顆粒鏈球菌屬鑒定方法及臨床感染的研究進展

吳玲玲，田玉靜，李 震，桑顏顏，姜梅杰，趙書平

顆粒鏈球菌屬是人類口腔、泌尿生殖道和腸道內的正常菌群，Frenkel和 Hirsch［1］于 1961 年首次在感染性心內膜炎和中耳炎患者的血培養中分離得到，由于他們特殊的生長要求及圍繞其他細菌生長的衛星現象，定義為營養變異鏈球菌（nutritionally variant streptococci，NVS）。2000 年，Collins等［2］應用16S rRNA基因序列研究，將NVS分為顆粒鏈球菌屬和乏氧菌屬，其中乏氧菌屬由軟弱乏氧菌1個菌種組成。顆粒鏈球菌屬包含毗鄰顆粒鏈球菌（Granulicatella adiacens）、副毗鄰乏養球菌（Granulicatella para-adiacens）、細長顆粒鏈球菌（Granulicatella elegans）和貂鯨顆粒鏈球菌（Granulicatella balaenopterae）。

1 培養及生化特征

顆粒鏈球菌屬為無動力、無芽孢，兼性厭氧，觸酶和氧化酶陰性的革蘭陽性球菌。但在缺乏營養的條件下，則顯示出多形性，如球菌、球桿菌及桿菌等。10℃和45℃不生長，在6.5%NaCl肉湯中不生長，對營養要求較高，在血平板中加入0.01%L-半胱氨酸或0.001%鹽酸吡哆醛可形成針尖樣大小，灰白色菌落，對奧普托欣耐藥，對萬古霉素敏感。PYR陽性，堿性磷酸酶陰性，不水解精氨酸和馬尿酸鹽，不發酵核糖、阿拉伯糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、棉子糖。

2 鑒定方法

對乏養球菌和顆粒鏈球菌與相關菌的鑒定通常較為困難。這是因為此類菌在培養鏈球菌的常用培養基上生長不良，以及這些細菌的形態多形性、染色可變性及生化特性的非典型性等。目前的鑒定方法如下。

2.1 衛星試驗 一般認為“吡哆醛依賴試驗”和“衛星現象”是關鍵的手工鑒定方法。毗鄰顆粒鏈球菌在普通血平板上不上長，在金黃色葡萄球菌周圍呈現衛星現象生長，是一種典型的共生菌。其他可產生衛星現象的細菌有類白喉，葡萄球菌屬，鏈球菌屬，革蘭陰性菌和酵母菌，這些細菌可以提供其生長需要的鹽酸吡哆醛。KOH等［3］的研究表明不同廠家生產的血平板由于所含營養物質的不同而出現不一樣的衛星現象，毗鄰顆粒鏈球菌在有些血平板上不出現衛星現象。衛星試驗結合VITEK 2 Compact系統的GP板條可以鑒定到種。

2.2 16S r RNA基因測序分析 16S rRNA基因為細菌所保守序列及可變序列，后者是細菌種屬鑒定的分子基礎。Yuko等［4］發現16S rRNA基因的PCR擴增可以作為檢測顆粒鏈球菌的常規檢測方法。國內報道［5］用16S rRNA基因測序法鑒定出1株毗鄰顆粒鏈球菌，該菌從1例無肌性皮肌炎患者皮疹潰瘍處分離得到。多項研究表明此方法可以作為具有高效、準確、特異性強等優點。

2.3 MALDI-TOF MS飛行時間質譜法 飛行質譜是近年來興起的一種用于細菌快速鑒定的基于蛋白質組學的新技術，已廣泛用于臨床微生物的快速檢測。多項研究顯示，質譜法對乏養球菌和顆粒鏈球菌鑒定較準確。

2.4 groESL groES和groEL是細菌廣泛存在并且進化中高度保守的基因［6］，也被稱作cpn10/60或hsp10/60，編碼10 kDa和60 kDa的熱休克蛋白，當細菌暴露在高溫或其他脅迫條件下，這些蛋白負責變性蛋白的重新折疊。Hung等［7］應用多重PCR方法對groESL進行擴增，快速地將試驗的標準菌株乏養球菌，顆粒鏈球菌和孿生球菌鑒定到屬。

3 顆粒鏈球菌與感染

隨著研究進一步深入，顆粒鏈球菌屬所導致的感染日益引起人們的重視。越來越多的研究表明他們與多種疾病相關。

3.1 感染性心內膜炎 顆粒鏈球菌引起的感染，雖然不常見（4.3%～6%），卻可以導致嚴重的發病率和致死率，其臨床過程比其他鏈球菌更為嚴重，抗生素治療需要持續的時間更長。文獻統計高達61%的與心內膜炎相關的瓣膜性心臟病是由顆粒鏈球菌屬引起的，比如先天性心臟病或心臟瓣膜修復術。顆粒鏈球菌屬引起感染性心內膜炎的機制尚不清楚，這些細菌被認為起源于口腔齲齒［8，9］，在過去的幾個月內患者有牙科操作而又沒有良好的口腔護理衛生導致了感染性心內膜炎的發生。另外，先前存在的心臟病也是顆粒鏈球菌感染的高危因素。及早分離這些細菌以及聯合瓣膜置換手術可以減少感染性心內膜炎的病死率。

3.2 新生兒敗血癥 Bizzarro等［10］報道一位新生兒肺炎的血培養中分離經生化及16S rRNA擴增證明是毗鄰顆粒鏈球菌，并從其母親的子宮頸口分泌物中分離得到同樣的細菌，可能是通過母嬰傳播感染新生兒，可能是除B群鏈球菌外導致產婦和新生兒感染的另一重要細菌。應用萬古霉素聯合慶大霉素治療后患者好轉出院。

3.3 脊椎骨髓炎 York等［11］報道毗鄰顆粒鏈球菌引發的脊椎骨髓炎，經萬古霉素和頭孢他啶治療聯合手術治療后患者好轉。目前，文獻報道的毗鄰顆粒鏈球菌引起脊椎骨髓炎的感染只有4例。

3.4 髖關節假體感染 Renz等［12］報道1例副毗鄰顆粒鏈球菌導致髖關節假體感染的病例，患者表現為發燒和活動后髖關節的疼痛。對患者關節積液的進行培養，經生化試驗和16S rRNA基因測序鑒定致病菌是副毗鄰顆粒鏈球菌，查體結合患者的病史認為牙根膿腫引起的血流感染是髖關節假體感染的主要原因，突出了關節成形術前治療牙周炎和關節成形術后為預防血流感染保持正確口腔衛生的重要性。

3.5 急性腦膜炎 國內報道［13］毗鄰鏈球菌引起腦膜炎的病例。對患者腦脊液增菌培養，經VITEK全自動生化系統鑒定是毗鄰鏈球菌感染，應用頭孢曲松治療后患者情況好轉，腦脊液常規及生化正常，腦脊液再次培養陰性。

另有文獻［14，15］報道顆粒鏈球菌還可以引起胰腺囊腫，眼內炎，結膜炎和產后敗血癥等。國內也有報道［16］玻璃體中分離出1株毗鄰顆粒鏈球菌。

4 藥敏試驗

CLS推薦微量肉湯稀釋法，使用陽離子調節Mueller-Hinton肉湯，補充2%～5%溶解馬血和0.001%鹽酸吡哆醛。在這些條件下，大約55%的毗鄰顆粒鏈球菌對青霉素敏感，63%對頭孢曲松敏感，96%對美羅培南敏感，100%對萬古霉素敏感。青霉素聯合慶大霉素是通常推薦的治療方案，對青霉素過敏或治療失敗患者，可單用萬古霉素或萬古霉素聯合慶大霉素或利福平治療。

總之，目前有關顆粒鏈球菌屬感染病例的報道日益增多，表型鑒定的低檢出率和耗時過長也增加了診斷及治療的難度。血培養陽性經革蘭染色呈短鏈或成對狀的陽性球菌，在血平板上不生長或生長緩慢，微生物工作者應考慮可能是顆粒鏈球菌，可以加做衛星試驗，有條件的實驗室可以應用16S rRNA基因測序技術輔助鑒定。在血平板中加入鹽酸吡哆醛可以促進這些細菌的生長，雖然顆粒鏈球菌的耐藥性逐漸增加，但青霉素聯合慶大霉素仍然是通常推薦的治療方法。對于臨床微生物檢驗工作者而言，盡早地檢出顆粒鏈球菌將有助于臨床及時診斷和治療。

參考文獻

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