楓糖的遺傳毒性及亞慢性毒性試驗研究

宋昕恬，孟令儀，張晶瑩，周博宇，張琨

（1.吉林省疾病預(yù)防控制中心毒理所，吉林長春130062；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林長春130000）

楓糖的遺傳毒性及亞慢性毒性試驗研究

宋昕恬1，孟令儀1，張晶瑩1，周博宇1，張琨2，*

（1.吉林省疾病預(yù)防控制中心毒理所，吉林長春130062；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林長春130000）

評價楓糖的食用安全性。急性毒性試驗，采用限量法，將小鼠禁食（不禁水）16 h后，經(jīng)口灌胃給予受試物，劑量為15.0 g/kgBW，灌胃后觀察14 d；細菌回復(fù)突變試驗，設(shè)5 000、1 000、200、40、8μg/皿5個劑量組，及未處理、溶劑、陽性對照組，采用平板摻入法，對有組氨酸營養(yǎng)缺陷的5株鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535進行回變菌落計數(shù)；哺乳動物紅細胞微核試驗，設(shè)10.0、5.0、2.5 g/kgBW三個劑量組，環(huán)磷酰胺及陰性對照組，采用間隔24h兩次經(jīng)口灌胃法進行試驗，計數(shù)骨髓嗜多染紅細胞在總紅細胞的比例及含微核嗜多染紅細胞比率；90天喂養(yǎng)試驗，設(shè)8.0、6.0、4.0g/kg BW三個劑量組，摻入飼料喂養(yǎng)90 d，空白對照組給與正常飼料，觀察體重、食物利用率、血常規(guī)、血生化指標(biāo)及病理檢測。楓糖細菌回復(fù)突變試驗、骨髓細胞微核結(jié)果均為陰性，90天喂養(yǎng)試驗各項指標(biāo)與對照組比較無顯著性差異。楓糖在一定劑量范圍內(nèi)通過系統(tǒng)的體內(nèi)和體外試驗驗證其具有食用安全性。

楓糖；大鼠；遺傳毒性；亞慢性毒性

在楓樹的樹液中可提煉出一種糖分，被當(dāng)?shù)厝朔Q之為楓糖，用它替代蔗糖加工食品，既增加了礦物質(zhì)又降低了熱量，并且它富含的酚苷成分有抗腫瘤作用，現(xiàn)已成為食品加工原料的新寵[1-2]。有研究表明深色楓糖含有的有益成份更適合應(yīng)用于開發(fā)功能食品及食品添加劑[3]。但是對于楓糖的遺傳毒性及亞慢性毒性未見相關(guān)報道，并且，根據(jù)《衛(wèi)生部關(guān)于進一步規(guī)范保健食品原料管理的通知衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號》文件，它并不在既是食品又是藥品的物品名單及可用于保健食品的物品名單中。衛(wèi)生部批準(zhǔn)的新資源食品目錄中，楓糖也未獲得批準(zhǔn)。本實驗室根據(jù)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品安全性毒理學(xué)評價程序2014及2003版[4-8]，對其進行了細菌回復(fù)突變試驗、哺乳動物紅細胞微核試驗及90天喂養(yǎng)試驗。

1材料和方法

1.1試劑與儀器

楓糖（粉末狀）：由創(chuàng)喜（北京）醫(yī)藥科技有限公司提供；GR60DA型立式壓力蒸汽滅菌儀：致微（廈門）儀器有限公司產(chǎn)；DH-500A型電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海基瑋試驗儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)；SYSMEX-XT2000i型全自動血液分析儀：日本；血常規(guī)檢測試劑盒：由上海科華東菱診斷用品有限公司提供；TBA-120FR型全自動生化分析儀：日本東芝；血生化檢測試劑：由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供；環(huán)磷酰胺：由FLUKA公司提供；酪蛋白（純度為98.0%）：由南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)。

1.2實驗動物

SPF級ICR小鼠，雌、雄各25只，體重25.0g～30.0g，SPF級Wistar大鼠，雌雄各40只，體重65.0 g～85.0 g，由長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，批準(zhǔn)證號為SCXK-（吉）2011-0004。本實驗動物環(huán)境設(shè)施合格證，吉動設(shè)字10-1005；實驗動物使用許可證號，SYXK-（吉）2010-0011；溫度20℃～22℃、濕度55%～65%。

1.3方法

1.3.1急性毒性試驗

采用限量法，將小鼠禁食（不禁水）16 h后，按體重要求選取雌、雄各10只，經(jīng)口灌胃給予受試物，劑量為15.0 g/kg BW（取37.5 g樣品溶于蒸餾水至50.0mL混勻達可灌胃最大濃度75%，灌胃1次，灌胃量0.2mL/ 10 g BW）。觀察14 d。主要觀察小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)及軀體運動有無改變姿勢、叫聲異常、運動失調(diào)等；自主神經(jīng)有無瞳孔放大或縮小、流涎、流淚等；呼吸系統(tǒng)有無流鼻涕、潮式呼吸等；胃腸系統(tǒng)有無氣脹、腹瀉或便秘等。并記錄出現(xiàn)中毒癥狀的時間。如果動物有死亡，記錄死亡數(shù)、死亡時間，對全部動物做大體解剖，并在第14天稱量體重，計算增重。

1.3.2細菌回復(fù)突變試驗

選取TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535五種組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株。在本實驗室經(jīng)過鑒定后，生物學(xué)性狀均符合要求。測試菌液濃度大于等于1×109活菌數(shù)/mL。試驗劑量分為5 000、 1 000、200、40、8μg/皿5組，取5.0 g楓糖加蒸餾水至100mL，均勻混合后濃度為5 000μg/皿，其余4組劑量均按照1/5倍比遞減稀釋；受試液經(jīng)過20min，121℃，0.103MPa高壓滅菌后使用；另設(shè)陽性對照組、溶劑對照組及未處理對照組。在頂層瓊脂中加入試驗菌株增菌液、楓糖溶液各0.1mL，代謝活化時加入代謝活化系統(tǒng)S9混合液0.5mL并混合均勻后倒入底層培養(yǎng)基平板。37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后計數(shù)每皿回變菌落數(shù)。如果受試物回變菌落數(shù)是自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍以上，并具有劑量--反應(yīng)關(guān)系可定為陽性。每個劑量組做3個平行板，并在相同實驗條件下重復(fù)做2次，最后分別統(tǒng)計結(jié)果。

1.3.3哺乳動物紅細胞微核試驗

設(shè)10.0、5.0、2.5 g/kg BW三個劑量組（分別取25.00、12.50、6.25 g受試物溶于蒸餾水至50mL混勻），另設(shè)陰性對照組（蒸餾水）、陽性對照組（環(huán)磷酰胺40mg/kg BW：取100mg環(huán)磷酰胺加入生理鹽水至50 mL混勻），選取兩次經(jīng)口灌胃間隔24 h進行的試驗方法，灌胃量為0.2mL/10 g BW。在末次灌胃6 h后，頸椎脫臼處死小鼠，取股骨擠出骨髓液與小牛血清混合常規(guī)涂片，用甲醇固定后，放入Giemsa染液中染色。用光學(xué)顯微鏡觀察每只小鼠骨髓紅細胞200個，計數(shù)嗜多染紅細胞所占的比例；觀察嗜多染紅細胞（PCE）2 000個，計數(shù)微核嗜多染紅細胞頻率，即含微核細胞率，以千分率表示。

1.3.4 90天喂養(yǎng)試驗

購買動物后在本實驗室飼養(yǎng)觀察3 d，隨機分為3個不同劑量試驗組及對照組，每組20只雌雄各半。楓糖成人每日推薦攝入量為2.15 g/60 kg BW，高、中、低劑量組攝入量為8.00、6.00、4.00 g/kg BW，分別相當(dāng)于成人攝入量的223、167、112倍。將3個試驗組的楓糖按計量均勻摻入基礎(chǔ)飼料中，含量依次為10.0%、7.5%、5.0%（受試樣品分3次配制，每次20 kg）。對照組給與基礎(chǔ)飼料。大鼠飼料攝入量按體重8%計算，單籠飼養(yǎng)，自由飲食，記錄大鼠體重、進食量，連續(xù)觀察90 d。高、中、低劑量組受試物中補充一定量的酪蛋白，分別為478、358、239 g，使得高、中、低劑量組蛋白含量和對照組一致，同為18.9%。觀察記錄大鼠一般行為表現(xiàn)、中毒癥狀及死亡情況，每周稱取體重1次、攝入量2次并計算每周食物利用率及總食物利用率。試驗中期尾靜脈采血，檢測血液學(xué)及血生化指標(biāo)，包括RBC、Hb、WBC及其五分類，ALT、AST、UREA、Cr、Glu、TP、Alb、TC、TG。試驗第90天禁食16 h，于試驗91天稱重，按照5.0mL/kg BW腹腔注射1%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液麻醉后，下腔靜脈采血，檢測血液學(xué)及血生化指標(biāo)。對大鼠進行大體解剖，稱取臟器絕對重量計算相對重量即臟體比，并對肝、脾、腎、胃、十二指腸、睪丸或卵巢進行組織病理學(xué)檢查。

1.4統(tǒng)計方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計，方差齊時，采用LSD法；方差不齊時，采用Tamhane’s法對各組間進行兩兩比較。

2結(jié)果

2.1急性毒性試驗

試驗期間，每只小鼠均未見中毒癥狀，死亡數(shù)為零，雌、雄性小鼠：限量法LD50＞15.0 g/kg BW，根據(jù)急性毒性半數(shù)致死劑量分級屬無毒級。

2.2細菌回復(fù)突變試驗

將楓糖在鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535進行平板摻入試驗，結(jié)果見表2和表3。

表1 第一次細菌回復(fù)突變試驗結(jié)果（±s）Table1 Resultsof the firstbacterial reversemutation test（±s）

表1 第一次細菌回復(fù)突變試驗結(jié)果（±s）Table1 Resultsof the firstbacterial reversemutation test（±s）

TA97 TA98 TA100 TA102 TA1535不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S95 000 124.3±7.2 117.3±10.0 32.3±5.0 31.3±4.0 156.0±4.4 165.0±5.2 282.3±7.5 277.0±7.9 20.3±6.1 22.0±4.4 1 000 114.3±11.0 123.3±9.0 37.0±4.4 32.3±5.8 154.3±9.3 164.3±9.1 268.3±7.0 278.3±11.9 14.3±3.8 21.0±4.4 200 116.0±6.6 117.3±11.0 36.0±2.0 36.3±4.0 159.0±9.5 157.0±13.9 286.3±5.1 282.7±8.1 17.3±4.0 19.3±4.0 40 121.7±8.5 121.6±6.5 36.7±3.1 35.7±4.0 170.7±4.5 166.0±11.1 269.7±5.5 269.0±6.6 20.0±4.6 21.7±5.1 8 120.0±8.0 126.3±6.5 33.7±2.1 34.3±5.1 160.3±13.3 162.3±7.1 276.3±13.5 277.3±11.2 18.3±3.2 21.3±6.7未處理對照124.7±4.0 120.7±9.3 34.0±3.6 35.0±6.1 163.7±10.3 170.0±4.6 289.7±5.1 282.0±8.2 22.7±2.3 18.7±2.9溶劑對照115.0±7.0 125.7±9.3 37.7±2.5 31.0±6.1 156.7±11.0 166.7±13.7 278.0±9.5 274.3±13.6 23.7±8.1 19.7±8.0陽性對照1 274.7±99.3 1 349.0±80.3 1 900.3±107.9 2 031.7±92.4 1 200.3±66.3 1 363.7±50.3 1 180.7±37.6 1 005.0±48.8 450.7±72.5 228.7±63.7劑量/（μg/皿）

表2 第二次細菌回復(fù)突變試驗結(jié)果（±s）Table2 Resultsof second bacterial recovery test（±s）

表2 第二次細菌回復(fù)突變試驗結(jié)果（±s）Table2 Resultsof second bacterial recovery test（±s）

TA97 TA98 TA100 TA102 TA1535不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S9不加S9加S95000 122.7±4.6 120.7±11.4 35.7±4.2 36.7±3.2 157.7±7.0 162.7±6.0 285.0±7.2 268.7±8.1 15.0±5.6 23.7±7.4 1000 116.0±9.5 118.7±12.1 34.3±5.1 36.0±6.1 162.3±11.0 169.3±7.0 269.3±10.0 277.3±11.9 16.0±7.2 20.3±4.5 200 113.3±9.1 121.7±9.3 30.7±2.5 38.3±2.5 163.3±6.0 157.3±8.4 276.7±10.6 285.7±6.8 21.0±7.9 24.3±6.4 40 120.7±9.5 119.7±11.4 34.0±3.6 36.3±5.0 161.0±12.1 158.3±8.4 278.0±9.2 280.0±14.4 18.0±3.6 19.7±4.7 8 118.0±12.1 124.7±4.0 36.7±4.0 30.7±2.5 164.3±8.5 162.0±10.8 269.0±11.5 272.0±8.9 22.7±5.1 25.0±5.6未處理對照120.0±6.2 126.3±5.9 35.7±5.1 32.0±3.0 156.0±7.0 165.3±4.2 270.3±9.3 271.0±10.4 19.3±3.1 16.7±2.9溶劑對照116.0±11.8 121.0±8.7 34.7±2.9 35.3±3.2 158.7±8.6 162.0±6.0 275.0±6.0 283.7±5.0 24.7±3.8 19.0±4.4陽性對照1 360.3±102.3 1 406.0±144.0 1 882.3±65.1 2 085.7±33.5 1 178.3±128.4 1 277.3±97.9 1 237.7±73.1 1 041.0±61.5 475.7±35.2 256.3±54.5劑量/（μg/皿）

在加和不加S9混合液的情況下，8μg/皿～5 000μg/皿5個劑量組均未引起試驗菌株的回復(fù)突變菌落數(shù)顯著增加，判斷細菌回復(fù)突變試驗結(jié)果為陰性。

2.3哺乳動物紅細胞微核試驗

10.0、5.0、2.5 g/kg BW三個劑量組微核細胞率與陰性對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）；陽性對照組與陰性對照組比較差異有顯著性（P＜0.01），各劑量組PCE/NCE比值均不少于對照組的20%。提示楓糖骨髓細胞微核試驗結(jié)果陰性，各組動物未見細胞毒性作用。

2.4 90天喂養(yǎng)試驗

2.4.1一般情況觀察及對體重、飲食的影響

試驗期間大鼠生長狀態(tài)良好，飲食及日常行為表現(xiàn)未見異常，未見中毒及死亡。各組間體重、飼料攝入量、食物利用率及大鼠臟體比未見顯著性差異（P＞0.05）。

2.4.2對血液學(xué)及各項生化指標(biāo)的影響

90天喂養(yǎng)試驗中期及末期分別對大鼠的血紅蛋白、紅細胞、白細胞及白細胞的五分類進行檢測；同時還對大鼠的九項生化指標(biāo)（ALT、AST、BUN、Cr、GLU、TP、ALB、TC、TG）進行檢測。各項指標(biāo)均在本實驗室歷史正常值范圍內(nèi)，與對照組比較，未見顯著性差異（P＞0.05）。部分檢測結(jié)果見表3。

2.4.3病理學(xué)檢查結(jié)果

90天喂養(yǎng)試驗病理學(xué)檢查結(jié)果見圖1～圖12。

表3 90天喂養(yǎng)試驗中期及末期雄性血液學(xué)檢查結(jié)果（±s）Table3 Resultsof 90-day feeding test in them id and late-stagemalehem atology test（±s）

表3 90天喂養(yǎng)試驗中期及末期雄性血液學(xué)檢查結(jié)果（±s）Table3 Resultsof 90-day feeding test in them id and late-stagemalehem atology test（±s）

白細胞分類/% LYMP MONO NEUT EO BASO中期雄性對照組10 147.20±5.75 8.03±0.29 5.13±0.68 79.25±2.39 2.63±0.49 17.04±2.08 1.08±0.30 0.00±0.00高劑量組10 143.20±5.39 7.76±0.29 5.88±0.78 79.23±3.06 2.77±0.50 16.84±1.25 1.15±0.28 0.01±0.03中劑量組10 143.90±7.49 7.87±0.39 5.94±1.00 79.56±3.00 2.91±0.98 16.48±1.33 1.01±0.33 0.04±0.07低劑量組10 145.80±6.27 7.98±0.30 5.30±0.98 78.82±3.44 2.62±0.33 17.55±1.54 1.00±0.33 0.01±0.03末期雄性對照組10 145.10±6.54 8.36±0.55 5.05±0.70 78.28±2.24 3.10±0.85 17.47±1.70 1.15±0.31 0.00±0.00高劑量組10 142.00±5.70 8.18±0.59 5.30±0.73 77.28±2.81 3.89±1.10 17.37±1.40 1.32±0.36 0.04±0.08中劑量組10 143.90±5.65 8.30±0.43 5.16±0.79 78.36±2.31 3.89±1.18 16.38±2.01 1.37±0.28 0.00±0.00低劑量組10 144.80±6.14 8.22±0.61 5.22±0.93 78.49±3.17 3.16±0.85 17.21±1.98 1.14±0.21 0.00±0.00性別劑量組動物數(shù)/只血紅蛋白/（g/L）紅細胞/（×1012/L）白細胞/（×109/L）

表4 90天喂養(yǎng)試驗中期及末期雄性生化檢驗結(jié)果（±s）Table4 Resu ltsof 90-day feeding test in them id and late-stagemalebiochem ical test（±s）

表4 90天喂養(yǎng)試驗中期及末期雄性生化檢驗結(jié)果（±s）Table4 Resu ltsof 90-day feeding test in them id and late-stagemalebiochem ical test（±s）

TG/（mmol/L）中期雄性對照組10 29.4±3.9 90.7±8.2 5.13±0.77 56.9±4.4 5.37±1.02 56.2±3.6 32.5±1.9 1.83±0.17 0.52±0.09高劑量組10 30.5±5.5 91.2±9.0 5.13±0.77 56.4±5.1 5.94±0.92 57.5±4.2 32.7±2.2 1.85±0.17 0.56±0.07中劑量組10 28.9±4.4 88.8±7.5 5.53±0.65 55.6±4.6 5.80±0.80 55.8±4.5 32.6±2.4 1.83±0.14 0.54±0.10低劑量組10 28.4±5.7 90.2±8.2 5.45±0.79 57.3±4.2 5.74±0.67 56.8±4.5 31.9±1.9 1.86±0.12 0.56±0.10末期雄性對照組10 30.3±3.6 96.3±8.4 5.76±0.87 60.5±3.5 6.26±0.78 60.6±3.7 36.0±2.0 2.17±0.13 0.62±0.11高劑量組10 31.2±3.3 102.2±11.3 5.97±0.93 61.2±3.0 6.02±1.07 61.9±3.8 37.0±2.0 2.17±0.17 0.70±0.07中劑量組10 30.4±3.9 99.6±11.3 5.64±0.84 62.8±3.3 6.06±0.97 61.8±3.3 36.6±2.3 2.22±0.16 0.64±0.11低劑量組10 29.5±4.0 102.9±8.1 5.73±0.73 59.5±3.0 6.21±0.72 60.6±3.9 36.3±2.6 2.15±0.15 0.67±0.07性別劑量組動物數(shù)/只（U/L）AST/（U/L）UREA/（mmol/L）ALT/Cr/（μmol/L）（mmol/L）TP/（g/L）Alb/（g/L）TC/（mmol/L）Glu/

圖1 肝臟（對照組）Fig.1 Liver（controlgroup）

圖2 肝臟（高劑量組）Fig.2 Liver（high dosegroup）

圖3 脾臟（對照組）Fig.3 Sp leen（controlgroup）

圖4 脾臟（高劑量組）Fig.4 Spleen（high dosegroup）

圖5 胃（對照組）Fig.5 Stomach（controlgroup）

圖6 胃（高劑量組）Fig.6 Stomach（high dosegroup）

圖7 腎臟（對照組）Fig.7 K idney（controlgroup）

圖8 腎臟（高劑量組）Fig.8 K idney（high dosegroup）

3個劑量組（分別為人體攝入量的223、167、112倍）與對照組雌、雄性大鼠在實驗期間未見軀體運動及神經(jīng)系統(tǒng)異常，毛發(fā)光澤、未見流涎、流涕、流淚，排泄物無異常，各組間大鼠體重未見明顯差異。對各組大鼠臟器進行大體解剖觀察未見異常改變。高劑量組及對照組40只大鼠（雌、雄各半）的肝、脾、腎、胃、十二指腸、性腺（睪丸或卵巢）經(jīng)病理學(xué)檢查均未見與楓糖相關(guān)的病理改變，故未對中、低劑量組大鼠作組織病理學(xué)觀察。

圖9 卵巢（對照組）Fig.9 Ovary（controlgroup）

圖10 卵巢（高劑量組）Fig.10 Ovary（high dosegroup）

圖11 睪丸（對照組）Fig.11 Testis（controlgroup）

圖12 睪丸（高劑量組）Fig.12 Testis（high dosegroup）

3討論

本試驗根據(jù)2014年頒布的GB 15193.1-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品安全性毒理學(xué)評價程序》對楓糖進行了遺傳毒性及亞慢性毒性檢測。急性毒性試驗可以在短時間內(nèi)觀察動物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，結(jié)果為無毒級。細菌回復(fù)突變試驗檢測楓糖對微生物（細菌）的基因突變作用，預(yù)測其遺傳毒性和潛在的致癌作用；哺乳動物紅細胞微核試驗通過分析動物骨髓紅細胞，檢測楓糖是否引起成熟紅細胞染色體損傷或有絲分裂裝置損傷，預(yù)測其致突變性。這兩項遺傳毒性試驗結(jié)果均為陰性，提示楓糖對基因哺乳類動物體細胞染色體無損傷作用[9]。90天喂養(yǎng)試驗通過長期喂飼不同劑量的楓糖，檢測其對動物引起的有害效應(yīng)的劑量、毒作用性質(zhì)和靶器官，估計亞慢性攝入的危害性，結(jié)果顯示各劑量均未觀察到其對大鼠生長發(fā)育、血常規(guī)、血生化及病理檢測等指標(biāo)有異常影響。楓糖在本試驗劑量范圍內(nèi)未觀測到致突變性及毒性作用，為對其進行進一步的開發(fā)研究，納入保健食品及新資源食品名錄，提供理論依據(jù)。

[1]張桂英,趙海軍,信振江,等.楓糖對小鼠抗運動疲勞能力的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2008,29(6):644-646

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[5]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 15193.3-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)急性經(jīng)口毒性試驗[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015:1-3

[6]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 15193.4-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)細菌回復(fù)突變試驗[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015:1-3

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Study on Genetic Toxicity and Sub Chronic Toxicity Text of M ap le Sugar

SONGXin-tian1，MENG Ling-yi1，ZHANG Jing-ying1，ZHOUBO-yu1，ZHANGKun2，*
（1.Disease ControlPrevention of Jilin Province，Changchun 130062，Jilin，China；2.The Second Hospitalof Jilin University，Changchun 130000，Jilin，China）

The purposeof the presentstudywas to investigate the toxicity ofmaple sugaron rats.Acute Toxicity test：Used limitedmethod，ICRmice after a fastof16 h，can nothelp butwater，observed in 14 days after given subjectsby oral in 15.0 g/kg BW dose.Ames test：Setup 5 000，1 000，200，40，8μg/dish 5 dose groups，untreated group，solventgroup，positive controlgroup.Used plate incorporationmethod，counted thenumberof reverse colonieswith 5 kinds of histidine nutrition deficiency Strain TA97，TA98，TA100，TA102 and TA1535. Mammalian ErythocyteMicronucleus test：Seted 10.0，5.0，2.5 g/kg BW three dose groups，cyclophosphamide group and negative control group.Two oral administration during 24 h.calculated proportion of bonemarrow polychromatic erythrocytes in total red blood cells.90 day feeding test：Seted 8.0，6.0 4.0 g/kg BW three dose groups.Mixed feed for90 days，blank controlgroupwasgiven normal feed.Observed bodyweight，food utilization，blood routine，blood biochemical indexes and pathological examination.The result of Ames text and Mammalian Erythocyte Micronucleus testofmaple sugarwasnegative.Therewasno significantdifference compared to blank controlgroup aboutvarious index of90 days feeding text.Maple sugar is confirmed edible safety by system tests in vivoand in vitro testata certain dose range.

maplesugar；rat；genetic toxicity；sub chronic toxicity

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.05.008

2016-06-14

宋昕恬（1979—），女（漢），副主任醫(yī)師，碩士，主要從事食品毒理學(xué)研究。

*通信作者：張琨（1968—），女（漢），主任醫(yī)師，博士，主要從事毒理學(xué)研究。