寧夏奶牛球蟲病流行病學調查與蟲種鑒定

倪曉婷， 吳耀東， 鄭文斌,3， 馬劍鋼,3， 張曉軒,3， 孫曉林， 朱興全， 周東輝

(1.中國農業科學院蘭州獸醫研究所 ， 甘肅蘭州730046 ； 2.甘肅農業大學動物醫學院 ，甘肅蘭州730070 ； 3.吉林農業大學動物科學技術學院 ， 吉林長春130118)

寧夏奶牛球蟲病流行病學調查與蟲種鑒定

倪曉婷1,2， 吳耀東1， 鄭文斌1,3， 馬劍鋼1,3， 張曉軒1,3， 孫曉林2， 朱興全1， 周東輝1

(1.中國農業科學院蘭州獸醫研究所 ， 甘肅蘭州730046 ； 2.甘肅農業大學動物醫學院 ，甘肅蘭州730070 ； 3.吉林農業大學動物科學技術學院 ， 吉林長春130118)

奶牛球蟲病是由艾美耳屬和等孢屬球蟲寄生于腸道引起的一種常見疾病。該病主要發生于犢牛，呈世界性分布，丹麥的一次調查結果顯示，艾美耳球蟲在奶牛中的感染率高達96.2%，其中犢牛的感染率為60.9%[1]，給養牛業造成了巨大的經濟損失。近年來，我國各地奶牛球蟲感染情況十分普遍[2-4]，報道的感染率范圍為12.3%～75.0%。但寧夏至今尚未有奶牛球蟲感染情況的報道。有鑒于此，我們調查了寧夏3個規模化奶牛場的球蟲感染情況，旨在為防制該病提供科學依據。報告如下。

1 材料與方法

1.1 奶牛糞便樣品 2015年5月從寧夏自治區3個規模化奶牛場(NX1～NX3)采集1月齡到1歲左右的荷斯坦奶牛糞便樣品共426份，分別裝入干凈塑料自封袋帶回實驗室，放入4 ℃冰箱中待檢。

1.2 檢測方法 采用飽和鹽水漂浮法檢測奶牛糞便中的球蟲卵囊。每份糞樣混勻后取2 g放入60 mL燒杯中，加入50 mL飽和食鹽水；輕輕攪勻靜置15～20 min后，取其漂浮液直接涂片鏡檢，觀察球蟲卵囊[5]。1.3 卵囊計數方法 取球蟲陽性糞樣2 g，放入60 mL燒杯中，加入50 mL水，60目銅篩過濾，濾液經3 000 r/min離心10 min，棄上清；將沉淀移入燒杯，先加水5 mL，攪拌混勻后加飽和鹽水至60 mL，混勻后吸取糞液滴注于改良麥克馬斯特計數板的計數室內，靜置5 min后，顯微鏡下計數每克糞便卵囊數(OPG)(OPG=A×100，A為改良麥氏記數板下數到的卵囊數)[6-8]。1.4 卵囊的收集與培養 取球蟲陽性糞便2 g，加清水60 mL攪拌均勻，用60目篩網過濾，將濾液置于離心機中3 000 r/min離心10 min，棄上清；取沉淀物用飽和鹽水漂浮，靜置20 min，3 000 r/min離心5 min，棄上清；加10倍量的清水，3 000 r/min離心10 min，棄上清；取沉淀物放入裝有2.5%重鉻酸鉀溶液培養皿中，置于28 ℃恒溫箱中培養，至95%以上卵囊完全孢子化，置4 ℃保存[6-8]。

1.5 卵囊形態觀察與蟲種鑒定 取孢子化后的卵囊液制片后，在40×顯微鏡下觀察孢子化卵囊的結構。根據卵囊、孢子囊和子孢子的形態、結構、大小等情況，參考文獻[5-10]進行蟲種鑒定。

2 結果與分析

2.1 不同奶牛場的球蟲感染率與感染強度 3個奶牛場均存在球蟲感染，感染率分別為40.85%、28.00%和13.58%。在檢出的117頭陽性奶牛中，感染強度最大OPG值為85 800，各奶牛場平均OPG值為3 496，其中NX2牧場為最高，平均OPG值為4 794(表1)。

表1 不同奶牛場的球蟲感染率與感染強度

2.2 球蟲卵囊鑒定 通過對孢子化球蟲卵囊進行種類鑒定，此次調查共查出12種艾美耳屬球蟲和1種等孢屬球蟲，艾美耳屬球蟲分別是牛艾美耳球蟲(Eimeriabovis)、奧博艾美耳球蟲(Eimeriaauburnensis)、邱氏艾美耳球蟲(Eimeriazuernii)、阿拉巴艾美耳球蟲(Eimeriaalabamensis)、亞球形艾美耳球蟲(Eimeriasubspherica)、橢圓艾美耳球蟲(Eimeriaellipsoidalli)、加拿大艾美耳球蟲(Eimeriacanadensis)、圓柱狀艾美耳球蟲(Eimeriacylindrica)、懷俄明艾美耳球蟲(Eimeriawyomingensis)、巴西艾美耳球蟲(Eimeriabrasiliensis)、廣西艾美耳球蟲(Eimeriakwangsiensis)、庫斯提艾美耳球蟲(Eimeriakosti)，但調查中發現的1種等孢屬球蟲卵囊，檢出率低，尚未定種。

2.3 各種球蟲在奶牛場的感染率 本次調查鑒定的12種艾美耳屬球蟲和1種等孢屬球蟲在奶牛場的感染率見表2。

2.4 各奶牛場不同月齡段奶牛球蟲感染率及優勢種 由表3可知，3個規模化牧場奶牛1歲以內平均感染率最高的年齡段為7～12月齡，平均感染率為36.91%(55/149)；其次是1～3月齡，平均感染率為21.67%(36/83)；最低的是4～6月齡，平均感染率為17.99%(18/48)。

表2 各種球蟲在整個奶牛場的感染率

表3 各奶牛場不同月齡段奶牛球蟲感染率 / %

1～3月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、奧博艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲；4～6月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、牛艾美耳球蟲和奧博艾美耳球蟲；7～12月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲和廣西艾美耳球蟲；大于12月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、廣西艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲。本次調查發現，圓柱狀艾美耳球蟲為寧夏奶牛感染的最優勢種。

3 討論

本研究調查發現，寧夏各奶牛場均存在不同程度的球蟲感染，平均感染率為27.46%，與鄭州(29.60%)[10]、新疆奎屯(34.14%)[11]、河南(37.70%)[12]等地的感染情況相近。本次調查發現，大于12月齡奶牛的感染率最高(61.11%)，其次是7～12月齡奶牛(36.91%)，1～3月齡奶牛(21.67%)；4～6月齡奶牛感染率最低(17.99%)，與新疆奎屯奶牛的感染情況相似。但石冬梅等[13]發現球蟲病主要發生于犢牛，尤其是1～3月齡犢牛；出現這種差異的原因可能與采樣數量、采樣季節和奶牛場管理方式等有關，本次大于12月齡奶牛僅有11份樣品。

全世界報道的牛球蟲有23種，但公認的有15種[13]，目前中國報道的牛球蟲確定種的有13種艾美耳屬球蟲，另有2個等孢屬未定種[10]。本次調查發現，寧夏銀川地區奶牛感染艾美耳球蟲12種。其中1～3月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、奧博艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲；4～6月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、牛艾美耳球蟲和奧博艾美耳球蟲；7～12月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲和廣西艾美耳球蟲；大于12月齡奶牛主要感染圓柱狀艾美耳球蟲、廣西艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲。總體來講，圓柱狀艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲的感染率較高，為奶牛球蟲感染的優勢種，感染率最高的是圓柱狀艾美耳球蟲(43%)這與國外相關研究結果存在一定差異[14、25]。

此次調查發現了奶牛混合感染球蟲的情況，在成功孵化出的107份陽性樣品中，只感染一種球蟲的有59份，發生混合感染的有48份，其中同時感染了兩種球蟲的有28份，同時感染了3種球蟲的有20份。本次調查發現1種等孢屬球蟲，但由于卵囊數極少無法確切定種。張龍現等[10]對鄭州地區奶牛球蟲感染情況調查時發現2種等孢球蟲，并報道牛體內發現的等孢球蟲是一種假性寄生拉氏等孢球蟲，這種球蟲主要寄生于一些野鳥，如麻雀體內，牛糞便中會發現，極可能是麻雀等野鳥糞中的卵囊污染了牛飼料或飲水被牛吞人而隨牛糞排出的，但都無法肯定，有關奶牛是否真能感染等孢球蟲有待進行進一步研究。這是寧夏自治區奶牛球蟲感染情況的首次報道，本次研究可見，寧夏地區奶牛感染球蟲普遍存在，應引起有關部門重視。

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2016-02-26

國家科技支撐計劃項目(2012BAD12B07)

倪曉婷(1990-)，女，碩士，研究方向為動物寄生蟲學，E-mail：wwwnxt.126@163.com

周東輝,E-mail：zhoudonghui@caas.cn

文獻標志碼：B 文章編號：0529-6005(2017)02-0044-03