實驗小鼠血清中酯酶-1的檢測能力驗證結果評價

魏 杰，王 洪，鞏 薇，于鵬麗，岳秉飛

(中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

研究報告

實驗小鼠血清中酯酶-1的檢測能力驗證結果評價

魏 杰，王 洪，鞏 薇，于鵬麗，岳秉飛*

(中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

目的 通過實驗小鼠血清中酯酶-1項目的檢測比對，促進全國實驗動物質量檢測實驗室加強質控管理，提升檢測能力。方法 按標準程序制備能力驗證樣品，隨機編號，冷鏈運輸發放給參加單位。參與者在規定時限提交檢驗結果和原始記錄復印件。所得結果與樣品預檢結果完全一致的判為滿意結果，否則為不滿意結果。結果 共11個實驗室報名參加本次比對試驗，其中滿意結果的有10個實驗室，占參加比對實驗室的90.9%；不滿意結果1個實驗室，占參加比對實驗室的9.1%。結論 本次能力驗證項目反映出各參與實驗室在實驗小鼠腎勻漿中酯酶-1的總體檢測水平較高，但仍需注重標準規范和檢測細節。

能力驗證；質量控制；酯酶-1

血清酯酶-1及其同工酶在實驗動物的免疫防御、遺傳育種及特性篩選發揮著重要作用[1-3]。在國家標準近交系大小鼠的遺傳檢測中，均有酯酶-1項目的檢測要求[4]。該位點多態性明確，結果容易判斷，是近交系大小鼠的遺傳監測中不可或缺的指標之一。

實驗室間的能力驗證(proficiency testing)是一種國際通行的實驗室質量控制方法，在評價實驗室的工作能力，加強實驗室的質控管理及提升實驗室的檢測水平等方面具有積極的意義與影響[5]。中國食品藥品檢定研究院一直致力于推進實驗室間的能力驗證評價工作。2013年開始與中國合格評定國家認可委員會(China National Accreditation Service for Conformity Assessment, CNAS)合作，組織開展全國范圍實驗室能力驗證活動；2014年獲得能力驗證提供者資質，在CNAS的監督指導下，獨立組織實施能力驗證項目。歷經三年的積累，僅在實驗動物遺傳檢測能力驗證項目上，已完成了堿性磷酸酶-1等4個項目的比對[6-8]。為進一步提升不同實驗室的管理檢測水平，發現和解決實際工作中的問題，2016能力驗證計劃NIFDC-PT-086 “實驗小鼠血清中酯酶-1的檢測”落地實施。

1 材料和方法

1.1 比對樣品的制備

本項目提供的待測樣為小鼠血清凍干樣品。BALB/c、C57BL/6兩個品系小鼠各20只，8周齡，均來自中國食品藥品檢定研究院【SCXK(京)2014-0013】。動物取材實驗均在中國食品藥品檢定研究院動物設施內完成【SYXK(京)2011-0008】。小鼠眼球采血并分離血清，按照品系分別稱取實驗動物血清總重量，加入一定比例的蔗糖溶液作為保護劑混勻，按照50 μL/管的裝量分裝，放入-20℃冰箱中冷凍2 h，置于凍干機中凍干。所制樣品均需進行均勻性和穩定性檢驗。

1.2 均勻性檢驗

根據樣品數量，隨機抽取4%的樣品進行均勻性檢驗。共抽樣6管，每品系3管，實驗條件參見GB/T14927.1-2008。各樣品實驗時均需加入50 μL蒸餾水進行還原。如所得基因型與標準基因型保持一致，且清晰可讀，即認為符合樣品的均勻性要求。否則需重新制樣檢測直至合格，備用于穩定性實驗和樣品發放。本研究中所制樣品均滿足均勻性要求。結果參加圖1。

1.3 穩定性檢驗

1.3.1 存放穩定性檢驗

分別將時間和溫度設為觀測的橫縱坐標，設定4℃、室溫(RT)這2個溫度觀測點，1、3、7、14、30 d為觀測時間，在每個坐標交點，每個型別的樣品分別隨機抽取1管進行編號。如發現任何1管發生條帶模糊不可讀，則認為在該點已經發生了樣品的穩定性變化，即在該時間溫度條件下該型別樣品不穩定。記錄各型別不穩定結果出現的時間和溫度，當不穩定點出現后，其之后的時間溫度觀測點隨之取消。但即使一直穩定，本測定的觀測周期也僅為30 d時長。匯總穩定性結果，填寫各自時間溫度穩定性結果報告單。穩定用“○”表示，不穩定用“×”表示。經檢驗，A、B型樣品均可在4℃及室溫(RT)條件穩定存在30 d。結果可參見表1。

注：1-3為A型樣品，4、5為標準A、B型，6-8為B型樣品。圖1 酯酶-1的均勻性檢驗結果 Note. 1-3 are samples of type A. 4 and 5 stand for the standard of type A and B. 6-8 are samples of type BFig.1 Results of the esterase-1 homogeneity test

溫度/T1d3d7d14d30d4℃○○○○○RT○○○○○

注：“○”表示樣品穩定。

Note.“○”indicates that the sample is stable.

1.3.2 凍融穩定性檢驗

分別抽取兩個型別的樣品各3管，加50 μL抽取蒸餾水還原。充分溶解混勻后，放入-20℃冰箱中冷凍2 h。置于室溫融化后點樣(點樣后繼續冷凍2 h)，按照GB/T14927.1-2008對樣品進行檢測，觀測凍融1次的穩定性結果。如出現與標準型不符，即判定為凍融不穩定，終止實驗。如穩定則按照上述方法進行第2次和第3次凍融穩定性監測。經檢驗，凍融三次a、b型酯酶-1樣品均能穩定存在。所制樣品的凍融穩定性良好。

1.4 參加實驗室

全國共11家實驗室報名參加本次能力驗證計劃， 11家實驗室反饋結果。其中，省級實驗動物質檢系統實驗室7家(含國家質檢中心)，省級疾病預防控制中心實驗室2家，科研院所2家；在地域分布上，涵蓋了北京、上海、黑龍江、吉林、遼寧、新疆、四川、陜西、湖北、廣東和廣西。

1.5 樣品的編號和發放

能力驗證樣品為小鼠血清凍干樣品，每份3管，每管裝量50 mg/管，性狀為白色固體。由中國食品藥品檢定研究院加工并經過均勻性和穩定性檢驗，采取隨機編號的原則抽樣發放，全程冷鏈運輸。

1.6 檢測項目和要求

檢測項目為小鼠血清中的酯酶-1a基因型和b基因型。結果判讀可參見國標GB/T 14927.1-2008。檢測方法選擇推薦但不局限與國標方法。參與者需登錄網上報名系統進行報名、樣品確認、下載作業指導書及上報結果。原始記錄需在規定時間內寄回。

1.7 結果評價

本次能力驗證的結果是一個定性的結果。依據GB/T14927.1-2008，對各實驗室提供的原始記錄和檢測結果進行判定。如參加的實驗室提供的檢測結果與標準結果完全一致，則參加者結果為滿意結果；如實驗室提供的結果與標準結果不一致，則為不滿意結果。另，未按時限反饋結果、不能提供實驗記錄中原始圖片或其掃描件的參加者,結果為不滿意。

2 結果

11家參與項目的單位中，獲滿意結果的實驗室10家，占參加單位的90.9%；不滿意結果有1家，占參加單位的9.1%。詳見表2。

表2 能力驗證酯酶-1結果一覽表

注：*表示不滿意結果。

Note.*means an unsatisfactory result.

3 討論與建議

3.1 方法的選擇

作業指導書中詳細描述了樣品在測試前需要加入蒸餾水50μL溶解樣品。未限制測定方法，推薦使用GB/T14927.1-2008實驗動物近交系小鼠、大鼠生化標記檢測方法，參加本次能力驗證的實驗室集中采用了國標方法。

3.2 不滿意結果原因分析

判定為不滿意結果的實驗室有1家：代碼為333的實驗室將樣品CBG0090013的酯酶-1判斷為a型，而標準結果是b型。該實驗室提供的結果與標準結果不一致，判定為不滿意結果。代碼為333的實驗室提供的原始結果圖，條帶可見，但條帶區分度較差，分析可能為電泳時間不夠，或者電泳基質、緩沖液存在問題，使得電泳后的條帶區分不明顯，A、B帶型判斷有誤。

另，代碼為333的實驗室提供的圖片上只有條帶截圖，不能看到點樣原點及電泳方向標識，這對于不滿意結果分析是一個不利因素(見圖2)。

圖2 代碼333實驗室的原始記錄Fig.2 Original records of Laboratory No. 333

3.3 發現的問題

3.3.1 適用標準沒有及時更新

本次能力驗證具體實驗方法的參考依據為國家標準的GB/T14927.1-2008，遺傳質量控制參考總原則為GB14923-2010。有3家實驗室引用了質控總則沒有更新，仍為GB14923-2001，或者寫為GB/T14923-2001，或者GB14923-2011。(如圖3～圖5所示)

圖3 代碼562實驗室的原始記錄Fig.3 Original record of Laboratory No.562

圖4 代碼634實驗室的原始記錄Fig.4 Original record of Laboratory No. 634

圖5 代碼259實驗室的原始記錄Fig.5 Original record of Laboratory No.259

3.3.2 打印錯誤或者上報錯誤

本次能力驗證計劃中，有1家實驗室將檢驗依據GB/T 14927.1-2008打成了GB/T 4927.1-2008(圖6)。另有代碼為562的實驗室原始記錄及報告均為正確結果，但在網絡上報系統中填寫結果時，將CBG0090021的a型誤填為b型。

圖6 代碼634實驗室的原始記錄Fig.6 Original record of Laboratory No. 634

3.3.3 原始記錄樣品內容與實際不一致

實際樣品為小鼠血清凍干樣品，并非實驗小鼠，代碼259的實驗室在樣品定義上不夠嚴謹(見圖7)。

圖7 代碼259實驗室的原始記錄Fig.7 Original record of Laboratory No. 259

3.4 細節規范還需注意

多數實驗室在多次參加能力驗證的基礎上總結經驗，避免了往年如無中生有的錯誤，并且如代碼049的實驗室原始記錄在樣品的前后處理都做了詳細說明，代碼為620的實驗室進行了樣品的復檢，這些都值得我們借鑒。但是除了標準適用的集中問題之外，如書寫錯誤等小問題仍需多加注意。代碼259的實驗室上報結果為AA、BB等帶型，雖然結果也可以視為正確，但是在作業指導書中明確寫著結果上報為a、b型，應當進一步注意規范。

3.5 實驗室質量控制建設需不斷加強

能力驗證活動的實質是提高實驗室的質量管理水平和質量控制能力，為數據的準確、可靠提供外部的質量保證活動。組織單位需要做好組織和宣傳工作，參加單位應當做好足夠的準備，以便項目能夠順利實施，增進實驗室間的交流學習，發現問題，提升各自的檢測水平。

從結果反饋來看，多數實驗室在多次參加能力驗證的基礎上總結經驗有了很大提高，但是在細節及管理管理規范上仍有待加強。需要加強實驗體系的管理及標準的宣貫，充分利用參加能力驗證的機會檢驗所有相關環節的質量活動，發現問題及時整改，從而使質量體系得到完善。

[1] 孫虎山，王宜艷，王慧麗. 櫛孔扇貝血淋巴中酯酶活性及其性質[J]. 中國水產科學, 2006,13(1): 39-44.

[2] 盧黎. 威寧雞與貴州黃雞血清酯酶-1的多態性比較研究[J]. 貴州大學學報(自然科學版), 2012, 29(5): 46-48.

[3] 李愛華，張慧茹，侯玲.灘羊血清酯酶-1同工酶與肌肉脂肪酸含量的研究[J]. 黑龍家畜牧獸醫, 2005, 7: 22-23.

[4] GB/T 14927.1-2008. 實驗動物近交系小鼠、大鼠生化標記檢測法[S].

[5] 席靜，張思群，劉靜宇，等．論能力驗證活動對實驗室能力建設的作用和意義[J].中國衛生檢驗雜志, 2011, 21(6): 1576-1578．

[6] 王洪，魏杰，李芳芳，等．實驗動物質檢機構堿性磷酸酶-1測定能力驗證評價[J]. 中國藥事, 2014, 28(12): 1339-1341．

[7] 魏杰，王洪，鞏薇，等．實驗小鼠腎勻漿中酯酶-3的實驗室測定能力驗證結果評價[J].中國實驗動物學報, 2016, 24(2): 204-207．

[8] 王洪，魏杰，于鵬麗，等．實驗小鼠腎勻漿中蘋果酸酶-1和異檸檬酸脫氫酶-1實驗室檢測能力驗證結果評價[J].中國實驗動物學報, 2016, 24(2): 199-203．

Evaluation report of the proficiency testing of serum esterase-1 in laboratory mice

WEI Jie, WANG Hong, GONG Wei, YU Peng-li, YUE Bing-fei*

(National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China)

Objective To strengthen the quality control management and enhance the detection capacity of the experimental animal quality control laboratoriesin our country through the detection of serum esterase-1 (Es-1) in the experimental mice. Methods The samples were prepared according to the standard procedure, and then were randomly numbered and distributed to participating units by cold-chain transport. Before the deadline, the participants submitted the results and the copies of original records. When the results were completely consistent with the standard results,the results were regarded as satisfactory, otherwise were unsatisfactory. Results A total of 11 laboratories participated in this program, of which 10 laboratories were regarded as satisfactory (90.9%) and one laboratory obtained unsatisfactory result (9.1%). Conclusions The results of this proficiency testing project demonstrate that the overall detection level of Es-1 in laboratory mice is highof the participating laboratories. However, more attention still should be paid to standard specifications and some test details.

Proficiency testing; Quality control; Esterase-1

魏杰(1982-)，女，碩士，助理研究員。研究方向：免疫遺傳檢測。E-mail：jane3040320@163.com

岳秉飛(1960-)，男，博士，研究員。研究方向：動物遺傳學。E-mail：y6784@126.com

R-33

A

1671-7856(2017) 03-0063-05

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.03.012

2016-08-25