高效液相色譜在黃酮類化合物分析中的應用

＊白 娟

（山西省朔州職業技術學院 山西 036002）

高效液相色譜在黃酮類化合物分析中的應用

＊白 娟

（山西省朔州職業技術學院 山西 036002）

利用高效液相色譜，分析黃酮類化合物的分離，是我國比較重要的中藥領域知識，對于黃酮類化合物的定量分析，和定性分析，都需要高效液相色譜的支持。黃酮類化合物在植物中是廣泛存在的，其藥用價值對于平時的醫用和藥理來說，都是非常實用的，在黃酮類作為天然藥物的必要產物時，現代HPLC的分析樣品中獲得了飛速發展，高效的液相色譜判斷方法，在黃酮類的判別過程中，占據著非常重要的角色，而今的色譜條件在優化和定性分析的過程中的一系列研究問題，正是本文需要重點研究的方向。

高效液相；色譜；黃酮類；化合物；分析；應用

前言

按照黃酮類化合物的分析過程看，對于化合物分析的主要類型，都是極性大小對于所用的流動相組進行優化后的實驗檢測，實驗是為了選擇最佳的條件，從而找到對于黃酮類化合物來說比較合理的峰形，選擇黃酮類化合物的最優屬性，就可以得到普遍適用的檢測方法。也就是說，對于黃酮類化合物的高效液相色譜分析方法和原理的掌握是比較適用于常見的藥品分析工作的。

1.黃酮類化合物的色譜條件優化過程

按照分析化合物的種類和類型，就可以得到極性大小非常合理的柱子，對于流動組的優化和條件選擇，就可以判斷分析的類型是否得當。一般常用的方法有以下幾種情況：

(1)層析柱。在黃酮類化合物的分析過程中，對于C18柱的分析和使用非常普遍，對于分析性比較明顯突出的組分，如果出現低極性的特性，就可以利用反相的判斷系統，經過預處理后的定石韋、綠原酸等化合物，獲得對于基線分離效果的應用。在該類化合物的徑向壓縮分離系統的界定過程中，可以初步判斷黃酮類化合物的存在和成分劃分，該實驗方法源自radial compression separation system，RCSS。

在對于黃酮類化合物的獲取試驗中，人們發現了柱內填充粒徑研究中對于頻率的順序掌握，從目前對于黃酮類分析的應用領域來看，對于基數為5的應用是所占比率最大的，大約已經占據了約百分之四十以上，而對于基數為10的應用，則是相對次之的，大約占據了應用比例的百分之二十以上。

(2)分析黃酮類化合物的HPLC系統量表。在黃酮類化合物的反相系統過程中，研究表明其固定相的種類是比較多的，大約涉及到了C18柱，C8柱，氯基柱，氨基柱，苯基柱，C1柱，聚苯乙烯，二乙烯苯柱，RCSS系統等，另外，還有可能涉及到硅膠柱。

而在利用高效液相色譜判斷流動相的時候，人們發現這些組成部分一般可以分成三個部分來統一實驗，第一組分為甲醇、一米、宜春、二氧雜環乙烷、THF、2-丙醇、特-丁醇等，一般會使用離子對試劑，如四烷基溴化銨來進行實驗的篩選工作，第一組分中還有可能有正乙烷、異辛烷環己烷、笨、氯仿等。第二組分則包含了乙醇、異丙醇、二氯甲烷、丙醇、乙晴、二乙基醚等，當然第二組分中還需要有蒸餾水的使用。第三組分，就是乙酸、甲酸、磷酸、高氯酸、檸檬酸、磷酸鹽、乙酸等。

使用合理的高效液相色譜法對于黃酮類化合物的分析，包含了固定波長UV、可變波長UV等很多實驗和檢驗因素，對于具體方法的篩選現在也是多種多樣了。常用的實驗手法是熒光檢測、電流檢測，同時，隨著時代的進步，人們還發現并應用了停流掃描、光電二極管技術、陣列檢測、化學位移往后的實驗方法，對于衍生系統的使用和關注也是不可或缺的。

2.針對黃酮類化合物的分離技術

(1)分離實驗的方法設計基礎原理應用。使用HPLC方法來分離多種多樣的黃酮類化合物種類，上文中已經提到了典型的黃酮類化合物分離的方法和大概成分，對于典型黃酮類化合物在分離的過程中，可以采用低極性的化合物來進行分離研究。比較常用的這類化合物比如有多甲氧基黃酮類化合物，在對于高效液相系統分離實驗和研究的時候，可以采用固定相和新的化合物進行參照實驗，具體點來說，對于RP-18的固定相設定是比較實用的。人們常用的方法之一，是使用2-丙醇-THF-水的實驗建設初步的流動相和反相體系，這樣可以很好的鑒定多甲氧基黃酮類的存在，并且有助于丙醇=環醚-水體系的黃酮類濃度洗脫分離中應用，推進其成功過程。

(2)反相系統分離的極性優化檢測。很多色譜實驗人員，在使用高效的液相色譜分析方法，進行二極管陳列的紫外檢測技術應用時，會考慮到檢測峰值的純度。這種檢測技術會采用極性較大的組分進行分離，比如說對于C18或者C8柱的反相系統分離技術，就是已經相對比較成熟的分離技術之一了。不過，在進行該實驗的過程中，對于含有較多組分的復雜黃酮類化合物的分離，如果單純的采用這種簡單的分離方法，可能未必能達到理想的效果。研究者VOGT等人，經過長線的研究和試驗，發明了更加實用的低壓柱分離技術，在對于該組分進行預分離純化的過程中，將試驗所提取的黃酮類負責化合物，在反相HPLC上進行分析，就可以判斷利用甲醇-水和乙晴-水的多種洗脫體系中，如果選擇優化檢測的具體條件和手段，這種實驗需要一種可以分離所有這些黃酮的混合溶劑，但是目前并未取得突破性進展。

3.針對黃酮類化合物的定量分析

按照HPLC的定量分析，可以使用最低的檢測極限，也就是說，使用NG級和PG級的檢測值，檢驗出下限，比如說，下限數值為1.3-5ng。對于黃酮類化合物的定量分析，在實驗設計之初就是利用HPLC的方法，對于某些穩定存在的黃酮類化合物進行定量分析，這樣有利于在進行中藥類化學組分和質量控制的時候，將含量控制的更加精確。雖然這種定量分析需要的標準品品質相對比較苛刻，但是分析工作也不是不可能的，尤其是對于高效液相色譜對于黃酮類標準品的制備，可以大大促進定量分析的發展。

4.針對黃酮類化合物的定性分析

對于HPLC的定性分析系統，對于黃酮類的分析分離和定量分析都起到了總結性的作用，目前對于黃酮類化合物分離的定性應用是不多的，常規的做法是，利用HPLC的方法，使用保留值來進行定性待測標準品的混合色譜分析。應用高效液相色譜來進行化合物的穩定定性提取，可以采用與HPLC聯合使用的紫外光譜技術作為補充，紫外光譜是可以有效對照樣品和標準品的方法，對于提高鑒定的可靠性和品級都有很好的作用。

結束語

對于高效液相色譜的檢測和實驗，是建立在大量黃酮類化合物的鑒定基礎之上發展起來的，目前在新時期的檢測技術不斷在細節上進步，通過提升分離效果和定量分析的技術改進，通過計算機輔助優化設計方法，在一定程度上加快了新柱子和流動相的研究進展。對于丙醇-環醚-水體系的推動，運用了傳統的甲醇分離鏈條所不能達到的效果，促進了新時期HPLC在黃酮類化合物分析的綜合進步。

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[2]鄧永利,周光明,陳軍華,高意,廖安輝．離子液體輔助超聲萃取-高效液相色譜同時測定半邊蓮中6種黃酮類化合物[J]．食品科學,2016,(20):37-41．

[3]張維冰,王智聰,張凌怡．超高效液相色譜-二極管陣列檢測-串聯質譜法測定菊花中的10種咖啡?；鼘幩岷?2種黃酮類化合物[J]．分析化學,2013,(12):1851-1861．

[4]池玉梅,李瑤,張瑜,王琴霞,崔小兵．超高效液相色譜-四極桿串聯飛行時間質譜分析黃酮類化合物及小毛茛莖葉的成分[J]．色譜,2013,(09):838-844．

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(責任編輯 王躍梅)

Application of High Performance Liquid Chromatography in the Analysis of Flavonoids Compounds

Bai Juan
(Shuozhou Vocational Technology College of Shanxi Province, Shanxi, 036002)

Using high performance liquid chromatography to analyze the separation of fl avonoids compounds is the important knowledge of Chinese medicine, besides, the quantitative and qualitative analysis of fl avonoids compounds requires the support of HPLC. Flavonoids compounds are widely used in plants and their medicinal value is very practical for medical and pharmacological purposes. In the case of fl avonoids as the essential products of natural medicine, modern HPLC analysis samples have got rapid development. High performance liquid chromatography (HPLC) method is very important in the identi fication process of fl avonoids, and a series of research problems in the optimization and qualitative analysis process of chromatographic conditions are exactly the research orientation in this paper.

high performance liquid；chromatography； fl avonoids；compounds；analysis；application

T

A

白娟（1986～），女，山西省朔州職業技術學院；研究方向：色譜。