粉防己甲素緩釋微球的制備及其釋放度研究

宋艷博 劉 軒 史一杰

遼寧省錦州醫科大學藥學院，遼寧 錦州 121000

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粉防己甲素緩釋微球的制備及其釋放度研究

宋艷博 劉 軒 史一杰*

遼寧省錦州醫科大學藥學院，遼寧 錦州 121000

目的：制備粉防己甲素緩釋微球制劑并探討其釋放特性。方法：以乙基纖維素為載體，分別考察乳化劑濃度，致孔劑用量，藥物-載體質量比以及油水體積比對微球質量的影響，設計開發粉防己甲素緩釋微球。結果：當乳化劑用量為10%，致孔劑用量2%，藥物-載體質量比1∶3，油水體積比為6∶1時，制得的緩釋微球在不同溶出介質中6h內完全釋放，且無明顯突釋效應，具有良好的緩釋作用。結論：制備的粉防己甲素緩釋微球釋放行為良好，是1種具有工業前景的緩釋制劑。

粉防己甲素；緩釋微球；單因素考察；釋放度

粉防己甲素(Tetrandrine, TET) 又名粉防己堿、漢防己甲素，提取自千金藤屬防己科植物粉防己的干燥塊根中，屬雙芐基異喹啉類生物堿，具有抗心肌、腦、腎缺血，抗心律失常、降低門靜脈高壓、抗缺氧性肺動脈高壓、抗腫瘤、抗肝、肺纖維化、抗炎等多種藥理作用。臨床上主要用于肝硬化門脈高壓、矽肺等的治療[1～2]。研究表明[3]，粉防己甲素為低溶解度高跨膜率藥物，其溶解速率影響藥物的吸收速度，且過高濃度會引起多重不良反應。將其制備成緩、控釋制劑后，藥物能夠在體液作用下穩定溶解并釋放，使得胃腸道中藥物濃度穩定且迅速吸收，既增加藥物在體內的滯留時間和生物利用度，同時減少藥物因吸收-消除不平衡引起的不良反應，有利于增加患者的依從性[4]。既具有廣闊的市場經濟前景，同時也具有可觀的社會收益。本研究以乙基纖維素為載體材料，采用單因素考察法優化處方，制備出粉防己甲素6h緩釋微球，為開發粉防己甲素新制劑提供新的思路。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-2450紫外可見分光光度計(日本島津公司)；RCZ-8型智能溶試驗儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)；透析袋(MV：1000-3000，美國spectrum公司)；FA1004N電子天平(上海精密科學儀器有限公司)；TGL-1613臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)；DF-101S恒溫磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限責任公司)；WH-2微型渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠)。

1.2 試藥 粉防己甲素(大連富生天然藥物開發有限公司,批號：20130709)；乙基纖維素(山東聊城阿華制藥有限公司)；氯化鈉(天津市博迪化工有限公司)；Span60(天津市科密歐化學試劑有限公司)；無水乙醇(分析純，天津永晟精細化工有限公司)；戊二醛50%水溶液(分析純，沈陽市華東試劑廠)；磷酸二氫鉀(天津市博迪化工有限公司)；磷酸氫二鉀(天津市博迪化工有限公司)；去離子水(自制)。

2 方法

2.1 粉防己甲素標準溶液的配制 精密稱取干燥至恒重的粉防己甲素置于50 mL量瓶中，以0.l mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋，配制成濃度為0.5 mg/mL的儲備液，4 ℃保存備用。

2.2 粉防己甲素測定波長的確定 將“2.1”項下標準溶液稀釋成濃度為20μg/mL的粉防己甲素水溶液，按紫外-可見分光光度法[5]于200～400nm波長范圍內進行掃描，結果見圖1。粉防己甲素具有較強的末端吸收，此外，在279nm處另有最大吸收峰。由于末端吸收處受介質或其他雜質的紫外吸收影響較大，測定存在干擾，因此將279nm作為粉防己甲素測定波長。

2.3 粉防己甲素標準曲線的建立 精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0mL粉防己甲素標準溶液置于50mL量瓶中，用0.lmol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，制得梯度濃度為5、10、15、20、30、40、50μg/mL的系列標準溶液，以pH6.8磷酸鹽緩沖液替換鹽酸稀釋液，按上述濃度配制梯度濃度溶液，分別于279nm波長處測定吸光度，以吸光度(A)為縱坐標，濃度(C)為橫坐標分別繪制標準曲線，得回歸方程為(1)0.1mol/L鹽酸溶液：A=0.0123C+0.0159，r=0.9991。(2)pH6.8磷酸緩沖溶液：A=0.0125C-0.0289，r=0.9993。由此可見，在5.0～50.0 μg/mL范圍內，粉防己甲素溶液紫外吸光度(A)與濃度(C)呈良好的線性關系。

2.4 粉防己甲素緩釋微球的制備 將處方量乙基纖維素、粉防己甲素和氯化鈉分散溶解于乙醇中作為水相，將適量乳化劑Span60加入至液體石蠟中，作為油相，將水相注入至油相中，快速攪拌3min形成較為穩定的W/O型乳劑，緩慢滴加20%的戊二醛溶液適量，于溫和攪拌下交聯固化4h，減壓抽濾收集微球初產品，所得微球用無水乙醚洗滌，丙酮脫水揮干，即得粉防己甲素-乙基纖維素微球。

2.5 單因素考察法 優化粉防己甲素緩釋微球處方以“2.4”項下制備方法為基礎，確定其他試驗條件不變，分別考察不同乳化劑濃度，致孔劑用量，藥物-載體質量比以及油水體積比對微球外觀，分散性及包封率的影響。

2.6 粉防己甲素緩釋微球釋放度測定 取自制緩釋微球適量(相當于主藥含量20mg)，采用250mL溶出介質(0.1 mol/L HCl，pH6.8磷酸鹽緩沖溶液)；溫度(37±0.5)℃；轉速50r/min。依法操作，在設定時間點分別取樣2.5mL，同時補加同體積溶出介質，0.8μm微孔濾膜過濾，取續濾液1.5mL置于5mL容量瓶中，用釋放介質定容至刻度，按紫外分光光度法在279nm處測定吸光度，以外標法計算不同時間樣品濃度，求算藥物的累積釋放百分率。

3 結果

3.1 單因素考察法優化粉防己甲素緩釋微球處方

3.1.1 乳化劑濃度對微球質量的影響改變 Span60濃度為5%，10%，15%，固定其他工藝參數和處方用量不變，分別制備粉防己甲素緩釋微球，觀察微球的外觀，分散性，測定其包封率，結果見表1。

由表1可知，乳化劑濃度為10%和15%時制得的微球外觀基本呈規則球形，圓整度較好，但用量較少時，因成乳性較差，外觀稍顯不規則，包封率隨乳化劑用量的增多，先增加后減少。說明乳化劑用量過大形成的乳滴不利于對藥物的包裹，故選擇乳化劑用量為10%。

表1 乳化劑濃度對微球質量的影響

3.1.2 致孔劑用量對微球質量的影響改變 氯化鈉用量分別為2.0%、2.5%、3.0%，固定其他工藝參數和處方用量不變，分別制備粉防己甲素緩釋微球，觀察微球的外觀，分散性，測定其包封率，結果見表2。

由表2可知，微球的包封率隨致孔劑用量的增加而減少，微球的圓整度隨致孔劑用量的增大而不規則，最終選擇致孔劑用量為2.0%。

表2 致孔劑用量對微球質量的影響

3.1.3 藥物-載體質量比對微球質量的影響 以投藥量20 mg/50 mL乳濁液為基準，改變乙基纖維素的用量，使藥物-載體質量比為1∶1，1∶3，1∶5，固定其他工藝參數和處方用量不變，分別制備粉防己甲素緩釋微球，觀察微球的外觀，分散性，測定其包封率，結果見表3。

表3 藥物-載體質量比對微球質量的影響

由表3可知，隨著載體質量的增加，微球的包封率不斷增大，藥物利用率提高，但當載體用量繼續增大時，對藥物包封率的影響減弱，因此選擇藥物-載體比為1∶3。

3.1.4 油水體積比對微球質量的影響改變 油水體積比為1∶1，3∶1，6∶1，固定其他工藝參數和處方用量不變，分別制備粉防己甲素緩釋微球，觀察微球的外觀，分散性，測定其包封率，結果見表4。

由表4可知，隨著油水體積比的增加，微球的包封率不斷增大，外觀形態更為規則圓整，因此選擇油水體積比為6∶1。

表4 油水體積比對微球質量的影響

3.2 處方優化確證 由單因素考察結果優化制得三批微球，并對其進行外觀、分散性，包封率及粒徑的測定，結果顯示三批微球外觀及分散性良好，三批微球的平均包封率為63.12%，粒徑為213μm，含量為17.41 mg/100 mg微球，處方優化良好。

3.3 粉防己甲素緩釋微球釋放度測定體外釋放度 結果顯示，分別以0.1 moL/L HCl，pH6.8磷酸鹽緩沖溶液為釋放介質時，藥物粉末釋放速度均快于緩釋微球，受介質pH影響，0.1 moL/L HCl中藥物釋放極快，而粉防己甲素-乙基纖維素微球于6h內可緩慢釋放完全，與原料藥相比基本無突釋效應。

4 討論

通過單因素考察試驗篩選優化了粉防己甲素緩釋微球的處方，其粒徑大小主要受形成乳滴的粒徑的影響，根據優選獲得最佳制備條件，制備所得3個批次微球外觀及分散性良好，平均粒徑為213μm，隨后對粉防己甲素緩釋微球在不同介質中的體外釋放度進行了考察，釋放行為良好，無明顯突釋效應，整個釋放過程中緩釋微球在不同介質中均可以緩慢釋放，提示在體內條件下可以使藥物在緩釋時間內維持穩定血藥濃度，起到控制藥物緩慢釋放作用。

由釋放度結果可知，粉防己甲素在胃部溶解迅速，但多以離子形式存在，因此不利于藥物的吸收，制成緩釋微球后，藥物的釋放速率明顯降低，可以保證大量藥物以原型進入小腸部位釋放并吸收。受小腸部位pH值影響，傳統的治療劑量下，藥物會以固體形式或離子型藥物再結晶的方式通過小腸段，導致藥物濃度過低不易發揮治療作用，制成緩釋微球后，藥物可以在整個小腸段緩慢釋放藥物，維持腸道內分子型藥物濃度的穩定，有利于增加分子型藥物在體內的吸收和滯留，從而提高藥物療效，如可以進一步開發，將成為既具有廣闊的市場經濟前景，也具有可觀的社會收益的新一代粉防己甲素制劑。

參考文獻

[1]邢志博,王鳳梅,王翠平，等.粉防己有效成分的藥理活性研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2014, 20(9):241-246.

[2]曹金,楊兆文,李鳳，等.漢防己甲素的臨床應用進展[J].世界臨床藥物，2013,34(2):75-79.

[3]張穎,姜倩,張焓，等.漢防己甲素的表觀溶解度、油水分配系數和解離常數的測定[J].華西藥學雜志，2013,28(5):501-503.

[4]田振,張晶,周欣，等.口服中藥多組分同步緩釋制劑的研究進展[J].中草藥，2011, 42(10):2130-2134.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(四部)[S].北京:中國醫藥科技出版社，2015.

遼寧省大學生創新訓練項目(NO：201410160005)

宋艷博(1992-)，男，漢族， 本科在讀。

史一杰(1985-)，女，漢族，研士，副教授，研究方向為中藥新制劑研究。E-mail:shiyijie119@163.com

R944

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1007-8517(2017)04-0017-03

2016-12-06 編輯：梁志慶)