過(guò)敏性紫癜患兒急性期血漿sCD40L水平變化及意義

李恬恬,呂振梅,雷珂,張秋業(yè)

(1青島市婦女兒童醫(yī)院，青島266000；2青島大學(xué)附屬醫(yī)院)

過(guò)敏性紫癜患兒急性期血漿sCD40L水平變化及意義

李恬恬1,呂振梅2,雷珂2,張秋業(yè)2

(1青島市婦女兒童醫(yī)院，青島266000；2青島大學(xué)附屬醫(yī)院)

目的探討過(guò)敏性紫癜(HSP)患兒急性期血漿可溶性CD40配體(sCD40L)水平的變化及意義。方法選擇急性期HSP患兒79例(HSP組)，按有無(wú)腎臟損害進(jìn)一步分為紫癜性腎炎組(HSPN)和非紫癜性腎炎組(NHSPN)，另?yè)耋w檢健康兒童29例為對(duì)照組。采用免疫ELISA法測(cè)定血漿中sCD40L水平，采用免疫散射比濁法檢測(cè)血漿免疫球蛋白(包括IgG、IgA、IgM和IgE)水平，采用流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定外周血中淋巴細(xì)胞亞群。Pearson相關(guān)檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果與對(duì)照組比較，其余三組血漿sCD40L水平高(P均<0.05);HSPN組高于NHSPN組(P<0.05)。HSPN組外周血B細(xì)胞所占百分比高于NHSPN組(P均<0.05)。相關(guān)分析結(jié)果顯示，HSP患兒血漿sCD40L水平與外周血B細(xì)胞和血漿IgA水平存在正相關(guān)性(r分別為0.516、0.322,P均<0.05),與總T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞所占百分比、CD8+T細(xì)胞所占百分比、CD4+/CD8+、IgM、IgG、IgE均無(wú)明顯相關(guān)性(P均>0.05)。結(jié)論HSP患兒急性期血漿sCD40L水平升高，sCD40L異常表達(dá)可能在HSP尤其是HSPN的免疫發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。

過(guò)敏性紫癜；可溶性CD40L；兒童

過(guò)敏性紫癜(HSP)是兒童時(shí)期常見(jiàn)的一種小血管炎性疾病，該病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，既往研究提示可能為不確定的感染源或過(guò)敏源作用于有遺傳易感性的個(gè)體，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)以體液免疫異常為主的免疫紊亂，B淋巴細(xì)胞存在多克隆活化，促進(jìn)了抗體產(chǎn)生及同種型轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致血清IgA(尤其是IgA1)水平升高或清除障礙，IgA、IgA免疫復(fù)合物等沉積于全身小血管壁，通過(guò)一系列機(jī)制造成毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷[1]。B細(xì)胞的活化過(guò)程需要共刺激分子的參與，CD40-CD40L信號(hào)通路作為B細(xì)胞活化最重要的第二信號(hào)，可以促進(jìn)B細(xì)胞的活化、增殖，使其凋亡延遲，并促進(jìn)抗體的產(chǎn)生及類(lèi)別轉(zhuǎn)換[2]。CD40L分子是腫瘤壞死因子超家族成員，是一種Ⅱ型跨膜糖蛋白，其胞質(zhì)外區(qū)的部分可形成可溶性分子，即可溶CD40L(sCD40L)，研究認(rèn)為,sCD40L也具有CD40L的生物學(xué)效應(yīng)。已有研究發(fā)現(xiàn),sCD40L在血小板減少性紫癜、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病等多種免疫相關(guān)性疾病患者血漿中的水平升高。也有學(xué)者認(rèn)為,sCD40L可能與狼瘡腎損害有關(guān)[3]。但目前尚無(wú)關(guān)于急性期HSP患者體內(nèi)sCD40L水平變化的相關(guān)研究,本文進(jìn)行了相關(guān)探討。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年8月～2015年9月在青島市婦女兒童醫(yī)院住院治療的急性期HSP患兒79例，均符合2006年歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟和歐洲兒科風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制定的HSP的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男49例、女30例，年齡2～14歲、平均8歲。依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)腎臟病學(xué)組制定的HSPN診斷標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)一步將其分為紫癜性腎炎組(HSPN)和非紫癜性腎炎組(NHSPN)，其中HSPN組26例,NHSPN組53例。患兒均為初次發(fā)病，發(fā)病前2周內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑，既往體健，排除其他免疫性疾病及血液系統(tǒng)疾病。選擇同期于門(mén)診體檢健康的兒童29例作為對(duì)照組，其中男18例、女11例，年齡在3～13歲、平均8歲，采血前2周以?xún)?nèi)未使用過(guò)糖皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)劑。兩組年齡、性別具有可比性。

1.2 觀察指標(biāo)及其檢測(cè)方法 清晨無(wú)菌操作下抽取空腹靜脈血，行淋巴細(xì)胞亞群和免疫球蛋白檢測(cè)。同時(shí)分離血漿并于-20 ℃冰箱凍存保存。血漿sCD40L水平檢測(cè)采用ELISA法，人sCD40L ELISA測(cè)定試劑盒購(gòu)于Elabscience公司。淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定采用流式細(xì)胞技術(shù)。血漿免疫球蛋白測(cè)定采用免疫散射比濁法。

2 結(jié)果

2.1 各組血漿sCD40L水平比較 HSP組、HSPN組、NHSPN組及對(duì)照組血漿sCD40L水平分別為(2 209.04±951.08)、 (2 546.46±943.86)、(2 107.45±913.25)、(1 702.36±668.55) pg/mL，血漿sCD40L水平比較，HSP組、HSPN組、NHSPN組高于對(duì)照組，HSPN組高于NHSPN組，P均<0.05。

2.2 HSPN與NHSPN組血漿免疫球蛋白、外周血淋巴細(xì)胞亞群水平比較 HSPN組血漿IgG、IgA、IgM、IgE分別為(11.8±4.0)、(1.59±0.64)、(1.27±0.58)g/L,( 89.9±8.7) IU/mL, NHSPN組分別為(13.6±4.0)、(1.49±0.41)、(1.27±0.55)g/L、(91.1±7.1)IU/mL。兩組比較，P均>0.05。HSPN組外周血B細(xì)胞、T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞所占百分比及CD4+/CD8+分別為24.8%±9.1%、64.0%±8.5%、31.6%±6.6%、25.1%±6.7%、1.3±0.5，NHSPN組分別為20.0%±5.8%、64.9%±9.8%、31.3%±8.3%、26.0%±5.5%、1.2±0.4。兩組外周血B細(xì)胞所占百分比比較，P<0.05。

2.3 相關(guān)性分析 HSP組血漿sCD40L與IgA呈正相關(guān)性(r=0.322，P=0.018)，與IgG、IgM、IgE無(wú)相關(guān)性(r分別為-0.163、0.104、0.112，P均>0.05)。血漿sCD40L水平與外周血B細(xì)胞所占百分比存在正相關(guān)性(r=0.516,P<0.05)，與總T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞所占百分比、CD8+T細(xì)胞所占百分比及CD4+/CD8+均無(wú)相關(guān)性(r分別為0.152、0.108、0.288、-0.211，P均>0.05)。

3 討論

HSP發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，免疫功能的異常在其發(fā)病中扮演重要角色，主要包括細(xì)胞免疫紊亂、體液免疫失調(diào)，另外炎癥機(jī)制、凝血與纖溶異常和基因易感性等也參與本病發(fā)病。既往研究顯示，細(xì)胞免疫紊亂主要表現(xiàn)在淋巴細(xì)胞亞群失衡及其所致的細(xì)胞因子異常，輔助性T淋巴細(xì)胞(CD4+T細(xì)胞)與抑制性T淋巴細(xì)胞(CD8+T細(xì)胞)比值降低，輔助性淋巴細(xì)胞亞群中Th1/Th2明顯失衡。另外也有研究[4]顯示，HSP急性期Treg細(xì)胞也存在異常活化。T淋巴細(xì)胞亞群失衡、細(xì)胞因子的異常通過(guò)一系列機(jī)制進(jìn)一步導(dǎo)致體液免疫紊亂，B細(xì)胞過(guò)度活化、增殖，免疫球蛋白分泌增加，IgA生成增多，IgA、IgA復(fù)合物等沉積于血管壁，并進(jìn)一步激活補(bǔ)體，促進(jìn)炎癥介質(zhì)釋放，導(dǎo)致廣泛小血管炎癥，累及多個(gè)器官[5]。2012年CHCC2012新的血管炎分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)中將HSP定義為一種IgA血管炎，進(jìn)一步闡明了IgA介導(dǎo)的免疫異常在HSP發(fā)病中的作用[6]。

盡管HSP是一種自限性疾病，但有無(wú)腎損害及腎損害的嚴(yán)重程度，是決定其預(yù)后的關(guān)鍵因素。既往有研究發(fā)現(xiàn)，大約有40%的HSP患兒會(huì)出現(xiàn)腎臟損害，大多數(shù)發(fā)生于起病1個(gè)月內(nèi)，也有一部分發(fā)生較晚，于1～6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)。近年有大量關(guān)于HSPN的研究，涉及腎臟損害的高危因素、發(fā)病機(jī)制及預(yù)測(cè)指標(biāo)等方面。

HSPN機(jī)制尚未完全弄清楚，腎臟穿刺及免疫熒光電鏡結(jié)果顯示HSPN病理改變與IgA腎病存在相似之處，認(rèn)為HSPN和IgA腎病可能有共同的發(fā)病機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn),與IgA腎病相似，在HSPN患者的循環(huán)免疫復(fù)合物及腎小球系膜沉積物中可發(fā)現(xiàn)有IgA1[7]，且兩者血清半乳糖缺乏的IgA1(Gd-IgA1)水平均較HSP無(wú)腎臟損害組及對(duì)照組升高，重要的是HSP無(wú)腎臟損害組與健康對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[8]。因此Gd-IgA1可能在HSPN和IgA腎病發(fā)病中扮演重要角色。更深入的研究認(rèn)為，其發(fā)病機(jī)制可能是Gd-IgA1被IgG或抗聚糖抗體特異性識(shí)別并結(jié)合，導(dǎo)致循環(huán)免疫復(fù)合物形成，由于這些免疫復(fù)合物體積較大，不能被肝臟的唾液酸糖蛋白受體識(shí)別并有效清除，因此在循環(huán)中含量增加，沉積于腎小球系膜，系膜細(xì)胞進(jìn)一步活化增殖，產(chǎn)生大量細(xì)胞因子及趨化因子，同時(shí)細(xì)胞表面IgA1的受體CD71表達(dá)也增加，使復(fù)合物黏附增加，最終導(dǎo)致腎臟損害。這種IgA1的異常糖基化可能與遺傳相關(guān)，糖基化的異常可能是由于特定糖基化轉(zhuǎn)移酶表達(dá)的變化導(dǎo)致的。研究發(fā)現(xiàn)，HSPN和IgA腎病患者體內(nèi)β1，3-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)減少，α2，6-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)增多；NHSPN組及健康對(duì)照組無(wú)這種改變[9]。

CD40與CD40L是體內(nèi)一對(duì)重要的協(xié)同刺激分子，為B細(xì)胞提供最重要的第二信號(hào)，參與B細(xì)胞的增殖、分化、抗體產(chǎn)生及類(lèi)別轉(zhuǎn)換，對(duì)T細(xì)胞的活化及相關(guān)細(xì)胞因子的分泌也有重要作用，為T(mén)細(xì)胞與B細(xì)胞之間作用的重要橋梁。

既往研究顯示，CD40-CD40L與兒科多種疾病如原發(fā)性免疫缺陷病、血小板減少性紫癜、川崎病、哮喘、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等密切相關(guān)[10]。也有大量研究顯示，CD40-CD40L參與HSP的發(fā)病。李燕林等[11]從轉(zhuǎn)錄水平證明 HSP患兒CD40L mRNA 的表達(dá)高于對(duì)照組,HSPN組CD40L mRNA 的表達(dá)高于NHSPN組。朱國(guó)際[12]研究進(jìn)一步證實(shí)，CD40-CD40L表達(dá)異常與HSP的體液免疫及細(xì)胞免疫紊亂密切相關(guān)，HSP患兒CD40L表達(dá)水平明顯升高，免疫球蛋白產(chǎn)生異常,淋巴細(xì)胞亞群存在Th2過(guò)度活化。sCD40L為CD40L胞質(zhì)外區(qū)形成的可溶性的分子，sCD40L也可與CD40結(jié)合，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。研究顯示，sCD40L分子參與免疫性疾病的發(fā)病過(guò)程。國(guó)外的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征血漿中sCD40L較對(duì)照組明顯升高。陰晴等[13]研究認(rèn)為，血清sCD40L的水平可能與類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動(dòng)呈一定相關(guān)性。另外還有研究顯示，血漿sCD40L水平在炎癥性腸病及特發(fā)性血小板減少性紫癜[14]患者中也有明顯升高。本研究結(jié)果顯示，HSP組血漿sCD40L水平高于對(duì)照組，HSPN組血漿sCD40L水平高于NHSPN組。提示sCD40L可能參與HSP的發(fā)病過(guò)程，且與腎臟損害存在一定的關(guān)聯(lián)。

丁艷等[5]研究發(fā)現(xiàn)，HSPN組的IL-10、IgA水平高于無(wú)腎臟損害的紫癜組，且IgA水平升高者HSPN的發(fā)生率高于IgA水平正常者，進(jìn)一步提示HSPN是一種由IgA介導(dǎo)的免疫復(fù)合物性腎炎[15]。本試驗(yàn)HSPN組血漿sCD40L水平高于NHSPN組，且進(jìn)一步將sCD40L與免疫球蛋白及淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)sCD40L與B細(xì)胞所占百分比及IgA存在一定的正相關(guān)性，可能是sCD40L通過(guò)CD40-CD40L作用通路，促進(jìn)了B細(xì)胞增殖、分化、抗體產(chǎn)生及類(lèi)型轉(zhuǎn)換，使IgA水平升高，最終導(dǎo)致HSPN發(fā)生。

總之，sCD40L可能參與HSP的免疫紊亂，并可能與HSPN有關(guān)，但本研究存在樣本量偏小等問(wèn)題，HSP及HSPN的確切發(fā)病機(jī)制仍需更廣泛更深入的研究，sCD40L與HSP免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制的關(guān)系及能否作為HSPN的敏感預(yù)測(cè)指標(biāo)，仍需大樣本研究證實(shí)。

[1] 唐雪梅.過(guò)敏性紫癜病因及免疫發(fā)病機(jī)制[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2012，27(21):1634-1635.

[2] 趙燁，劉璽，王若愚，等.CD40/CD40L系統(tǒng)對(duì)B淋巴細(xì)胞的作用研究進(jìn)展[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2015,31(5):716-719.

[3] Goules A, Tzioufas AG, Manousakis MN, et al. Elevated levels of soluble CD40 ligand (sCD40L) in serum of patients with systemic autoimmune diseases[J]. J Autoimmun, 2006,26(3):165-171.

[4] 高輝香，田玲玲，常紅，等.過(guò)敏性紫癜患兒外周血單核細(xì)胞TLR2、TLR4、TLR6及與Treg相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)[J].中國(guó)組織工程研究，2014，38(18)：6222-6226.

[5] 丁艷,尹薇,何學(xué)蓮,等.兒童過(guò)敏性紫癜急性期免疫功能探討[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志, 2013,29(5):518-521.

[6] Jennette JC， Falk RJ， Bacon PA， et al． 2012 revised International Chapel Hill Consensus Conference Nomenclature of Vasculitides [J]． Arthritis Rheumm， 2013，65(1)：l-11．

[7] Novak J, Moldoveanu Z, Renfrow MB, et al. IgA nephropathy and Henoch-Schoenlein purpura nephritis: aberrant glycosylation of IgA1, formation of IgA1-containing immune complexes, and activation of mesangial cells[J]. Contrib Nephrol, 2007,157:134.

[8] Lau KK, Wyatt RJ, Zina M, et al. Serum levels of galactose-deficient IgA in children with IgA nephropathy and Henoch-Schonlein purpura[J]. Pediatr Nephrol, 2007,22(12):2067-2072.

[9] Raska M, Moldoveanu Z, Suzuki H, et al. Identification and characterization of CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1 alpha2,6-sialyltransferase in IgA1-producing cells[J]. J Mol Biol, 2007,369(1):69-78.

[10] 李然然.CD40-CD40配體與兒科疾病[J].國(guó)際兒科學(xué)雜志,2013，40(1)：80-83.

[11] 李燕林，封其華，王永清，等．過(guò)敏性紫癜患兒外周血CD40LmRNA表達(dá)及其與血清IL-6和IL-8的關(guān)系[J]．臨床兒科雜志，2009，27(10)：952-954．

[12] 朱國(guó)際．兒童過(guò)敏性紫癜CD40-CD40L的表達(dá)[J]．中國(guó)血液流變學(xué)雜志，2005，15(1)：115-116．

[13] 陰晴，邵啟祥，段秀杰,等.類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清sCD40L水平的變化及意義[J].山東醫(yī)藥，2008，48(20)：30-32.

[14] 鄒湘,趙曉明,馮建飛.CD40/sCD40L與兒童ITP的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥,2007,47(4):37-37.

[15] Kawasaki Y. The pathogenesis and treatment of pediatric Henoch-Sch?nlein purpura nephritis [J]. Clin Immunol, 2010,137(1):166-175.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.45.026

R978.1

B

1002-266X(2017)45-0079-03

張秋業(yè)(E-mail:qyzh9816@163.com)

2017-08-07)