血清高類風濕因子對胱抑素C檢測的干擾

陳素蕓王瑜偉(通訊作者)

400060武警重慶總隊醫院檢驗科1

400021重慶市中醫院檢驗科2

血清高類風濕因子對胱抑素C檢測的干擾

陳素蕓1王瑜偉(通訊作者)2

400060武警重慶總隊醫院檢驗科1

400021重慶市中醫院檢驗科2

目的：評估血清高濃度類風濕因子對胱抑素C檢測的干擾。方法：利用抗原抗體反應原理，去除血清中的高濃度類風濕因子。處理前后標本同時檢測血清胱抑素C。判斷兩組數據有無差異。結果：去除類風濕因子后的血清胱抑素C值明顯下降，差異有統計學意義(P＜0.001)。結論：類風濕因子濃度較高的血清樣本對胱抑素C的檢測會帶來干擾，引起血清胱抑素C假性升高。

類風濕因子；胱抑素C；抗原抗體反應

近年來，血清胱抑素C(CYS-C)作為檢測腎功能的一項新的內源性標志物受到臨床重視，已成為腎功能檢測常規指標之一[1]。CYS-C是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質，由122個氨基酸殘基組成，分子量13.3 KD，可由機體所有有核細胞產生，產生率恒定。由于其不受年齡、性別、體重、炎癥等因素影響，分子量小，能自由從腎小球濾過，完全被腎小管上皮細胞重吸收并于細胞內降解，不重新回到血液中等特點被認為是早期反應腎功能損傷的可靠指標。類風濕因子(RF)是一種多株系自身抗體，并不只在類風濕關節炎患者血清中存在，在其他自身免疫性疾病中也有發現，包括系統性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性活動性肝炎，并且在約5%的正常人群中也以低濃度水平存在。

經過長期觀察研究，我們發現某些RF濃度較高的患者，經臨床排除實質性器官病變的可能，血清檢測其他腎功指標均正常，唯獨CYS-C異常增高，而反應腎臟早期損傷的另一個指標β2微球蛋白(β2-MG)也并沒有增高[2]。此時，CYS-C的異常高值是真實反映早期腎功能損傷還是由于受到干擾而出現的假陽性結果。如何判斷其真實性對臨床診斷及治療具有重要意義。因此，本課題采用抗原抗體反應原理，去除血清中的RF，以驗證較高濃度的RF是否會干擾血清CYS-C的檢測，導致CYS-C結果假性增高[3]。

資料與方法

2014年8月-2016年8月收治檢測RF較高患者 20例(＞300 IU/ML)，同時CYS-C異常，而尿素氮、肌酐、尿酸、β2-MG等其他腎功指標均正常的血清樣本。其中女10例，男10例，年齡38～87歲。

儀器與試劑：RF檢測儀器為西門子IMMAGE800特種蛋白分析儀，試劑為BECKMAN COULTER的類風濕因子檢測試劑盒(免疫比濁法)。血清胱抑素、尿素氮、肌酐、尿酸、β2-MG檢測儀器為HITACHI7600全自動生化分析儀，試劑采用四川邁克的CYS-C測定試劑盒(膠體金增強免疫法)。尿素氮、肌酐、尿酸、β2-MG檢測同為四川邁克生化試劑。

方法：RF和血清CYS-C均為免疫比濁法，本質為抗原抗體反應。分別用相應試劑盒檢測各指標后，選取符合條件的標本進行試驗。首先將RF檢測試劑盒(免疫比濁法)中的RF抗原添加到血清標本中使其充分反應，中和RF，離心沉淀去除RF抗原抗體復合物，然后取上清再次檢測血清CYS-C，比較兩次血清CYS-C值是否存在差異。將符合研究條件的患者血清與RF試劑在37℃等比例低速振蕩反應10min，再3 000 rpm離心沉淀10min，然后取上清檢測血清CYS-C，倍比稀釋后為避免檢測敏感性降低，采取倍比濃縮測定，每個標本測定兩次取平均值作為測定結果。當樣本中RF＞500 IU/mL時，重復上述操作1次。已達到盡可能多清除血清RF的目的。

統計學方法：應用SPSS 16.0統計軟件對計量資料采用配對t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

表1 標本處理前后各指標檢測值

結果

標本處理前后各指標檢測值，見表1。

RF處理前后血清CYS-C檢測結果比較：①去除RF后的血清再次檢測CYS-C值均明顯下降。處理前后數據比較，差異具有統計學意義(P＜0.001)。②血清CYS-C的下降幅度與RF的濃度有關，但并不是成正比的關系。③血清CYS-C的下降與年齡、性別無明顯相關性。

討論

RF是一種病理性球蛋白，主要為19S的IgM，也有7S的IgG、IgA或者IgE，常以單一型或混合型同時存在。RF與天然IgG結合的能力較差，最易與人和動物的變性IgG或免疫復合物中的IgG結合。所有類型的RF靶抗原均為IgG，其結合部位一般認為在IgG的Fc段[4，5]。

從本研究結果可以看出，經處理后的血清CYS-C檢測值均有不同程度降低。尤其是RF極高的樣本，血清CYS-C檢測值下降明顯。說明血清中較高濃度的RF對血清CYS-C的檢測存在一定程度干擾，導致血清CYS-C假性增高[6]。這可能是因為RF結構復雜，在機體中以多種分子結構型存在，其理化性狀，表位種類及數目等均可影響抗原抗體反應。人體內IgG分子由于某些原因常相互聚集，產生抗原多價性，這也促進了RF與IgG分子或抗原抗體復合物的結合。

另外，本實驗也存在需要進一步深入研究的現象。首先，在篩選研究對象時發現，部分RF極高的患者，血清CYS-C檢測值正常。為排除鉤狀效應影響，本實驗室對標本進行倍比稀釋重新檢測CYS-C，并未發現鉤狀效應的存在。其次，由于RF結構差異導致其干擾程度有所差異，影響程度并不與RF濃度成正比。最后，不同試劑盒CYS-C抗體的來源不一，其結合特異性不能保證一致，因此，不同廠家試劑盒干擾程度可能有所差異。

雖然非特異性抗體引起分析干擾的發生率近年來已經明顯下降，但免疫測定過程中的假陽性仍不可避免。實驗室在下列情況時應懷疑干擾物的存在：患者產生RF可能性的病史或與RF產生有關的疾?。慌R床醫生根據其他的臨床試驗數據開始懷疑腎功能損傷，在這種情況下實驗室能通過直接測定RF的水平監測干擾物的存在，若結果正常，排除干擾的可能；升高的結果可懷疑由RF引起的CYS-C的假性增高，這類標本可先進行預處理，消除方法[7，8]：①將RF抗原添加到血清標本中使其充分反應，中和RF，離心沉淀去除RF抗原抗體復合物；②將經熱變性的動物IgG與聚苯乙烯微球結合后加入血清中，反應后離心清除樣本中的RF；③用還原劑使RF降解，2-巰基乙醇可使RF的巰基裂解；④PEG沉淀法，人r-球蛋白預吸收法；⑤重組單克隆IgY作試劑抗體可有效防止干擾現象，糾正錯誤結果。

綜上所述，當血清RF濃度較高時，而β2-MG正常，那么CYS-C增高可能是假性增高，可能導致腎功能損傷的錯誤診斷和不當治療，只有保證排除了RF的假性干擾，血清中CYS-C的測定結果與腎功能損傷才有密切聯系。

[1]尹廣.血清胱抑素C的臨床應用[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2007,(16):273-277.

[2]魏崇莉.胱抑素C的臨床意義及其應用進展[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(2):182-183.

[3]劉紅春,蘇利沙,趙占正,等.血清胱抑素C評估慢性腎臟病患者腎小球濾過率的應用研究[J].中華檢驗醫學雜志,2014,37(3):184-188.

[4]Ahao J.Comparison between Cystation C and TradinonalGFR Edogenous Markers[J]. Agricultural Biotechnology,2014,3(3):41.

[5]王惠欣.免疫測定中內源性蛋白質的相關問題探討[J].黑龍江醫藥,2010,23(6):970-972.

[6]王蘭蘭,許化溪.類風濕關節炎相關自身抗體的檢測與應用［M].臨床免疫學檢驗.2012:290-292.

[7]王蘭蘭,許化溪.臨床免疫學檢驗[M].北京:人民衛生出版社2012:12-17.

[8]陳金超,劉滌瑕,王麗,等.免疫學檢測方法中的干擾與對策[J].現代中西醫結合雜志, 2009,18(21):2575-2576.

The interference of serum high rheumatoid factor on cystatin C detection

Chen Suyun1,Wang Yuwei(Corresponding author)2
Department of Clinical Laboratory,Chongqing Armed Police Corps Hospital 4000601
Department of Clinical Laboratory,Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital 4000212

Objective:To evaluate the influence of serum high rheumatoid factor on cystatin C detection.Methods:Using antigen antibody reaction principle,to remove the high concentration of rheumatoid factor in serum.The serum cystatin C was detected before and after the treatment of specimens,to determine whether there was difference.Results:The serum cystatin C was deseased after removing the rheumatoid factor in serum,and the difference was statistically significant(P＜0.001).Conclusion:Serum samples with high concentrations of rheumatoid factor may interfere with the detection of cystatin C,causing a false increase in serum cystatin C levels.

Rheumatoid factor;Cystatin C;Antigen antibody reaction

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.3.61

重慶市衛計委項目(2015MSXM081)

Fund ProjectProject of the Chongqing municipal health and family planning commission(2015MSXM081)