Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達的改變及纈沙坦對其影響探討

張艷菊，管 軍，戴紅艷，邢明清

（青島大學醫學院，山東 青島 266000）

?實驗研究?

Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達的改變及纈沙坦對其影響探討

張艷菊，管 軍，戴紅艷，邢明清

（青島大學醫學院，山東 青島 266000）

目的對Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達的改變及纈沙坦對其所產生的影響進行分析。方法建立糖尿病性心肌病乳鼠模型，將該模型中的樣本分為纈沙坦干預組和未治療組兩組，另選Wistar乳鼠作為對照組，穩重心臟標本，并通常Masson三色染色以及HE染色對纈沙坦干預組、DCM模型組以及對照組的心肌細胞狀態。結果相比于對照組，DCM模型組細胞核大小不規則、心肌細胞排列紊亂，P＜0．05差異有統計學意義。結論Periostin可能在糖尿病心肌病的心肌間質纖維化與心臟重構方面發揮作用。

纈沙坦；乳鼠心肌組織；Periostin

1 資料與方法

1.1 實驗動物

選取60只健康Wistar乳鼠，體重在180 g～220 g之間。

1.2 儀器設備

本次實驗所選取的設備包含低溫高速離心機、微量移液器、病理切片機、玻片烘干機、架盤藥物天平、轉移電泳槽以及轉移電泳儀等。

1.3 實驗試劑

1.3.1 動物模型所用試劑

本次實驗所選取的實驗試劑包含鏈脲佐菌素粉劑、檸檬酸緩沖液以及纈沙坦膠囊等。

1.3.2 蘇木精-伊紅

本次實驗所配置的Harris蘇木素溶液中包含中性樹膠、100%乙醇、90%乙醇以及70%乙醇等。

1.3.3 Masson三色染色試劑

本次實驗所需要的Masson三色染色劑包含醋酸水溶液、苯胺藍染色液、氨水水溶液、三氯化鐵水溶液等。

1.4 實驗方法

1.4.1 構建DCM乳鼠模型

本次實驗所選取的60只研究樣本均以標準乳鼠飼料進行喂養，將溫度與溫度水平調整至適宜的范圍內。經過1周的喂養后，將其分為兩組，將10只對照組以及50只DCM模型組，經過12 h的禁食處理后一次性腹腔注射STZ溶液60 mg/kg，對照且注射體積相同的檸檬酸緩沖液。乳鼠糖尿病依照以下標準進行確診：隨機血糖達到16.7 mmol/L以上，空腹血糖達到11.1 mmol／L以上。41只造模成功的實驗樣本則納入藥物干預實驗范圍，將其中的20只標記為纈沙坦干預組，另外21只標記為DCM模型組，對其進行灌胃處理。以周為時間單位測量兩組樣本的血糖水平以及體質量，對其尿量變化、進食量以及生長情況等方面進行觀察。

1.4.2 取材及處理

在實驗研究開展至第16周后對全部研究樣本進行麻醉處理，稱重樣本心臟，再剪掉左右心房，完成沖洗處理后再將水分吸干，測量左心室重量，計算左心系數比，根據計算結果確定心室肥厚水平；利用濃度為10%的甲醛溶液將樣本浸泡起來，將剩余的樣本材料冷藏起來備用。

1.4.3 病理學檢測

取出左心室標本，對其進行脫水處理，用石蠟包塊后再切成片狀，完成烘干處理后備用。用無水乙醇將切片漂洗5分鐘，依次利用濃度為95%，80%，70%的乙醇溶液分別浸泡3分鐘，再利用蒸餾水以及PBS緩沖液進行最后的漂洗。

利用Masson三色染色和蘇木素-伊紅染色對切片樣本進行染色處理。

利用光鏡對心肌細胞的形態分布、膠原含量以及心肌細胞進行觀察。

1.4.4 免疫組化檢測

利用二甲苯溶液對石蠟切片進行脫蠟處理；消除樣本過氧化物酶活性，將樣本于氧化氫酶溶液浸泡，再利用蒸餾水對其進行沖洗；滴加櫞酸鈉溶液，加熱三分鐘后再自然冷卻，再浸泡于PBS緩沖液中反復3次，每次3 min，進行抗原修復處理；于切片上滴加胎牛血清，孵育20 min，并將其余溶甩出；再將材料進行二甲苯透明以及梯度酒精脫水處理，完成樹膠封片處理后再對其進行觀察。

2 結 果

2.1 實驗樣本情況

乳鼠樣本在實驗過程中可能會持續處于多食、多飲、高血糖狀態，出現感染、爛尾、皮毛暗淡以及體征明顯減輕等方面的癥狀。利用纈沙坦對其進行干預治療，能夠有效改善上述癥狀，相比于DCM模型組，實驗樣本的狀態更加良好。

對照組樣本皮毛有光澤、反應靈敏并且精神狀態良好。

DCM造模組樣本在STZ注射環節中出現8例死亡現象，造成這種現象的原因可能與糖尿病酮癥酸以及感染中毒有關。其中不符合成模標準但血糖正常，剔除。共有21只DCM模型組樣本以及10只對照組樣本，20只纈沙坦治療組樣本納入到后續實驗中。

2.2 血糖監測

實驗前空白對照組平均空腹血糖（6.17士0.71）、DCM模型組（7.13士0.50）、纈沙坦組（6.93士0.43）；

實驗后1周末空白對照組平均空腹血糖（7.47士1.59）、DCM模型組（25.33士2.03）、纈沙坦組（29.50士1.53）；

實驗后4周末空白對照組平均空腹血糖（7.20士0.46）、DCM模型組（26.60士2.58）、纈沙坦組（27.80士0.46）；

實驗后8周末空白對照組平均空腹血糖（7.57士0.52）、DCM模型組（29.51士1.53）、纈沙坦組（24.13士0.78）。

3 討 論

經實驗研究發現，相比于對照組，DCM模型組細胞核大小不規則、心肌細胞排列紊亂，P＜0.05差異有統計學意義。綜上所述，Periostin可能在糖尿病心肌病的心肌間質纖維化與心臟重構方面發揮作用，實驗價值值得推廣。

[1] 劉文旗.Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達的改變及纈沙坦對其影響[D].青島大學,2015,03(03):27-28.

[2] 趙婷婷.纈沙坦對糖尿病乳鼠腦組織AGE-RAGE、氧化應激及內皮功能的影響[D].山東大學,2007,05(04):37-38.

本文編輯：李 豆

R587．1

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ISSN．2095-8242．2017．13．2391．02