化療對晚期非小細胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變狀態的影響

徐炎良 陳春香

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化療對晚期非小細胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變狀態的影響

徐炎良 陳春香

目的 探討化療對晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者表皮生長因子受體(EGFR)基因突變狀態的影響。方法 選取85例晚期NSCLC患者作為研究對象。化療前、化療4～6個周期后均采集所有研究對象的外周血，采用酶切富集聯合變性高效液相色譜法(REDE-DHPLC)檢測EGFR-19外顯子、EGFR-21外顯子的突變狀態。結果 85例晚期NSCLC患者化療前EGFR突變陽性率為55.29%(47/85)，化療4～6個周期后EGFR突變陽性率為35.29%(30/85)，化療前后EGFR突變陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)。化療前后共有37例晚期NSCLC患者發生EGFR突變，其中27例從EGFR突變陽性轉為EGFR突變陰性，10例患者從EGFR突變陰性轉為EGFR突變陽性，兩種突變模式發生率比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論 晚期NSCLC患者化療過程中EGFR突變狀態可能會發生改變，因此在給予其靶向治療前應重新對其進行EGFR突變檢查。

非小細胞肺癌；表皮生長因子受體；基因突變

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:386～388)

諸多研究表明，分子靶向治療已成為晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者的重要治療手段之一，但是其療效取決于患者的表皮生長因子受體(EGFR)基因突變狀態[1-2]。值得注意的是，分子靶向治療的費用昂貴，因此在此之前有必要給予患者EGFR基因突變狀態檢查[3]。由于多數晚期NSCLC患者在入院時常先采用化療治療，而化療前后患者EGFR基因突變狀態是否會改變則有待我們進一步研究。本研究即旨在探討化療對晚期NSCLC患者EGFR基因突變狀態的影響，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2013年1月至2015年12月在江西省腫瘤醫院接受化療的85例晚期NSCLC患者。納入標準：①經組織學和(或)細胞學檢查確診為NSCLC；②臨床分期為Ⅲb期～Ⅳ期；③KPS評分>60分，預計生存期>3個月；④簽署知情同意書。排除標準：①既往已接受手術或其他抗腫瘤治療；②各種原因導致化療周期數<4個。上述85例晚期NSCLC患者，男性59例，女性26例；年齡47.2～70.9歲，平均(56.5±5.8)歲；病理類型：腺癌49例、鱗癌36例；臨床分期：Ⅲb期53例，Ⅳ期32例。

1.2 研究方法

1.2.1 化療方案 所有患者均接受一線化療方案治療，包括GP方案(鉑類+吉西他濱)、DP方案(鉑類+多西他賽)、AP方案(鉑類+培美曲塞)等。NSCLC非鱗癌患者首選AP方案化療，NSCLC鱗癌患者可選擇GP方案或DP方案化療，化療周期數為4～6個。

1.2.2 EGFR突變狀態檢測 方法如下：①空腹采集所有研究對象外周血4 ml，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，離心分離血漿，采用QIAamp DNA Blood Mini Kit試劑盒(美國QIAGEN公司)提取游離DNA。注意化療前、化療4～6個周期后均進行EGFR突變狀態檢測；②第一輪PCR擴增體系：10×PCR緩沖液2 μl、5U/μl Taq DNA聚合酶0.2 μl、10 μmol/μl dNTP 2 μl、10 μmol/μl上游引物1 μl、10 μmol/μl下游引物1 μl、模板DNA 2 μl。PCR擴增參數：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 50 s，40個循環；72 ℃ 7 min。③EGFR-19外顯子突變檢測：將第一輪PCR產物加入含有Mse Ⅰ(美國NEB公司)的酶切體系，37 ℃孵育150 min，對酶切產物進行第二輪PCR擴增，其擴增體系、擴增參數與第一輪PCR擴增一致，采用DNASep柱(美國Transgenomic公司)對產物進行分析。④EGFR-21外顯子突變檢測：將第一輪PCR產物加入含有Msc Ⅰ(美國NEB公司)的酶切體系，37 ℃孵育150 min，對酶切產物進行第二輪PCR擴增，其擴增體系、擴增參數與第一輪PCR擴增一致，對產物采用Sau 96Ⅰ(美國Transgenomic公司)進行酶切，95℃孵育5min，以1℃/min速度降至35 ℃復性，采用DNASep柱對產物進行分析。

1.3 統計學分析

應用SAS 9.3統計軟件進行數據分析，研究對象化療前后EGFR突變狀態比較采用配對設計χ2檢驗，兩種突變模式發生率比較采用χ2檢驗，P<0.01為差異有統計學意義。

2 結果

85例晚期NSCLC患者化療前EGFR突變陽性率為55.29%(47/85)，化療4～6個周期后EGFR突變陽性率為35.29%(30/85)，化療前后EGFR突變陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)。化療前后共有37例晚期NSCLC患者發生EGFR突變，其中27例從EGFR突變陽性轉為EGFR突變陰性，化療前后EGFR突變陽性轉陰性發生率為57.45%(27/47)，10例患者從EGFR突變陰性轉為EGFR突變陽性，化療前后EGFR突變陰性轉陽性發生率為33.33%(10/30)，兩種突變模式發生率比較差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

化療是目前臨床上治療各種晚期惡性腫瘤最常用的方法，盡管其療效已經獲得了充分認可，但是由于化療常導致患者繼發嚴重的毒副反應，并且其療效尚有進一步提升的空間，因此探索療效更好、安全性更高的治療手段成為當前腫瘤學研究的重要課題[4-5]。隨著醫學技術的發展，分子靶向治療逐步應用于臨床，該治療手段主要針對腫瘤特異的基因異常進行治療，從而具有針對性強、療效較好、副作用輕等優點[6]。盡管費用問題限制了分子靶向治療的大規模推廣使用，但是對于經濟條件較好的患者來說，分子靶向治療不失為一種理想的抗腫瘤治療手段。

肺癌是目前臨床上分子靶向治療研究最多的惡性腫瘤之一，肺癌領域應用的治療靶點已包括EGFR、血管內皮生長因子(VEGF)、間變淋巴瘤激酶(ALK)等[7]。國內以EGFR研究最為透徹。邱純等[8]報道，吉非替尼治療晚期NSCLC患者的無進展生存期(PFS)顯著高于標準化療組，由此可見吉非替尼治療NSCLC的遠期療效優于標準化療。朱國煉等[9]報道，厄羅替尼治療晚期NSCLC患者的臨床總有效率、疾病控制率均顯著高于多西他賽，而不良反應發生率則顯著低于多西他賽，由此可見厄羅替尼是治療晚期NSCLC安全、有效的藥物之一。由此可見，分子靶向治療晚期NSCLC的疾病控制時間、有效率、安全性均優于傳統化療，其治療晚期NSCLC已倍受臨床青睞。

值得注意的是，分子靶向治療的費用極其昂貴，因此臨床多將其作為晚期惡性腫瘤患者的二線甚至三線治療方案，即很多接受分子靶向治療的惡性腫瘤患者既往常有化療史[10]。由于分子靶向治療的基礎就是腫瘤特異的基因異常，如果化療對腫瘤特異基因異常產生一定的影響，這勢必會影響分子靶向治療的療效，因此本研究探討化療對晚期NSCLC患者EGFR基因突變狀態的影響就具有重要的臨床意義。

在本研究中，我們先對85例晚期NSCLC患者進行EFGR突變狀態檢查，然后給予研究對象4～6個療程的化療，化療結束后再對所有患者進行EFGR突變狀態檢查，結果顯示研究對象化療前后EGFR突變陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)，進一步分析顯示57.45%的晚期NSCLC患者由化療前的EGFR突變陽性轉變為化療后的EGFR突變陰性，33.33%的晚期NSCLC患者由化療前的EGFR突變陰性轉變為化療后是EGFR突變陽性，兩種突變模式發生率比較差異有統計學意義(P<0.05)。綜上所述，晚期NSCLC患者在化療過程中EGFR突變狀態可能會發生改變，因此在給予其靶向治療前應重新對其進行EGFR突變檢查，但是化療誘使EGFR突變狀態改變的機制有待進一步研究。

[1] 馮 佳，許 斌.EGFR 19與21號外顯子突變的晚期非小細胞肺癌一線TKI治療療效差異的研究進展〔J〕.腫瘤學雜志，2016，22(3)：167-171.

[2] 寧 燕.EGFR-TKIs輔助治療非小細胞肺癌的臨床觀察〔J〕.實用癌癥雜志，2016，31(6)： 940-943.

[3] 張坤寧，路 軍，趙宏穎，等.表皮生長因子受體、人類表皮生長因子受體2、人類表皮生長因子受體3表達與非小細胞肺癌預后的關系〔J〕.腫瘤研究與臨床，2016，28(2)：73-77，89.

[4] 梁榮祥，李蘇萌.惡性腫瘤的分子靶向治療〔J〕.山東醫藥，2010，50(1)：104-105.

[5] 覃裕露，趙 楊，申興斌.EGF、EGFR、C-erbB-2在惡性腫瘤中的研究進展〔J〕.承德醫學院學報，2012，29(2)：182-185.

[6] 金靜思，賀巾釗，周黎明.非小細胞肺癌分子靶向治療藥物的現狀及進展〔J〕.中國腫瘤臨床，2015，42(17)：881-885.

[7] 金向宇.非小細胞肺癌分子靶向治療研究進展〔J〕.中國基層醫藥，2015，22(17)：2707-2709.

[8] 邱 純.吉非替尼與化療治療EGFR突變非小細胞肺癌的療效比較〔J〕.中國醫藥指南，2014，12(5)：169-170.

[9] 朱國煉.厄羅替尼與多西他賽治療晚期非小細胞肺癌的臨床療效對比研究〔J〕.實用中西醫結合臨床，2016，16(3)：37-38.

[10] 趙 睿，常小紅.分子靶向治療在非小細胞肺癌中的研究進展〔J〕.實用癌癥雜志，2014，29(3)：364-366.

(編輯：吳小紅)

Influence of Chemotherapy on Epidermal Growth Factor Receptor Gene Mutations inPatients with Advanced Non-small Cell Lung Cancer

XU Yanliang,CHEN Chunxiang.

Jiangxi Cancer Hospital,Nanchang，330029

Objective To investigate the influence of chemotherapy on epidermal growth factor receptor gene(EGFR) mutations in patients with advanced non-small cell lung cancer(NSCLC).Methods 85 cases of advanced NSCLC were selected.Peripheral blood was collected from all the subjects before and after 4～6 cycles of chemotherapy,then EGFR exon 19 and exon 21 mutations were detected by restriction endonuclease digestion combine with denaturing high performance liquid chromatography (REDE-DHPLC).Results The EGFR mutation positive rate was 55.29% (47/85) in 85 cases of advanced NSCLC before chemotherapy,then the EGFR mutation positive rate converted to 35.29% after 4～6 cycles of chemotherapy.There was statistical difference in EGFR mutation positive rate between before and after chemotherapy(P<0.05).37 cases of advanced NSCLC had EGFR mutations before and after chemotherapy,including 27 cases from positive EGFR mutation to negative EGFR mutation,10 patients from negative EGFR mutation to positive EGFR mutation.There was statistical difference in incidence rate between 2 kinds of mutation models(P<0.05).Conclusion EGFR mutation status may change during chemotherapy in patients with advanced NSCLC,so it should be re-examined before targeted therapy.

Non-small cell lung cancer(NSCLC)；Epidermal growth factor receptor gene(EGFR)；Gene mutation

330029 江西省腫瘤醫院(徐炎良)；334400 南昌大學撫州醫學分院(陳春香)

陳春香

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.03.011

R734.2

A

1001-5930(2017)03-0386-03

2016-11-08

2016-12-05)