HPLC法測定七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚的含量

李 姍 張 華 文芳杰 游紹雪 王先坤

1．黔南州中醫醫院，貴州 都勻 558000；2.黔南州食品藥品檢驗所，貴州 都勻 558000

HPLC法測定七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚的含量

李 姍1張 華2*文芳杰1游紹雪1王先坤1

1．黔南州中醫醫院，貴州 都勻 558000；2.黔南州食品藥品檢驗所，貴州 都勻 558000

目的：建立七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚的含量測定方法，以控制該產品的質量。方法：采用Wondasil C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；以甲醇-0.1%磷酸(85∶15)為流動相；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；流速為1.0mL/min。結果：大黃素和大黃酚分別在0.013248～0.079488μg和0.021366～0.128016μg范圍內，線性關系良好；平均回收率分別為97.25% (RSD=1.73%)和99.15%(RSD=1.55%)。結論：該方法簡便、可靠、準確、重復性好，可作為七味清腸膠囊的質量控制方法。

高效液相色譜法(HPLC)；七味清腸膠囊；大黃素；大黃酚

七味清腸膠囊為我院的院內制劑，由無花果、大黃等7味中藥組成，具有滋陰增液，清熱除燥，潤腸通便的功效；主要用于腸燥津虧所致的大便秘結，狀如羊屎，口干少津，腹脹不舒，食少無味，舌紅苔少，脈細稍數等。方中大黃為主要藥味，具有明顯瀉下作用。研究發現，以大黃素、大黃酚為代表的蒽醌類是大黃的主要有效成分[1]。為控制本品的質量，本研究采用高效液相色譜法測定了大黃素和大黃酚的含量，作為內在質量控制指標之一。

1 儀器與材料

1.1 儀器 日本島津LC-15C高效液相色譜儀(SPD-15C型紫外可見檢測器，LCsolution Lite工作站)；AUW120D型電子天平(日本島津)；FA-1004型電子天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(上海醫療器械五廠)。

1.2 材料 七味清腸膠囊(0.45g/粒，批號：20141110、20141118、20141126黔南州中醫醫院制劑室)；大黃素(批號：110756-200110，中國藥品生物制品檢定所)；大黃酚(批號：20130111，天津士蘭科技有限公司)。水為娃哈哈純凈水；甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件[2]Wondasil C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相：甲醇-0.1%磷酸(85:15)；檢測波長：254nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；理論板數按大黃素峰計算應不低于3000。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的配制 分別精密稱取大黃素、大黃酚對照品適量，加入無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶液制得每1mL含大黃素0.3312mg、含大黃酚0.1778mg的對照品溶液。分別精密量取上述對照品溶液1mL、3mL置50mL量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含大黃素6.624μg、大黃酚10.668μg)。

2.2.2 樣品溶液的制備[3-4]取本品10粒，傾出內容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50mL甲醇，密塞，稱重，回流提取1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補重后，搖勻，濾過。精密量取續濾液5mL，蒸干，殘渣先后加入10mL鹽酸(1→10)，與10mL三氯甲烷，水浴水解1h后，取出，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷萃取3次，每次15mL，合并萃取液，蒸干，殘渣用無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶解后轉移至10mL量瓶中，定容至刻度。搖勻，靜置，上清液過0.22μm微孔濾膜，作為樣品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方比例稱取除大黃外的其余各藥材，按制劑制備工藝制成陰性制劑，再按“2.2.2”方法制備成缺大黃的陰性對照溶液。

2.3 標準曲線的繪制 精密量取混合對照品溶液(大黃素6.624μg/mL、大黃酚10.668μg/mL) 2、4、6、8、10、12μL，按2.1色譜條件測定峰面積，分別重復進樣3次，以峰面積值(Y)對進樣量(X)進行線性回歸。

2.4 精密度考察 精密量取同一濃度的混合對照品溶液(大黃素6.624μg/mL、大黃酚10.668μg/mL)10μL，測定各成分峰面積值，重復進樣6次。

2.5 穩定性考察 取同一樣品(批號：20130114)溶液，于0、1、2、4、6、8h進樣分析，測定峰面積值。

2.6 重復性試驗 取七味清腸膠囊(批號：20130114)6份，按“2.2.2”方法制備成樣品溶液，分別進樣測定。

2.7 加樣回收試驗 精密稱取已知含量的樣品(批號：20130114)6份，每份約0.25g，精密加入一定量的大黃素對照品溶液(0.3312mg/mL)和大黃酚對照品溶液(0.1778mg/mL)，按“2.2.2”方法制備成樣品溶液，分別測定各成分的含量并計算加樣回收率。

2.8 樣品含量測定 取不同批次七味清腸膠囊，按“2.2.2”方法制備成樣品溶液，照2.1色譜條件測定含量。

3 結果與分析

3.1 專屬性試驗 由圖1可知，色譜圖基線平穩，混合對照品及樣品中大黃素和大黃酚與相鄰成分分離完全，分離度均大于1.5；拖尾因子均小于1.05；陰性樣品在同一保留時間處無相應色譜峰出現。

3.2 標準曲線的繪制 大黃素和大黃酚分別在0.013248～0.079488μg和0.021366～0.128016μg范圍內，峰面積值與進樣量有良好的線性關系。其回歸方程與標準曲線見圖2。

3.3 精密度考察 由表1可知，大黃素和大黃酚的RSD值分別為0.76%、0.92%。表明儀器精密度好。

表1 精密度試驗結果 (n=6)

3.4 穩定性考察 由表2可知，大黃素和大黃酚的RSD值分別為1.76%和2.00%。表明樣品溶液在8h之內基本穩定。

表2 穩定性試驗結果 (n=3)

3.5 重復性試驗 由表3可知，大黃素和大黃酚的平均含量分別為0.7052mg/g(RSD=1.39%)和1.3967mg/g(RSD=1.74%)。說明，本方法測定大黃素和大黃酚的重復性好。

表3 重復性試驗結果 (n=2)

3.6 加樣回收試驗 由表4可知，大黃素和大黃酚的加樣回收率分別為97.25%和99.15%，RSD分別為1.73%和1.55%。

表4 回收率試驗結果 (n=6)

3.7 樣品含量 通過測定，不同批次七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚的含量和為0.9372～0.9785mg/粒。

表5 七味清腸膠囊中大黃素和大黃酚含量測定結果 (n=2)

4 討論

大黃素和大黃酚的含量測定方法文獻報道極多，本文參照大黃藥材含量測定方法，采用測定波長為254nm。

在提取溶劑的選擇上，應盡可能提取本品中全部大黃素及大黃酚，除去其它雜質。因此，試驗前期進行了酸不同水解時間的比較，以大黃素和大黃酚的提取量為指標，結果，酸水解處理1h后，樣品中大黃素和大黃酚提取量變化不明顯，因此，采用酸水解1h。

通過測定三批中試樣品，可知大黃素和大黃酚的含量和為0.9372～0.9785mg/粒。但是，考慮到藥材產地、制劑生產以及貯藏等因素，因此，質量標準中暫定本品每粒含大黃以大黃素(C15H10O5)和大黃酚(C15H10O4)的總量計，不得少于0.75mg(80%)。

[1]唐大軒,譚正懷,梁媛媛,等.大黃蒽醌致瀉作用及其機理的初步研究[J].時珍國醫國藥,2007,18(6) :1312-1314.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫藥科技出版社,2015:23.

[3]寧穎,潘瓊,桂洪芹,等.高效液相色譜法測定婦炎消片中大黃酚和大黃素含量[J].中國藥業,2012,21(9):21-22.

[4]劉麗娟,郭玉晶.高效液相色譜法測定乙肝解毒膠囊中大黃素和大黃酚含量[J].中國藥業,2008,17(10):33.

Determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules by HPLC

LI Shan1ZHANG Hua2*WEN Fangjie1YOU Shaoxue1WANG Xiankun1

1.Qiannnan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Duyun 558000，China； 2. Qiannnan institute for Food and Drug Control，Duyun 558000，China

Objective To establish a method for determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules.Methods The HPLC separation was performed on Wondasil-C18(4.6mm×150mm,5μm) column with a mixture methanol-0.1% phosphoric acid(85∶15) as the mobile phase, at a flow rate of 1.0 mL/min. Detection wavelength was 254nm and column temperature was 30℃.Results The linear range of emodin and chrysophanol were 0.013248～0.079488μg(r=0.9999) and 0.021366～0.128016μg(r=0.9999).The average recoveries were 97.25% (RSD=1.73%) and 99.15%(RSD=1.55%).Conclusion It is a simple,reliable,accurate and reproducible method in determination of emodin and chrysophanol in Qiwei Qingchang capsules.

HPLC; Qiwei Qingchang Capsules; Emodin; Chrysophanol

李姍(1987-)，女，漢族，碩士，主營中藥師，研究方向為中藥新劑及新劑型。E-mail:303630441@qq.com

張華(1987-)，男，漢族，碩士，主管中藥師，研究方向為中藥質量評價。E-mail:495539629@qq.com

R914

A

1007-8517(2017)04-0013-04

2016-12-01 編輯：梁志慶)