To study the expression of autophagy marker protein Beclin1,p62 and their significance for clinical diagnosis and treatment.Methods 140 cases of cervical squamous cell carcinoma specimens were selected,tissue samples using the included Beclin1 and p62 protein labeling.Positive results using semi-quantitative scoring method determination.Beclin1,p62 expression and clinical characteristics correlation analysis using χ2test.Results Beclin1 mainly expressed in the cytoplasm and cell membrane,as compared with normal cervical epithelium,Beclin1 expression in cervical cancer was significantly lower(P<0.05).But Beclin1 expression and clinicopathological had no correlation(P>0.05).Expression of p62 in cervical squamous cell carcinoma was significantly higher in the cytoplasm,and was closely related with lymph node metastasis(P<0.05).Beclin1 and positive expression of p62 had no significant correlation(P>0.05).Conclusion The expression of Beclin1,p62 are related with development of cervical cancer,and p62 nuclear transfer plasma is correlated with cervical cancer.Clinically,the disease progression can be assessed based on the expression of p62 and Beclin1.

Beclin1;p62;Cervical cancer;Clinical significance

432000 武漢科技大學附屬孝感醫院(孝感市中心醫院)

李 俊

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.02.013

R737.33

A

1001-5930(2017)02-0218-03

2016-04-08

2016-09-26)