MMP-9在舌癌中的表達及其意義

習利軍，吳菊芳，王利宏，劉建林，陳坤，張鐵柱

(1.深圳市福田區中醫院口腔科，廣東 深圳 518034；2.深圳市福田人民醫院影像科，廣東 深圳 518033；3.廣東醫學院附屬醫院口腔科，廣東 湛江 524001)

MMP-9在舌癌中的表達及其意義

習利軍1，吳菊芳2，王利宏1，劉建林1，陳坤3，張鐵柱3

(1.深圳市福田區中醫院口腔科，廣東 深圳 518034；2.深圳市福田人民醫院影像科，廣東 深圳 518033；3.廣東醫學院附屬醫院口腔科，廣東 湛江 524001)

目的研究MMP-9在舌癌(TSCC)組織中的表達及其與臨床病理因素的關系。方法收集2000年1月至2010年1月廣東醫學院附屬醫院口腔科舌癌患者手術切除包埋石蠟標本60例，其中有15例取癌旁正常組織及21例有轉移淋巴結，應用免疫組化PV9000法分別檢測舌癌組織、癌旁組織及轉移淋巴結中MMP-9的表達。結果MMP-9在TSCC組織中的陽性表達率為78.33%(47/60)，明顯高于癌旁組織的20.00%(3/12)，差異有統計學意義(P＞0.05)；在舌癌的低分化組中MMP-9陽性表達率為88.00%(22/25)，明顯高于高分化組的71.42%(25/35)，差異有統計學意義(P＞0.05)；TSCC在有頸淋巴結轉移組中MMP-9陽性表達率為90.48%(19/21)，明顯高于無頸淋巴結轉移組織中的71.79%(28/39)，差異有統計學意義(P＞0.05)；在TSCC原發灶與淋巴結轉移灶中的MMP-9陽性表達率分別為78.33%(47/60)、76.19%(16/21)，差異無統計學意義(P＞0.05)。結論MMP-9在TSCC組織中和有頸淋巴結轉移組織中高表達，MMP-9可作為評估舌癌浸潤和轉移的重要指標。

舌癌；MMP-9；免疫組織化學

近些年研究表明，在肺、乳腺、肝、結腸、前列腺等多種惡性腫瘤中均檢測出MMP-9陽性表達，并與這些腫瘤的侵襲浸潤和轉移有著密切聯系[1-2]。TSCC是口腔頜面部常見的惡性腫瘤，其惡性程度較高，呈浸潤生長而且也易發生頸部淋巴結轉移，在TSCC中MMP-9是否也呈陽性高表達，是否與其早期頸部淋巴結轉移有關，目前國內研究報道不多。本研究采用免疫組化PV9000法檢測口腔TSCC組織中MMP-9的表達情況，以探討MMP-9在TSCC中的表達及其與頸淋巴結轉移的關系。

1 資料與方法

1.1 納入標準 收集廣東醫學院附屬醫院口腔科2000年1月至2010年1月手術患者TSCC石蠟包埋切片，其中60例TSCC組織、21例有轉移淋巴結、15例帶有癌旁正常組織(所有標本經患者知情同意)，所有病例采取手術治療，術前均未做過放療或化療且全部患者病例均經病理確診為TSCC。60例TSCC中男性32例，女性28例；平均年齡52歲；有頸淋巴結轉移者21例，無頸淋巴結轉移者39例；病理學分級：35例高分化，17例中分化，8例低分化。

1.2 所用試劑與染色方法 所用試劑：PV9000兩步法免疫組化試劑盒、MMP-9單克隆抗體及DAB顯色試劑盒(國產)，對照組則以PBS代替一抗作陰性對照；陽性對照用TSCC組織陽性切片。由同一醫生嚴格按說明進行操作。

1.3 結果判定 隨機選取5個高倍視野(×100)，計數500個癌細胞中陽性細胞數，并計算其占癌細胞的百分數(MMP-9染色陽性顯示在細胞漿或部分細胞質有棕黃色或棕褐色顆粒沉著)。陽性細胞數在51%以上者為強性(+++)，陽性細胞數在26%～50%者為陽性(++)，陽性細胞數在10%～25%者為弱陽性(+)，陽性細胞數＜10%者為陰性(-)。

1.4 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，計數資料采用χ2檢驗，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 MMP-9在TSCC組織及癌旁組織中的表達 MMP-9在TSCC組織中的陽性表達率為78.33% (47/60)，明顯高于癌旁正常組織的20.00%(3/15)，有統計學意義(χ2=18.38，P＜0.05)，見表1。在癌旁正常組織中MMP-9分布于胞漿內(圖1)；在舌癌組織中MMP-9明顯表達呈灶狀或團片狀(圖2)。

表1 TSCC及癌旁組織中MMP-9的表達（例）

圖1 MMP-9在正常黏膜中陰性表達(PV9000法×100)；圖2 MMP-9陽性表達主要位于腫瘤細胞漿（PV9000法×100）

2.2 MMP-9表達與臨床組織病理學分級關系 MMP-9在舌癌中/低分化組中陽性表達率為88.00%(22/25)，明顯高于高分化組的71.42%(25/35) (P＜0.05)，TSCC在有頸淋巴結轉移組中MMP-9陽性表達率為90.48%(19/21)，明顯高于無頸淋巴結轉移組織中71.79%(28/39)，見表2。

2.3 TSCC原發灶與淋巴結轉移灶中MMP-9表達 MMP-9在TSCC原發灶的陽性表達率為78.33% (47/60)，MMP-9在淋巴結轉移灶中陽性表達率為76.19%(16/21)，差異無統計學意義(χ2=0.02，P＞0.05)，見表3。

表2 TSCC中MMP-9的表達與其臨床病理因素的關系（例）

表3 TSCC原發灶與淋巴結轉移灶中MMP-9表達（例）

3 討 論

3.1 TSCC組織中MMP-9的表達 MMP-9屬于基質金屬蛋白酶家族，主要功能是降解和重塑細胞外基質的動態平衡，其主要降解產物為構成基膜重要骨架成分的Ⅳ型膠原，是基質金屬蛋白酶主要成員之一。腫瘤細胞從原發腫瘤病灶脫離后向周圍、遠處組織浸潤侵襲和轉移的過程中，關系到腫瘤細胞穿過ECM屏障、血管壁的基底膜及穿出血管壁進入人體另一組織的過程。MMP-9通過對細胞外基質、基底膜的降解和重塑而促進腫瘤癌細胞的侵襲浸潤，是降解ECM等成分的關鍵性酶[3-4]。MMPs能降解ECM中的大部分成分，在腫瘤的浸潤侵襲和淋巴結轉移中有重要作用。腫瘤癌細胞中MMP-9產生的差異表明了癌細胞侵襲浸潤、轉移能力的大小。Jordan等[5]在研究對比口腔上皮異常增生和口腔鱗狀細胞癌中MMP-9mRNA水平時發現，口腔癌中MMP-9mRNA水平明顯高于上皮異常增生，而且在上皮異常增生惡變為口腔癌病例中MMP-9mRNA水平明顯高于沒有惡變的病例。本研究顯示：高分化組中MMP-9陽性表達率顯著低于中/低分化組，表明在TSCC組織中MMP-9的陽性表達率與其病理組織學分級相關。因此，MMP-9可作為檢測TSCC的標志物。

3.2 MMP-9在TSCC中的表達與頸淋巴結轉移關系 本研究在有頸淋巴結轉移組中MMP-9陽性表達率要顯著高于無頸淋巴結轉移組，有統計學意義(P＜0.05)，結果與大多數報道一致[5]。黃喆等[6]研究表明MMP表達與病理分級和OSCC頸淋巴結轉移均相關；在不同浸潤方式的舌鱗狀細胞癌中MMP-9的表達不同，在Ⅲ、Ⅳ型的舌鱗狀細胞癌中，MMP-9的表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ型，而且臨床易出現淋巴結轉移。本研究顯示MMP-9在腫瘤細胞及其間質組織均有高表達，其陽性表達多呈彌散狀、片狀或灶狀，腫瘤細胞大多位于腫瘤癌巢的邊緣，表明在腫瘤病灶的周圍腫瘤細胞更具有侵襲性。腫瘤癌細胞的侵襲和轉移的病理過程是非常復雜的，但BM和ECM的降解和重塑是其必然過程[7]。MMP-9能降解BM和ECM，這些基質降解酶的產生能促進腫瘤癌細胞的侵襲浸潤和轉移。陳坤等[8]研究也表明MMP-9的過度表達與腫瘤組織的轉移和浸潤呈正相。Elahi等[9]對48例口腔鱗癌患者應用免疫組織化檢測MMP-9表達，結果顯示MMP-9表達與口腔鱗癌侵襲與轉移呈正相關。MMP-9不僅能夠降解ECM和基底膜導致癌細胞侵襲與轉移，而且還可通過細胞因子、細胞表面蛋白、細胞粘附蛋白及生長因子與周圍細胞表面等發生相互反應，促進癌細胞的侵襲與轉移。因此，MMP-9可作為評估舌癌浸潤和轉移的重要指標。

[1]Wong YF,Cheung TH,Tsao GS.Genome-wide gene expression profiling of cervical cancer in Hong Kong women by oligonucleotide microarray[J].Int J Cancer,2006,118(10):2461-2469.

[2]Cha HJ,Bae SK,Lee,HY,et al.Anti-invasive aetivity of ursolic acid correlates with the reduced expressor of matrix metal proteinaseg (MMP-9)in HT-1080 human fibrosarcoma cells[J].Cancer Res, 1996,56(10):2281-2284.

[3] Bhuvarahamurthy V,Kristiansen GO,Johannsen M,et al.In situ gene expression and localization of metalloproteinases MMP1, MMP2,MMP3,MMP9,and their inhibitors TIMP1 and TIMP2 in human renal cell carcinoma[J].Oncol Rep,2006,15(5):1379-1384.

[4]Wickramasinghe NS,Nagaraj NS,Vigneswaran N,et al.Catheps in B promotes both motility and invasiveness of oral carcinoma cells [J].Arch Biochem Biophys,2005,436(1):187-195.

[5]Jordon RC,Macabeo-ong M,Shiboski CH,et al.Overexpression of mateix metalloproteinase-1 and-9 mRNA is associated with progression of oral dysplasia to cancer[J].Clin Cancer Res,2004,10(19): 6460-6465.

[6]黃喆,高志彪,馮正虎,等.MMP-9在不同浸潤方式舌鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義[J].口腔醫學研究,2012,28(5):488-490.

[7]劉健,浦劍虹,葛自力.CD44V6和MMP-9在口腔鱗癌組織中的表達及其相關性研究[J].臨床口腔醫學雜志,2005,21(6):333-335.

[8]陳坤,習利軍,姜倩,等.CD44V6、MMP-9在舌癌中的表達及其意義[J].口腔醫學研究,2010,26(5):740-743.

[9]Elahi M,Rakhshan V,Ghasemian NT，et al.Prognostic value of transforming growth factor beta 1(TGF-beta1)and matrix metalloproteinase 9(MMP-9)in oral squamous cell carcinoma[J].Biomarkers,2012,17(1):21-27.

Expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma and its significance

XI Li-jun1,WU Ju-fang2,WANG Li-hong1,LIU Jian-lin1,CHEN Kun3,ZHANG Tie-zhu3.1.Department of Stomatology,Futian District Hospital of TCM of Shenzhen,Shenzhen 518034,Guangdong,CHINA;2.Department of Radiology,Futian People's Hospital of Shenzhen, Shenzhen 518033,Guangdong,CHINA;3.Department of Stomatology,the Affiliated Hospital of Guangdong Medical University,Zhanjiang 524001,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the expression of matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in tongue squamous cell carcinoma(TSCC)tissues and its relationship with clinical pathological factors.MethodsA total of 60 cases of surgical resection of paraffin embedded specimens,which came from tongue cancer patients who admitted to Department of Stomatology of the Affiliated Hospital of Guangdong Medical University from January 2000 to January 2010, were collected as the research objects.At the same time,15 cases of tumor-adjacent normal tissues and 21 cases of metastatic lymph nodes were also included in this research.The expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma,tumor-adjacent tissues and metastatic lymph node was detected by immunohistochemistry(PV9000).ResultsThe positive expression of MMP-9 in TSCC tissues was 78.33%(47/60),which was significantly higher than 20.00%(3/12)in tumor-adjacent tissues(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma/low differentiation group was 88.00%(22/25),which was significantly higher 71.42%(25/35)in high differentiation TSCC group(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in cervical lymph node metastasis was 90.48%(19/21),which was significantly higher than 71.79%(28/39)in without lymph node metastasis tissues(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in focal TSCC in primary tumor and lymph node metastasis rate were 78.33%(47/60),76.19%(16/21),respectively,and there was no significant difference(P＞0.05).ConclusionMMP-9 has the high expression in TSCC and cervical lymph node metastasis tissues,which can serve as an important indicator to evaluate the invasion and metastasis of tongue cancer.

Tongue squamous cell carcinomas(TCSS);Matrix metalloproteinase-9(MMP-9);Immunohistochemistry

R739.86

A

1003—6350（2017）05—0747—03

2016-06-26)

習利軍。E-mail：xilijun_001@163.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.020