耐碳青霉烯類腸桿菌細菌的耐藥基因研究

張麗娟

532200崇左市人民醫院檢驗科

耐碳青霉烯類腸桿菌細菌的耐藥基因研究

張麗娟

532200崇左市人民醫院檢驗科

目的：分析耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌(CRE)的耐藥情況及其耐藥基因，為臨床防治CRE感染提供依據。方法：收集腸桿菌科細菌6 321株，采用PCR檢測技術檢測KPC、IMP、VIM，并測序分析基因型別。結果：經檢測，6 321株腸桿菌科細菌中含有耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌33株，檢出率0.52%，在尿液、血液、痰液、膽汁、膿液中均有分布，其中痰液分布最多，為12株。耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌是多藥耐藥菌，對不同藥物具有不同程度耐藥率，其對氨芐西林、頭孢唑啉、舒巴坦耐藥率較高，分別為100.00%、90.91%、78.79%。結論：KPC和IMP為產碳青霉烯酶主要基因型，臨床加強對耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌產碳青霉烯酶的監測具有重要意義。

CRE；KPC；IMP；耐藥基因

碳青霉烯類抗菌藥物(如亞胺培南、美羅培南等)是β內酰胺類最強抗菌藥物，具有抗菌譜廣、抗菌活性強等特點[1，2]。但近年來由于碳青霉烯類抗菌藥物的濫用，導致其耐藥菌株廣泛蔓延，尤其耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌(CRE)的出現，使碳青霉烯類抗菌藥物作為抗腸桿菌科細菌用藥受到沖擊[3]。CRE的耐藥機制極為復雜，已在世界范圍內引起廣泛關注[4]。2013年4月-2015年10月收集腸桿菌科細菌6 321株，分離了不重復的CRE 33株，并檢測其耐藥相關基因。現分析結果，匯報如下。

資料與方法

2013年4月-2015年10月收集腸桿菌科細菌6 321株，用全自動細菌鑒定和藥敏系統進行試驗，按照2010年美國CLSI標準進行結果分析和判定。細菌標本來源：痰液、尿液、膽汁、膿液、血液。

試劑及儀器：Premix Taq、DNA Marker(DL-2000)，日本TaKaRa公司；Vitek-2 Compact全自動微生物分析系統，法國生物梅里埃公司；ABI7500 PCR儀，美國ABI公司；電泳儀、凝膠成像分析系統，美國Bio-Rad公司。

PCR擴增與測序：采用PCR技術擴增對碳青霉烯酶基因，經加熱煮沸提取細菌DNA，引物序列，見表1。

統計學方法：所有數據均采用SPSS 17.00軟件進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗。P＜0.05時差異具有統計學意義。

結果

檢出率及病原菌分布：2013年4月-2015年10月收集腸桿菌科細菌6 321株，檢測到CRE33株，檢出率0.52%，見表2。

CRE在臨床標本中的分布及構成比：檢測到的33株耐碳青霉烯類腸桿菌細菌在尿液、血液、痰液、膽汁、膿液中均有分布，其中痰液分布最多，為12株，見表3。

CRE對不同藥物的耐藥性：CRE對多數抗菌藥物具有高度耐藥性，為多藥耐藥菌，對不同藥物具有不同程度耐藥率，其對氨芐西林、頭孢唑啉、舒巴坦耐 藥 率 較 高 ， 分 別 為 100.00%、90.91%、78.79%，見表4。

基因檢測結果：33株碳青霉烯酶基因檢測陽性率達100.00%，其中KPC、MP陽性率見表5。

討論

近年來，隨著廣譜抗菌藥物的使用增加，細菌耐藥性為抗感染治療帶來很大困難，現在已成為全球關注的重要公共衛生問題之一。CRE已有許多國家和地區報道，我國某些地區也出現過耐碳青霉烯類藥物的肺炎克雷伯菌暴發流行[5]。

碳青霉烯類抗生素正受到嚴峻考驗，聯合多種抗菌藥物治療的過程中，這類細菌面臨新的選擇壓力[6]。為快速診斷CRE，臨床實驗室應建立一套耐藥基因初篩體系。在使用碳青霉烯類抗生素時應審慎、合理，關注感控部門的耐藥情況，采取有效措施預防醫院感染的暴發。

本研究結果顯示，CRE對多數抗菌藥物具有高度耐藥性，為多藥耐藥菌，對不同藥物具有不同程度耐藥率。因此，KPC和IMP為產碳青霉烯酶主要基因型，臨床加強對CRE產碳青霉烯酶的監測具有重要意義。

表1 引物序列與產物長度

表2 CRE檢出率及病原菌分布

表3 CRE在臨床標本中分布及構成比

表4 CRE對不同藥物的耐藥性

表5 CRE碳青霉烯酶基因檢測陽性率

[1]俞剛,張肖,沈靜，等.耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌KPC和NDM-1β內酰胺酶耐藥基因的研究[J].中國感染與化療雜志,2014,14 (1):38-41.

[2]丁卉,丁茂文,陳麗珠,等.耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌的分布及耐藥性分析[J].藥物流行病學雜志,2014,(10):608-611.

[3]謝寧,郭斌,蔡燕，等.耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌的耐藥基因研究[J].中華醫院感染學雜志,2015,25(24):5555-5558.

[4]白永鳳,祝進,陸軍,等.耐碳青霉烯酶腸桿菌科耐藥基因及同源性分析[J].中華醫院感染學雜志,2016,26(10):2176-2178.

[5]劉萍,閆雪苗,張堅磊,等.23株耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌耐藥基因分析[J].山東醫藥,2016,56(24):91-93.

[6]董方,宋文琪,徐樨巍,等.對碳青霉烯類抗生素不敏感腸桿菌科細菌產碳青霉烯酶基因型研究[J].中國感染與化療雜志,2013, 13(4):270-274.

Study on the resistant genes of carbapenem-resistant enterobacteriaceae

Zhang Lijuan
Department of Laboratory,the People's Hospital of Chongzuo City 532200

Objective:To analyze the drug resistance of carbapenem-resistant enterobacteriaceae(CRE)and its drug resistance gene,to provide basis for clinical prevention and treatment of CRE infection..Methods:6 321 strains of enterobacteriaceae were collected.PCR detection technology was used for KPC,IMP,VIM,and gene type was sequencing analyzed.Results:Among the detection of 6 321 strains of enterobacteriaceae bacteria,there were 33 strains of carbapenem-resistant enterobacteriaceae,and the detection rate was 0.52%.They were distributed in urine,blood,sputum,pus,bile,most of them distributed in sputum with 12 strains. Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae were multidrug-resistant bacteria;different drugs had varying degrees of resistance;the resistance rates to ampicillin,cefazolin and sulbactam were 100.00%,90.91%,78.79%.Conclusion:KPC and IMP were the main genotypes of carbapenemases,to strength the monitoring of carbapenemases production of carbapenem-resistant enterobacteriaceae in clinical is importment.

CRE;KPC;IMP;Drug resistance gene

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.3.1