Survivin和VEGF在口腔鱗狀細胞癌中的表達

薛夢姍

100038北京市海淀區羊坊店社區衛生服務中心口腔科

Survivin和VEGF在口腔鱗狀細胞癌中的表達

薛夢姍

100038北京市海淀區羊坊店社區衛生服務中心口腔科

目的：探討口腔鱗狀細胞癌患者癌組織中Survivin、VEGF表達的相互關系，研究它們的表達與臨床病理指標及預后的聯系。方法：采用免疫組化S-P法檢測相應口腔鱗狀細胞癌組織及癌旁組織中Survivin、VEGF的表達情況。結果：Survivin、VEGF在口腔鱗狀細胞癌組織中均呈高表達，二者在癌組織中的陽性表達(分別是81.2%、68.9%)均明顯高于癌旁組織中的陽性表達(分別是31.2%、12.5%)(P＜0.05)，其陽性率高低與淋巴結轉移、臨床分期、分化程度有關。結論：口腔鱗狀細胞癌組織中的Survivin、VEGF異常表達可能對口腔鱗狀細胞癌中發生、發展起重要作用。

Survivin；VEGF；ELISA；口腔鱗狀細胞癌

Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的一個新成員，位于染色體的17q25，長度75～130 kb，由1.9 kb的mRNA轉錄和編碼。Survivin表達具有高度的特異性，在正常組織中不表達或低表達，而在多種腫瘤組織中表達，其主要通過抑制凋亡核心Caspase3和Caspase7，抑制細胞凋亡，使腫瘤細胞獲得惡性增殖潛能。VEGF是一種血管內皮細胞特異性生長因子，是選擇性有絲分裂原，它通過其受體，在體外促進內皮細胞生長，在體內誘導血管發生。國外已有研究表明，Survivin可能是血管形成中生長因子誘導的保護性基因，維護血管內皮細胞的正常增殖。國內學者已研究發現，Survivin可能借助阻抗細胞凋亡、維持并促進瘤體血管內皮細胞存活和血管生成等多種途徑影響腫瘤的生物學行為。本文采用免疫組化S-P法檢測其癌組織中Survivin和VEGF的表達，初探二者在口腔鱗癌發生發展中的相互關系。

資料與方法

2006年5月-2007年11月收治內蒙古醫學院第一附屬醫院口腔頜面外科住院治療的口腔鱗狀細胞癌患者32例，取其手術切取的癌組織及相應的癌旁正常組織各1份。口腔鱗狀細胞癌組織標本均取自瘤心，為手術切除后1 h內獲得，獲得后立即放入冰桶中送實驗室-86℃保存。男18例，女14例，平均年齡58.2歲(37～76歲)。高分化鱗癌18例，中低分化鱗癌14例。

結果判定：實驗設有陽性和陰性對照，用已知Survivin、VEGF陽性口腔鱗狀細胞癌組織標本片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。每張切片隨機選取5個視野，利用Smartscape進行分析，平均灰度值大(染色強度弱、透光度強)，蛋白表達水平低，反之則增強。將平均灰度值50%～55%定強陽性，55%～60%陽性，60%～65%弱陽性。

統計學方法：采用SPSS 13.0進行分析，計量資料以(±s)表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，Fisher確切概率法檢驗；P＜0.05表示差異具有統計學意義。

結果

Survivin和VEGF在口腔鱗癌組織和癌旁組織中的表達：Survivin陽性染色主要定位在腫瘤細胞的胞質，也可見于淋巴細胞和血管內皮細胞，偶可見細胞的胞質和胞核同時著色。在32例口腔鱗癌組織中Survivin的陽性表達率為81.2% (26/32)，表達強度較高；在相應的癌旁組織中陽性表達率為31.2%(10/32)，其表達強度較低。Survivin在口腔鱗癌與癌旁組織中的陽性率相比，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。VEGF陽性染色主要定位在腫瘤細胞的胞質和細胞膜、腫瘤組織血管內皮細胞及基底膜、腫瘤基質中呈現棕色或深棕色，見圖2和圖3。在32例口腔鱗癌中VEGF的陽性表達率為68.9%(22/32)，其表達強度較高；在相應的癌旁組織中陽性表達率為12.5% (4/32)，其表達強度較低。VEGF在口腔鱗癌與癌旁組織中的陽性表達率相比，差異有統計學意義(P＜0.05)。Survivin和VEGF在中低分化組陽性表達率高于高分化組(P＜0.05)，在臨床分期的Ⅲ、Ⅳ期高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05)，VEGF在有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組(P＜0.05)。且在伴有淋巴結轉移組的Ⅲ、Ⅳ期口腔鱗癌患者Survivin和VEGF表達為強陽性，而Ⅰ、Ⅱ期僅較少表達或弱～中度陽性表達，見表1。

表1 Survivin和VEGF在口腔鱗癌組織的表達

圖1 血清Survivin和VEGF間的相互關系

討論

Survivin蛋白口腔鱗癌中的表達及意義：Survivin的表達具有細胞周期的特異性，選擇性表達在細胞周期的G2/M期，在G2/M期表達基因內發現的細胞周期依賴元件(CDE)和細胞周期同源結構域(CHR)存在于Survivin基因的啟動子內，該基因的CDE/CHR盒對G2/M期的細胞周期依賴基因的表達起到了調節的作用，所以Survivin的抗凋亡作用依賴于G2/M期的檢查點。Survivin可與有絲分裂紡錘軸的微管結合，微管的運動可以對Survivin基因進行調節，但其過度表達時，不能與微管分離，就會出現持續抗凋亡。本試驗采用免疫組化S-P法檢測了相應癌組織及癌旁組織中的Survivin的表達，兩者差異有統計學意義(P＜0.05)，癌組織中Survivin的表達與分化程度和臨床分期密切相關。提示癌組織中Survivin的過度表達對口腔鱗癌的診斷有重要意義。推斷Survivin的異常變化可能促進了口腔黏膜細胞的增殖和惡性轉化；可能在口腔鱗癌浸潤演進中發揮一定的作用，并有希望成為預測口腔鱗癌患者預后的指標之一。

VEGF在口腔鱗癌中的表達及意義：1983年，Senfer等發現了一種可使血管通透性增加的因子。目前發現的主要受體有VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。VEGF的作用非常廣泛，在機體的胚胎發育、血管形成、創傷愈合、骨折修復過程中起著非常重要的作用，與腫瘤的生長、浸潤、轉移和預后之間具有密切的關系。腫瘤能夠分泌多種促進血管生成因子，這些因子對血管的生成進行調節作用。VEGF是一種高度特異性的有絲分裂原，刺激血管生成，對血管的通透性進行誘導作用，從而導致纖維蛋白的降解。VEGF是目前發現的刺激腫瘤血管形成最重要的促進因子。人們一直認為，VEGF是以旁分泌的方式調節腫瘤的血管形成。但是越來越多的證據表明，腫瘤中可能存在VEGF的自分泌機制，從而對腫瘤細胞分化產生調節作用，對腫瘤細胞的凋亡發揮抑制作用，腫瘤細胞生成增多。國內有學者在人工合成的反義寡核苷酸抑制肝癌細胞VEGF的表達的研究中發現，反義寡核苷酸作用后的肝細胞肝癌細胞周期中G2期細胞比例升高，S期細胞比例下降且出現一小的凋亡前期峰，推測這可能是針對VEGF及其受體的抗腫瘤血管治療的一個理論依據。本試驗采用免疫組化S-P法檢測了相應癌組織及癌旁組織VEGF的表達，癌組織中VEGF的表達顯著高于相應的癌旁組織(P＜0.05)，與李恩孝結果相同。結合臨床病理，癌組織中VEGF的表達與分化程度、淋巴結轉移及臨床分期密切相關。說明在大部分的口腔鱗癌中，VEGF有高表達的癌基因，與口腔鱗癌的發生、發展、預后之間關系密切。

Survivin與VEGF之間的關系：目前，研究表明Survivin參與了血管形成過程。已有體外實驗結果證實，Survivin與VEGF均為G2/M期的調控分子。一方面，Survivin過度表達可使細胞克服此期凋亡調控點而利于完成異常的有絲分裂；同時，VEGF作為有絲分裂原可直接和(或)通過促進G2/M期Survivin的表達，對內皮細胞凋亡進行干擾，從而促進細胞增殖，生成血管。還有研究證明，VEGF的大部分抗凋亡特性是通過內皮上重新誘導Survivin來實現的。Survivin在有絲分裂的進程中獨立地介入了內皮細胞的保護，這樣反義抑制Survivin可以消除VEGF的抗凋亡功能，因而可潛在加速新生血管的退化和減少腫瘤轉移的發生率。本試驗采用免疫組化S-P法檢測了其癌組織及相應的癌旁組織中的Survivin及VEGF蛋白的表達。結果顯示，本研究組織中Survivin、VEGF表達強陽性在有伴有淋巴轉移的晚期口腔鱗癌病例中，而早、中期口腔鱗癌僅較少表達或弱～中度陽性表達。由此推斷聯合檢測原發腫瘤標本中Survivin和VEGF的水平有可能反映出整個口腔鱗癌的一般轉移特性。

綜上所述，Survivin和VEGF在口腔鱗癌的發生、發展過程中起協同作用，其機制可能與Survivin是血管形成中生長因子誘導的保護性基因，維護血管內皮細胞的正常增殖，而后者又反過來增強了Survivin的表達有關。口腔鱗癌組織中Survivin、VEGF表達強陽性在有伴有淋巴轉移的晚期口腔鱗癌病例中，而早、中期口腔鱗癌僅較少表達或弱～中度陽性表達。推斷Survivin和VEGF可能在口腔鱗癌發生發展過程中起協同作用。

Expression of Survivin and VEGF in oral squamous cell carcinoma

Xue Mengshan
Department of Stomatology,Yangfangdian Community Health Service Center of Haidian District,Beijing City 100038

Objective:To explore the interrelationship between the expression of Survivin and VEGF in cancer tissues of patients with oral squamous cell carcinoma,and to study the relationship between their expression and clinical pathological parameters and prognosis.Methods:The expressions of Survivin and VEGF in the cancer tissue and adjacent tissue of oral squamous cell carcinoma were detected by using immunohistochemistry S-P method.Results:Survivin and VEGF in oral squamous cell carcinoma tissue all showed high expression,and the positive expressions of two in cancer tissues(respectively 81.2%,68.9%)were significantly higher than the positive expressions(respectively 31.2%,12.5%)in adjacent tissue(P＜0.05).The positive rate high or low were related to the lymph node metastasis,clinical stages,and differentiation degrees.Conclusion:The abnormal expression of Survivin and VEGF in oral squamous cell carcinoma may play an important role in the occurrence and development of oral squamous cell carcinoma.

Survivin;VEGF;ELISA;Oral squamous cell carcinoma

圖2 Survivin和VEGF在低分化口腔鱗癌中的表達

圖3 Survivin和VEGF在高分化口腔鱗癌中的表達

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.3.56