氣相色譜法測定薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑中薄荷腦的含量

康安鋒，李新方，樂李敬，詹潔瓊，馬志強，張欣榮，楊 峰

·基礎醫學·

·論著·

氣相色譜法測定薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑中薄荷腦的含量

康安鋒，李新方，樂李敬，詹潔瓊，馬志強，張欣榮，楊 峰

目的建立薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑中薄荷腦含量的測定方法。方法采用氣相色譜法測定。色譜柱為AgilentDB-WAX毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱溫為120 ℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為260 ℃，進樣口溫度為220 ℃，進樣量為1 μl，載氣為氮氣，柱流速為1.0 ml/min。結果薄荷腦質量濃度在0.02～0.20 mg/ml范圍內具有良好的線性關系(r=0.999 1)；精密度、重復性、穩定性試驗的RSD<2%；加樣回收率為95.1%～103.4%，RSD為2.3%(n=6)。結論該方法操作簡便、結果可靠、重復性好，可用于測定薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑中薄荷腦含量。

氣相色譜法；原位凝膠；薄荷腦；含量測定

目前國內上市的專門針對干燥性鼻炎和鼻出血的治療藥物比較少。薄荷腦又名薄荷冰，是由唇形科植物薄荷中提取的白色晶體，作用于皮膚黏膜，具有清涼、止癢、抗菌的作用[1]。西北高原地區部隊醫院如解放軍第一五醫院等，臨床治療上經常使用院內制劑復方薄荷腦滴鼻液治療干燥性鼻炎和鼻出血，治療效果良好，深受官兵歡迎。但是該復方滴鼻液的溶劑是石蠟油，使用不便，不良反應較大，而且滴鼻液難以定量、生物利用度低，這些缺點限制了它的使用。原位凝膠具有溶液劑和凝膠劑雙重優點[2]，本文選用離子型原位凝膠去乙酰結冷膠[3](DGG)為載體材料，薄荷腦為主要有效藥物，制備了薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑。為了檢測制備的薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑的質量，筆者參考相關文獻[4-6]，確定采用氣相色譜法(GC)測定薄荷腦的含量，以期為提高我軍官兵生活質量及衛勤保障能力提供有力支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Thermofish Trace GC Ultra氣相色譜儀(美國賽默飛世爾公司)；氣相色譜柱(Agilent DB-WAX 30 m×0.25 mm×0.25 μm毛細管柱)；自動進樣器(Agilent technologies)；FID檢測器(Agilent technologies)；Xcalibur色譜工作站；電子分析天平(萬分之一，瑞士梅特勒—托利多儀器有限公司)；超純水系統Nanopure(美國賽默飛科技公司)。

1.2 藥品與試劑

薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑(批號：160901，160902，160903，實驗室自制)；薄荷腦對照品(批號：110728，中國藥品生物制品檢定所)；去離子水(18.2 MΩ，自制)；對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯(國藥集團化學試劑公司)；低乙酰結冷膠(Sigma公司)；吐溫-80(中國醫藥集團上海化學試劑公司)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent DB-WAX毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱溫為120 ℃，進樣口溫度為220 ℃，檢測器為FID，檢測器溫度為260 ℃，載氣為氮氣，柱流速為1.0 ml/min，進樣量為1 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取薄荷腦對照品10 mg，精密稱定，置10 ml容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2 供試品溶液 精密量取薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑1 ml，置于10 ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按照薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑處方，不加薄荷腦，用相同制備工藝制成不含薄荷腦噴霧劑樣品，再按“2.2.2”方法，制得陰性對照溶液。

2.3 專屬性考察

取2.2.1項下對照品溶液，精密吸取1.0 ml，置于10 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度并混勻。精密吸取上述稀釋后的對照品儲備液，“2.2.2”和“2.2.3”項下溶液各1 μl，按照“2.1”項下色譜條件測定，結果見圖1。對照品(圖1A)與供試品(圖1B)在相同保留時間(t=3.8 min)有色譜峰出現，而陰性對照(圖1C)在此保留時間無色譜峰。

注：A、B、C分別為3種溶液

2.4 線性關系考察

精密吸取“2.2.1”項下對照品貯備液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml，分別置于10 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項下色譜條件，精密吸取上述不同濃度的稀釋液各1 μl，進樣測定。以對照品濃度(X，μg/ml)為橫坐標，對照品峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y=78 769X-363 024，r=0.999 1。結果表明薄荷腦在0.02～0.20 mg/ml質量濃度范圍內具有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取“2.2.1”項下對照品貯備液1.0 ml，置于10 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，連續操作5次。薄荷腦峰面積的RSD為1.15%(n=5)，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

精密量取“2.2.2”項下供試品溶液適量，室溫放置，按“2.1”項下色譜條件分別于0、2、4、6、12 h進樣測定。薄荷腦峰面積的RSD為1.5%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

精密量取批號為20160901樣品適量，按“2.2.2”項下方法制備5份供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件，精密吸取1 μl，分別進樣測定，計算薄荷腦的含量，結果RSD為1.59%(n=5)，表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密量取批號為20160901的薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑0.5 ml，共6份，分別置于10 ml量瓶中，精密加入“2.2.1”項下對照品溶液0.5 ml，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進樣測定并計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果(n=6)

2.9 樣品含量測定

取3批薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑(批號分別為20160901、20160902、20160903)按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，每批配制3份，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，通過回歸方程計算樣品含量，結果分別為0.947、0.972、0.976 mg/ml。

3 討論

通過前期制劑學研究，采用去乙酰結冷膠制備出適用于高原氣候特點的離子敏感原位凝膠噴霧劑，解決了原來的復方薄荷腦滴鼻液存在的使用不便、難以定量等缺點，能起到局部保持鼻腔黏膜濕潤，防治兼顧，有效解決高原地區由于空氣干燥、寒冷、多風沙、水分蒸發過快引起的鼻黏膜毛細血管破裂出血高發的問題。制劑中的主要成分薄荷腦易揮發，在制備時需使用密閉性良好的容器，測定含量時，操作要迅速，盡量減少薄荷腦在生產、測量過程中的損失。薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑成分較簡單，沒有干擾成分，不存在分離干擾情況，所以本文選用固定柱溫測定薄荷腦含量[7-8]。色譜圖結果發現色譜峰拖尾因子在0.95～1.05范圍內，峰型對稱，且基線平穩。噴霧劑樣品經過“2.2.2”項下操作方法處理時，會有凝膠出現，需充分超聲，減少凝膠對薄荷腦的黏附。為了防止高分子材料去乙酰結冷膠對色譜柱的損害，在進氣相色譜儀前，需要離心所得的稀釋液，取上清液進樣測定。

通過實驗，建立了氣相色譜法測定薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑中薄荷腦含量，該方法操作簡便、結果可靠、專屬性強，研究表明不同批次薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑樣品中薄荷腦含量變化較小，質量穩定可控。綜上所述，此方法可以作為薄荷腦鼻用原位凝膠噴霧劑的質量控制方法。

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(本文編輯：張陣陣)

更 正

作者個人原因，《海軍醫學雜志》2016年第6期490頁“體外胃癌間質成纖維細胞模型建立和生物學特性初步研究”一文第一作者(柴華)單位更正為“第二軍醫大學”。

本刊編輯部

Determination of the content of menthol in the nasal in-situ gel spray by gas chromatography

KangAnfeng,LiXinfang,LeLijing,ZhanJieqiong,MaZhiqiang,ZhangXinrong,YangFeng

(SchoolofPharmacy,FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China)

Objective To establish a method for concentration determination of menthol in the nasal in-situ gel spray.Methods Gas chromatography (GC) was performed on the column of Agilent DB-WAX capillary column (30m×0.25 mm×0.25 μm), with the column temperature of 120 ℃. With nitrogen gas used as carrier gas, hydrogen flame ion detector (FID) was used, the detection temperature was 260 ℃, injection temperature was 220 ℃, injection volume was 1 μl and column flow rate was 1.0 ml/min.Results For menthol, there was good linear relationship within the range of mass concentration at 0.02～0.20 mg/mL (r=0.999 1). Precision, reproducibility and stability test were all lower than 2%, the sample recovery rate was 95.1%～103.4% and relative standard deviation (RSD) was 2.3% (n=6). Conclusion The established method had the following advantages: easy operation, high reliability and good reproducibility, and it could be used for the content determination of menthol in the nasal in-situ gel spray.

Gas chromatography; In-situ gel; Menthol; Content determination

全軍后勤科研計劃重大項目(AWS14L005)

350122 福州，福建中醫藥大學(康安鋒、樂李敬、楊峰)；第二軍醫大學藥學院無機化學教研室(康安鋒、李新方、馬志強、張欣榮、楊峰)；河北北方學院研究生部(詹潔瓊)

楊峰，電子信箱：yangfeng1008@126.com

R917

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10.3969/j.issn.1009-0754.2017.01.009

2016-12-12)