上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點單核苷酸多態性觀察

李騰華，史淑紅，梁文娟，李艷芳

(河北醫科大學第二醫院，石家莊050000)

上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點單核苷酸多態性觀察

李騰華，史淑紅，梁文娟，李艷芳

(河北醫科大學第二醫院，石家莊050000)

目的觀察上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點單核苷酸多態性變化，并探討其與患者預后的關系。方法選取100例上皮性卵巢癌患者為病例組，100例健康體檢者為對照組，檢測并比較兩組受檢者SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點單核苷酸多態性。將病例組患者按基因型分組，對各亞組進行生存分析，比較各組3年生存率。結果病例組基因型CC型5例、CT型52例、TT型43例，等位基因C頻率31%、T頻率69%。對照組基因型CC型13例、CT型38例、TT型49例，等位基因C頻率32%、T頻率68%。兩組CC、CT基因型構成比相比，P均<0.05；TT基因型構成比相比，P>0.05；兩組中 T、C等位基因頻率無統計學差異(χ2=0.046,P=0.830)。病例組SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點基因型為CC、CT、TT患者3年生存率分別為 80%(4/5)、74.1%(40/54)、58.5% (24/41)，三種基因型患者3年生存率相比，P>0.05。結論上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點基因型CC構成比低于正常女性。SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點基因型為CC、CT、TT的上皮性卵巢癌患者3年生存率相近。

SET8基因;單核苷酸多態性；卵巢腫瘤；上皮性卵巢癌

SET8基因又稱為SETD8、PR-SET7或KMT5a，編碼組蛋白 H4賴氨酸 20 單甲基轉移酶，這種酶通過甲基化組蛋白進而調節基因的轉錄、細胞的生長周期及腫瘤的發生發展[1,2]。SET8 基因3′非翻譯區(3′UTR)的 miR-502 結合區域內存在rs16917496 位點單核苷酸多態性(SNP)，以往研究發現該位點單核苷酸多態性與肺癌[3]、白血病[4,5]、肝癌[6]、乳腺癌[7]等多種腫瘤的發生、發展相關，但是其與上皮性卵巢癌發生及預后的關系尚不明確。本研究觀察了上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點SNP，并探討其與預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2008年1月～2012年12月收治的100例上皮性卵巢癌患者為病例組，患者年齡12～76歲。均經術后病理檢查證實為上皮性卵巢癌，臨床分期Ⅰ期18例、Ⅱ期24例、Ⅲ期50例、Ⅳ期8例。患者術前均未接受任何治療。另選同期體檢且年齡匹配的健康女性100例為對照組。本研究已獲我院醫學倫理委員會批準，患者均已簽署知情同意書。

1.2 SET8 基因3′UTR rs16917496位點SNP觀察 病例組患者術前、對照組患者體檢時抽取外周血3 mL，按照DNA提取試劑盒說明書操作提取基因組DNA，用分光光度計測算DNA的濃度及純度，取A260 nm/A280 nm為1.8～2.0的樣品用于后續實驗。登陸NCBI 數據庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/)查找SET8 基因 3′UTR rs16917496 位點的核苷酸序列，設計 PCR 擴增引物。上 游 引 物 為 ：5′-CCTGGTCAGTGGTCAGCAAAT-3′，下 游 引 物 為 ： 5′-CTGGGAAACACGCTCAAAATC-3′。根據預實驗確定PCR最佳反應條件及反應體系，反應體系：Dream Taq Green Master Mix 12.5 μL，上游引物( 10 μmol/L) 1 μL, 下游引物( 10 μmol/L) 1 μL, DNA模板 2 μL, 無核酸水8.5 μL。反應條件: 94 ℃、3 min, 94 ℃、30 s , 60 ℃、30 s , 72 ℃、40 s， 72 ℃、3 min。共38個循環。取5 μL PCR 產物經瓊脂糖凝膠電泳，觀察有無清晰條帶，如有清晰條帶則可說明樣品成功擴增，若無清晰條帶則更改PCR條件重新擴增。將擴增成功的 PCR 產物及上下游引物一起送往上海生工生物工程技術有限公司進行測序，得到每例受檢者的基因型。

1.3 隨訪方法 病例組患者術后均采用電話隨訪3年，無失訪者。

1.4 統計學方法 采用 SPSS 21.0 統計軟件。病例組和對照組基因型和等位基因頻率比較采用χ2檢驗和 Fisher 確切概率法。將病例組患者按基因型分為CC、CT、TT組，采用Kaplan-Meier法進行生存分析，并計算SET8基因3′非翻譯區rs16917496位點不同基因型患者3年生存率。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

病例組基因型CC型5例、CT型52例、TT型43例，等位基因C頻率31%、T頻率69%。對照組基因型CC型13例、CT型38例、TT型49例，等位基因C頻率32%、T頻率68%。兩組CC、CT基因型構成比相比，P均<0.05；TT基因型構成比相比，P>0.05；兩組 T、C等位基因頻率相比，P>0.05。

隨訪3年，病例組32例患者死亡。病例組CC、CT、TT基因型患者3年生存率分別為80%(4/5)、74.1%(40/54)、58.5%(24/41)，各基因型的患者3年生存率相比，P>0.05。

3 討論

卵巢癌是惡性程度最高的女性生殖系統腫瘤，根據2016年美國癌癥統計報告，卵巢癌仍位居婦科腫瘤死因首位[8]，由于早期診斷困難、高復發率以及復發性卵巢癌難以治療等原因，卵巢癌患者的預后很差，70%的晚期卵巢癌患者5年生存率不足30%[9]。而上皮性卵巢癌占卵巢癌的80%以上。目前，對于復發性卵巢癌患者仍缺乏有效的治療手段，治療目的主要在于盡量延長無進展生存期(PFS)，主要的治療方法仍是腫瘤細胞減滅術和化療。隨著腫瘤發病機制研究的逐步深入，分子靶向治療也不斷取得新的進展。

miRNA是一類高度保守的小分子非編碼RNA，可作為癌基因或抑癌基因調節多種基因的表達[10]。最近的研究表明，SNP或突變的miRNA結合位點可能通過改變miRNAs的表達而影響腫瘤的發病風險和結局[11]。Yu等[12]通過病例對照研究發現了12個在人類多種腫瘤中等位基因頻率異常的miRNA 結合位點SNP，SET8基因 miR-502 結合位點就是其中之一。Yang等[13]通過研究發現，SET8基因3′UTR多態性位點rs16917496 T/T基因型提高了中國人群非小細胞性肺癌的發病率。Ding等[14]研究表明rs16917496多態性與小細胞型肺癌的發病風險無相關性，但是，C/C+C/T基因型是小細胞型肺癌患者預后的獨立危險因素。Song等[15 ]發現，SET8 C/C基因型能夠降低絕經前婦女患乳腺癌的風險，而C/C基因型和T/T基因型與絕經后婦女患乳腺癌的風險無明顯關聯，同時還發現，該多態位點通過調節SET8基因的表達從而導致乳腺癌的發病。

本研究結果顯示兩組CC、CT基因型構成比有統計學差異，表明rs16917496位點基因型與上皮性卵巢癌患者的發病風險相關。影響卵巢癌患者預后的因素非常復雜，臨床分期、組織學分級等均有可能影響患者的預后情況。本研究并未證實SET8基因3′端rs16917496位點SNP與卵巢癌患者的預后有關，可能的原因包括：①由于不同原因引起的癌癥和腫瘤發展過程的多樣性導致該SNP可能對不同類型的腫瘤具有不同的影響；②我們的研究也有一定的局限性，比如相對較小的樣本量和部分病例缺乏完整的家族史。要想更充分地評估基因變異與腫瘤預后之間的關系，需要更大規模和更深入的研究，以獲得更確鑿的數據。

雖然我們的研究尚不能證明SET8基因3 ′非翻譯區rs16917496位點SNP可作為卵巢癌預后的參考指標，但是研究表明SNP與卵巢癌的發病風險有一定關聯，如果我們能夠更深入的研究以明確其發病機制，將會對高危人群的早期篩查及制定治療方案起著十分重要的作用。

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[2] Mohammad H, Maryam SN, Majid N, et al. Association of functional polymorphism at the miR-502-binding site in the 3′untranslated region of the SETD8 gene with risk of childhood acute lymphoblastic leukemia, a preliminary report[J]. Tumor Biol, 2014, 35(10):10375-10379.

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.39.015

R711.75

B

1002-266X(2017)39-0051-03

河北醫科大學第二醫院科學研究基金(2h2201616)。

史淑紅(E-mail：sshh3095@162.com)

2017-04-20)