QuEChERS－超高效液相色譜法定量檢測柑橘中的吡唑醚菌酯

田春亞，王丹丹，曾令榮，王德飄，陳亦慧，孟信剛，胡德禹

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QuEChERS－超高效液相色譜法定量檢測柑橘中的吡唑醚菌酯

田春亞，王丹丹，曾令榮，王德飄，陳亦慧，孟信剛，胡德禹*

（貴州大學 精細化工研究開發中心，貴州 貴陽 550025）

建立了改進的QuEChERS-超高效液相色譜法，定量檢測柑橘（果肉、果皮和全果）樣品中殘留的吡唑醚菌酯。樣品用乙腈提取，經N-丙基乙二胺（PSA）和十八烷基硅烷（C18）凈化，采用甲醇和水為流動相，用UPLC-PDA進行檢測。試驗結果表明，添加水平為0.05~5.0 mg/kg時回收率為82.34%~97.44%，相對標準偏差（RSD）為0.40%~5.66%。吡唑醚菌酯在貴州和湖南兩地柑橘全果中的半衰期分別為10.34 d和9.76 d。施藥劑量為180 mg a.i./m2和270 mg a.i./m2，施藥3~4次，距最后1次施藥7~28 d采樣，吡唑醚菌酯在柑橘中的殘留量為0.05~0.886 mg/kg。

超高效液相色譜（UPLC）；吡唑醚菌酯；柑橘；消解動態；最終殘留

吡唑醚菌酯是德國巴斯夫公司于1993年開發的一種新型甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，又名唑菌胺酯，英文名為pyraclostrobin，化學名為N-2-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-3-氧甲基]苯基-(N-甲氧基)氨基甲酸甲酯[1]。吡唑醚菌酯具有殺菌譜廣、活性高、持效期長、毒性低、對非靶標生物安全等特點，廣泛用于防治水果、蔬菜、谷物等作物中的白粉病、銹病、網斑病、霜霉病、稻瘟病等病害。國際食品法典委員會（CAC）和歐盟（EU）規定吡唑醚菌酯在柑橘中的最大殘留限量（MRL）為2 mg/kg，但我國尚未制定吡唑醚菌酯在柑橘上的MRL值。目前，國內外對吡唑醚菌酯在多種農產品中的殘留測定方法已有大量報道[2-6]，但已報道的氣相色譜法、液相色譜質譜法分析柑橘中的吡唑醚菌酯[7-8]，其樣品前處理和凈化方法復雜，試劑使用量大，對環境污染大，并且尚未有吡唑醚菌酯在柑橘中的消解動態和最終殘留研究的報道。本實驗結合施藥濃度、施藥次數及施藥后的間隔時間等影響因素對吡唑醚菌酯進行消解動態差異、殘留特點等對比分析，為吡唑醚菌酯在柑橘上的合理使用和制定《農藥安全使用標準》提供一定的數據依據。

1 實驗部分

1.1 材料與試劑

吡唑醚菌酯標準品（純度為99.0%），購于Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；N-丙基乙二胺(PSA)、十八烷基硅烷(C18)，購于美國Bonna-Agela Technologies公司；乙腈、無水醋酸鈉、無水硫酸鎂等，分析純。

1.2 儀器與設備

Waters ACQUITY UPLC-PDA(美國Waters公司)；色譜柱：ACQUITY UPLC? BEH C18 (50.0 mm×2.1 mm i.d., 1.7 μm，購于美國Waters公司)；AS-3120型超聲儀；QL-901型渦旋混合器；TGL-20B型離心機等。

1.3 田間試驗

根據《農藥殘留實驗準則》[9]設計試驗小區，分別在貴州和湖南進行田間試驗。消解動態試驗施藥劑量為270 mg a.i./m2，于柑橘幼果生長至一半大小時施藥1次，采樣距施藥間隔期為2 h 和1、2、3、5、7、10、14、21、28 d。最終殘留試驗施藥劑量設為低劑量180 mg a.i./m2，高劑量270 mg a.i./m2，施藥3~4次。施藥時期為柑橘長至成熟果實一半大小時噴霧，距最后一次施藥14、21和28 d采樣。

1.4 樣品制備

柑橘田間樣本在采集后，8 h內運回實驗室，并立即按SOP FT-03-22（柑橘田間樣本采集與實驗室樣品制備標準操作規程）的規定制備成實驗室樣品于-20 ℃冷凍保存。

1.5 檢測方法

1.5.1 色譜條件

（1） 色譜柱：ACQUITY UPLC? BEH C18 (50.0 mm×2.1 mm i.d., 1.7 μm)；柱溫：40 ℃；進樣量：3.0 μL；流速：0.3 mL/min；檢測波長：276 nm；流動相：甲醇∶水=58.5∶41.5（/）。此條件下，吡唑醚菌酯出峰時間約為6.3 min（圖1）。

圖1 吡唑醚菌酯標準溶液超高效液相色譜圖

1.5.2 樣品前處理

稱取10 g（精確到0.01g）柑橘樣品（果肉、全果和果皮）于50 mL離心管中，準確加入20 mL乙腈，渦旋3 min，超聲5 min，加入2 g無水醋酸鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋3 min，6 000 r/min離心3 min，將全部上清液轉移至100 mL梨形瓶中，旋轉蒸發儀45 ℃恒溫濃縮近干，甲醇定容至1 mL，轉移至含30 mg PSA和30 mg C18的2 mL離心管中，渦旋30 s，離心1 min，過0.22 μm濾膜，待UPLC-PDA檢測。

2 結果與討論

2.1 分析方法的靈敏度和線性范圍

準確稱取0.020 0 g吡唑醚菌酯標準物質于100 mL容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，得到200 μg/mL儲備液。將儲備液逐級稀釋為0.1、0.5、1、5、20、50 μg/mL系列標準溶液，按1.5.1的色譜條件進樣，以吡唑醚菌酯的濃度為橫坐標，峰面積值為縱坐標，得到吡唑醚菌酯的線性回歸方程為：=31862-4645.3，相關系數為0.999 9。

2.2 方法的準確度和精密度

吡唑醚菌酯在柑橘果肉、果皮和全果上的添加回收率試驗結果如表1。吡唑醚菌酯在三個基質中3個添加水平下的平均回收率為82.34%~ 97.44%，相對標準偏差(RSD)為0.40%~ 5.66%。準確度和精密度符合我國農藥殘留試驗準則。

2.3 消解動態結果

貴州和湖南兩地的消解動態試驗樣品殘留量檢測結果符合一級動力學特征(表2)，消解方程分別為：= 0.4089-0.067，= 0.3426-0.071；半衰期分別為10.34 d，9.76 d；相關系數分別為0 .946 6和 0.902 4。試驗結果表明，在貴州和湖南兩地吡唑醚菌酯在柑橘上的消解速率差異較小，并且半衰期都較短，說明吡唑醚菌酯在柑橘中比較易于降解。

表1 吡唑醚菌酯在柑橘果肉、全果和果皮上的添加回收率和相對標準偏差

表2 吡唑醚菌酯在柑橘中的消解動態方程和半衰期

2.4 最終殘留結果

距末次施藥14~28 d后，果肉、全果和果皮中吡唑醚菌酯的最終殘留量如表3。

表3 距末次施藥14~28 d后吡唑醚菌酯在果肉、果皮和全果中的殘留量

結果表明，60%吡唑醚菌酯·代森錳鋅水分散粒劑按施藥劑量180~270 mg a.i./m2，施藥3~4次后，柑橘中的殘留量為0.05~0.886 mg/kg，低于國際食品法典委員會和歐盟規定的吡唑醚菌酯在柑橘中的MRL值。

3 結束語

吡唑醚菌酯在貴州和湖南兩地柑橘上的消解動態研究結果表明，吡唑醚菌酯在柑橘上的半衰期大約為10 d，降解速率較快。最終殘留研究結果顯示，距末次施藥后間隔14~28 d，柑橘中吡唑醚菌酯的含量為0.05~0.886 mg/kg，低于國際食品法典委員會（CAC）和歐盟（EU）規定的吡唑醚菌酯在柑橘中的MRL值。以此為依據，按施藥劑量為180~270 mg a.i./m2，施藥3~4次后，距末次施藥14 d收獲期的柑橘食用安全。

［1］張亦冰. 新穎甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑—唑菌胺酯[J]. 世界農藥, 2007, 29(3): 47-48.

［2］[2]Mercader J V, Agulló C, Esteve-Turrillas F A, et al. Immunoassays for pyraclostrobin analysis in processed food products using novel monoclonal antibodies and QuEChERS-based extracts[J]. Food control, 2013, 32(1): 42-48.

［3］Dong F, Chen X, Liu X, et al. Simultaneous determination of five pyrazole fungicides in cereals, vegetables and fruits using liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2012, 1262: 98-106.

［4］Zhang F, Wang L, Zhou L, et al. Residue dynamics of pyraclostrobin in peanut and field soil by QuEChERS and LC–MS/MS[J]. Ecotoxicology and environmental safety, 2012, 78: 116-122.

［5］Pan X, Dong F, Xu J, et al. Comparison of different cleanup procedures for oil crops based on the development of a trace analytical method for the determination of pyraclostrobin and epoxiconazole[J]. Journal of separation science, 2014, 37(24): 3669-3676.

［6］de Oliveira L A B, Pacheco H P, Scherer R. Flutriafol and pyraclostrobin residues in Brazilian green coffees[J]. Food chemistry, 2016, 190: 60-63.

［7］吳潔珊, 馮家望, 任永霞, 等. 氣相色譜測定柑橘中多種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的殘留量[J]. 農藥, 2011, 50(10): 754-755.

［8］劉軍, 張仙, 沈菁, 等. 液相色譜-質譜法對柑橘中吡唑醚菌酯殘留的檢測[J]. 湖北農業科學, 2014, 53(19): 4698-4700.

［9］中華人民共和國農業部. NY/T 788-2004.農業殘留試驗準則[S]. 北京: 中國農業出版社, 2004.

Determination of Pyraclostrobin Residue in Orange by UPLC Using a Modified QuEChERS

（Research and Development Center for Fine Chemicals, Guizhou University, Guiyang 550025, China）

A UPLC method was established for determination of pyraclostrobin residue in orange. The samples were extracted with acetonitrile, and the analyte was detected by UPLC with PDA with methanol-water mixed solution asmobile phase. The results showed that the recovery of pyraclostrobin was 82.34%~97.44%, with the relative standard deviation of 0.40%~5.66% at the spiking level of 0.05~5 mg/kg. The half lives of pyraclostrobin in oranges from Guizhou and Hunan were 10.34 d and 9.76 d, respectively．According to the research findings, when pyraclostrobin was applied 3 and 4 times to orange trees with dosage of 180 ~ 270 mg a.i./m2,the residue of pyraclostrobin in oranges picked after last using pyraclostrobin for 7~28 days was in the range of 0.05~0.886 mg/kg.

ultra performance liquid chromatography (UPLC); pyraclostrobin; orange; degradation; residue

2017-03-15

田春亞（1992-），女，苗族，碩士研究生，貴州銅仁人，研究方向：農藥殘留分析。

胡德禹（1965-），女，教授，研究方向：農藥殘留分析。

O 657

A

1004-0935（2017）05-0489-03