耐藥菌株與過氧碳酸鈉殺菌效果的研究

張良文　魏丹 何愛國

摘 要 目的了解及評價過氧碳酸鈉對耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）的殺滅效果。方法采用懸液定量殺菌方法；以殺滅率判定過氧碳酸鈉對耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）的殺菌效果，并與金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、銅綠假單胞菌（ATCC15442）大腸桿菌（ATCC25922）的標準菌株做平行殺滅實驗。結果不同濃度（0.20%、0.50%、1.00%）的過氧碳酸鈉對耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌），作用不同時間（5min、10min、15min），殺滅率達80.00%以上。結論過氧碳酸鈉對耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）具有很好的殺滅效果。濃度越高，作用時間越長，殺菌作用越強。

關鍵詞 過氧碳酸鈉 耐藥菌株 殺滅效果

中圖分類號：R187.2 文獻標識碼：A

過氧碳酸鈉溶于水后離解成過氧化氫、碳酸根離子和鈉離子。它們都是人體和環境中自然存在的物質，會吸收環境中的二氧化碳，釋放氧氣。不致癌、不致畸形、不刺激皮膚。過氧碳酸鈉在水中，持續釋放出大量的活性氧，活性氧非常活潑，能穿透細菌的細胞壁，滲入細胞內氧化細菌、病毒的蛋白質和核糖核酸，干擾其新陳代謝，從而殺除耐藥菌株和病毒。

1材料與方法

過氧碳酸鈉由天津市光復精細化工研究所生產，生產批號為20100602。以下檢測方法與步驟均按衛生部《消毒技術規范》2008版要求進行。耐藥菌株金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌，由中南大學湘雅醫學院醫學檢驗系實驗中心提供，標準菌株金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、銅綠假單胞菌（ATCC15442）大腸桿菌（ATCC25922）的標準菌株購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

1.1菌懸液的制備

分別取耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）和標準菌株金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、銅綠假單胞菌（ATCC15442）大腸桿菌（ATCC25922）的培養物，把各菌群放入培養瓊脂中，使用5mL稀釋液對其進行清洗，并進行混合，從而達到細菌懸浮的均勻狀態，配制成所需濃度的菌懸液，備用。

1.2中和劑鑒定試驗

用滅菌蒸餾水配制不同濃度的過氧碳酸鈉溶液（0.2%、0.5%、1.0%），作為按0.5%、把耐藥菌株和標準菌株相應的分成三組：第一組，以金黃色葡萄球菌的耐藥菌株和標準菌株為試驗菌；第二組，以銅綠假單胞菌的耐藥菌株和標準菌株為試驗菌；第三組，以大腸埃希菌的耐藥菌株和標準菌株為試驗菌。各設計6組試驗，按懸液定量殺菌試驗程序進行。（1）過氧碳酸鈉溶液+菌懸液；（2）（過氧碳酸鈉溶液+菌懸液）+中和劑；（3）中和劑+菌懸液；（4）（過氧碳酸鈉溶液+中和劑）+菌懸液；（5）稀釋液+菌懸液；（6）稀釋液+中和劑+培養基。以第一組為例，濃度為1.00%的消毒劑作用10min，第1、2組無菌生長或有少量菌生長，第3、4、5組有相似量試驗菌生長，懸液試驗在1？07cfu/mL～5？07cfu/mL之間，其組間菌落數誤差率應不超過15%，第6組無菌生長。表明所選中和劑及其濃度為適宜。

1.3過氧碳酸鈉溶液定量殺菌試驗

取0.5mL菌懸液和0.5mL有機干擾物質在20℃？℃水浴中5min后，再用無菌吸液管加入4.0mL過氧碳酸鈉溶液，迅速混勻并立即計時，對不同濃度的過氧碳酸鈉溶液（0.2%、0.5%、1.0%）作用至預定時間（5min、10min、15min），分別吸取0.5mL試驗菌與過氧碳酸鈉溶液混合液加于4.5mL中和劑中，混勻，作用10min后，取1.0mL該液按活菌培養計數方法測定存活菌數。如平板上生長的菌落數較多時，進行系列10倍稀釋后，再進行活菌培養計數。同時用標準硬水代替過氧碳酸鈉溶液，進行平行試驗，作為陽性對照。各組試驗重復3次，分別計算殺滅率。

1.4質量控制

整個試驗操作嚴格按照《消毒技術規范》2008版的要求進行，試驗操作人員都經過了專業培訓。資料數據經嚴格審查核對。

1.5數據處理

資料采用Excel2003進行錄入匯總，并利用Excel2003計算殺滅率。

2結果

2.1中和劑鑒定試驗

用含5g/L硫代硫酸鈉、20g/L吐溫80的PBS溶液作為中和劑，結果顯示，第一組不長菌，第二組長少量菌，第三、四、五組組間菌落數相差≤15%，第六組不長菌，表明中和劑可有效中和過氧碳酸鈉溶液對金黃色葡萄球菌的殘留作用，且對培養基無不良影響。見表1。

2.2 過氧碳酸鈉溶液定量殺菌試驗

結果表明，過氧碳酸鈉溶液對標準菌株和耐藥菌株的殺滅率無顯著性差異。在0.20%、0.50%、1.00%的過氧碳酸鈉溶液對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌的標準菌株和耐藥菌株分別作用5min、10min、15 min，平均殺滅率見表2。

3討論

由于過氧碳酸鈉無味、無毒，冷水中易于溶解，去污力強，溶于水后能放出氧而起到漂白殺菌等多種功效，符合現代洗滌劑發展潮流。

近年來，由于耐藥菌株所致感染的流行性疾病和發病率都呈逐年上升的趨勢，而且其耐藥性也逐年增加，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA），對 -內酰胺類及其他多種抗菌藥物耐藥，所導致的各種感染治療困難，病死率較高，因此逐漸引起臨床的重視。細菌生物膜（bacterialbiofilm，BBF）是指附著于有生命或無生命物體表面被細菌胞外大分子包裹的有組織的細菌群體及其分泌的多糖基質、纖維蛋白、脂蛋白等多糖蛋白復合物。是細菌耐藥性形成的重要機制之一，也是許多慢性感染性疾病反復發作和難以控制的主要原因。過氧碳酸鈉分解產物中的羥基自由基（HO2-），其羥基自由基因其具有很高的氧化電勢，能夠破壞微生物通透性屏障，破壞病原微生物的蛋白質、酶和核酸，導致病原微生物的死亡。在低濃度下對革蘭氏陽性菌（如金黃色葡萄球菌）、革蘭氏陰性菌、酵母、藻類等均有顯著的殺滅效果。

根據聯合國環境署公布的《經合組織過氧碳酸鈉篩選數據組》和歐盟Human&EnvironmentalRiskAssessment（簡稱HERA）項目專家報告《過氧碳酸鈉對人類和環境的風險評估》，過氧碳酸鈉溶于水后離解成過氧化氫、碳酸根離子和鈉離子，它們都是人體和環境中自然存在的物質。

過氧碳酸鈉，溶于水后離解成過氧化氫、碳酸根離子和鈉離子，其實也相當于是一個過氧化氫復方消毒劑。有文獻報道過氧化氫與許多理化因子均有協同增效作用，如有機酸、碘化鉀、硝酸銀螯合物等。本研究結果表明，不同濃度（0.20%、0.50%、1.00%）的過氧碳酸鈉對耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌），作用不同時間（5min、10min、15min），殺滅率達80.00%以上。結論過氧碳酸鈉對耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）具有很好的殺滅效果。濃度越高，作用時間越長，殺菌作用越強。

綜上所述，過氧碳酸鈉性能穩定，受有機物的干擾小，對耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）殺滅效果好，能夠廣泛應用于人口相對集中的公共場所。

（通信作者：魏丹）

基金項目：湖南省科技廳資助項目（2011SK3259）。

參考文獻

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