頭痛寧膠囊顯微鑒別及其落新婦苷HPLC法含量測定

王影超++廖敏+姜蓮++王海寧

【摘要】目的：提高頭痛寧膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用顯微鑒別方法對天麻進行定性鑒別；用高效液相色譜法對土茯苓落新婦苷為指標(biāo)進行定量檢測。色譜條件：用C18柱，以乙腈-01%冰醋酸（15∶85）為流動相，流速10mL/min，檢測波長為291nm。結(jié)果：顯微鑒別可鑒定制劑中的天麻；含量測定中落新婦苷的平均回收率為10014%，RSD為18%。結(jié)論：顯微鑒別特征性好，易于鑒別；HPLC法簡便快捷、重現(xiàn)性好，能有效的控制頭痛寧膠囊的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 頭痛寧膠囊；定性定量；天麻；落新婦苷；顯微鑒別；高效液相色譜法

【中圖分類號】R2841【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）07-0018-03

The Research of Microscopical Identification and Content Determination （HPLC method） for Toutongning Capsule

WANG YingchaoLIAO MinJIANG LianWANG Haining

Guizhou Institute for Food and Drug Control，Guiyang 550004，China

Abstract：Objective To improve the quality control standard of Toutongning Capsule. Methods Adopting microscopic identification to make a qualitative identification of Gastrodiae Rhizoma.Using HPLC to determine Astilbin of Smilacis Glabrae Rhizoma.C18 column was used with a mobile phase of acetonitrile-01%glacial acetic acid.The flow rate was 10 mL·min-1.The detection wavelength was at 291nm.Results Gastrodiae Rhizoma could be detected by microscopic identification.The average recovery of Astilbin was 10014% with RSD of 18%Conclusion Microscopic identification characteristic is good， easy to identify.The HPLC method is simple， good reproducibility， and can effectively control the quality of Toutongning Capsule.

Keywords：Toutongning Capsule；Qualitative and Quantitative；Gastrodiae Rhizoma；Astilbin；Microscopic identification；HPLC

頭痛寧膠囊的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-11211（ZD-1211）-2002，處方由土茯苓、天麻、制何首烏、當(dāng)歸、防風(fēng)、全蝎等組成，具有熄風(fēng)滌痰、逐瘀止痛的功效，臨床用于偏頭痛，緊張性頭痛屬痰瘀阻絡(luò)癥。方中天麻息風(fēng)止痙，平抑肝陽，祛風(fēng)通絡(luò)[1]，廣泛用于頭痛眩暈的治療，為方中主藥之一。方中天麻為生藥粉投料，且天麻的顯微特征明顯，采用顯微鑒別操作簡便，結(jié)果可靠。土茯苓也為方中主藥之一，現(xiàn)代研究表明[2]，土茯苓含多種化學(xué)成分，有糖類、有機酸類、苯丙素類、黃酮和黃酮苷類、甾醇類、皂苷類及揮發(fā)油等，具有解毒利濕、涼血解毒、祛風(fēng)止痛的功效。其中落新婦苷為其主要化學(xué)成分，與土茯苓臨床療效一致，本研究采用HPLC法對制劑中落新婦苷進行含量測定，能保證更有效地對頭痛寧膠囊進行質(zhì)量控制。

1儀器與材料

11儀器BX51顯微鏡（奧林巴斯）；安捷倫1260高效液相色譜儀；KQ-500DB型數(shù)控超聲波提取儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

12材料頭痛寧膠囊（陜西步長制藥有限公司）；落新婦苷對照品（批號：111798-201303，含量以924%計，中國藥品生物制品檢定院）。甲醇（色譜純，美國天地有限公司）、乙腈（色譜純，美國天地有限公司）、冰醋酸（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）、水（純化水、UPW-50N型超凈水器制備超純水），其余試劑均為分析純。

2顯微鑒別

取本品，置顯微鏡下觀察：草酸鈣針晶成束或散在，可見螺紋導(dǎo)管、網(wǎng)紋導(dǎo)管和環(huán)紋導(dǎo)管（天麻[1]）。見圖1。

3含量測定的方法與結(jié)果

31測定波長的選擇精密稱取適量落新婦苷對照品溶于60%甲醇溶液，在200～400nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描波長，落新婦苷在291nm處有最大吸收，以此為檢測波長可獲得較高的靈敏度和良好的選擇性，故選擇291nm為檢測波長[1]。

32色譜條件Agilent C18色譜柱（5μm，46mm×250mm），流動相：乙腈-01%冰醋酸（15∶85），柱溫35℃，流速10 mL/min，檢測波長291nm，進樣量10μL。

33供試品溶液的制備取本品10粒內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇溶液25mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率35kHz）30min，放冷，用60%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。同法制備缺土茯苓的陰性樣品溶液。

34對照品溶液的制備取落新婦苷對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成每1mL含50μg的溶液，作為對照品溶液。

35方法學(xué)驗證

351線性關(guān)系考察按上述色譜條件，精密吸取落新婦苷對照品（492769μg/mL）1、2、6、10、14、18、20μL[JP]依次注入液相色譜儀，測定峰面積。以對照品進樣量X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，進行線性回歸計算，得出線性回歸方程為：[JP2]Y=21585 X-14116，R=09999，表明落新婦苷在004928～09855μg的范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

352回收率試驗取已測定含量的頭痛寧膠囊（批號：140506）（平均含量16523mg/g）05g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入落新婦苷對照品溶液（003555mg/mL）25mL，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，并按上述色譜條件測定落新婦苷的含量，計算回收率，落新婦苷平均回收率10014%，RSD=18%，表明本方法準(zhǔn)確度較好.

353重復(fù)性取同一批號頭痛寧膠囊樣品（批號：140506），按供試品溶液制備方法制備6份，分別進樣，記錄色譜圖，計算結(jié)果，落新婦苷含量測定的平均值為16523mg/g，RSD為10%，表明本方法重復(fù)性較好。

354精密度精密吸取同一落新婦苷對照品溶液（492769μg/mL）10μL，連續(xù)進樣6次，落新婦苷峰面積測定的平均值為1079，RSD為095%，表明本方法精密度較好。

355專屬性取頭痛寧膠囊樣品（批號：140506）及缺土茯苓的陰性樣品按供試品溶液制備方法制備樣品溶液及陰性樣品溶液，按上述色譜條件，分別取對照品溶液、樣品溶液、陰性樣品溶液注入液相色譜儀，樣品溶液色譜在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置有相應(yīng)的色譜峰，且陰性無干擾，表明本方法專屬性較好，見圖2。

356穩(wěn)定性試驗取供試品溶液在0、4、9、12、17、24h分別進樣10μL，記錄色譜峰面積，落新婦苷平均峰面積為1475，RSD為088%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

36樣品測定按擬定的色譜條件，分別測定3批樣品.

4討論

本試實驗在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了1個顯微鑒別和1個含量測定，能較好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。

本試驗考察了不同濃度的甲醇和乙醇為提取溶劑進行超聲及回流提取對比研究，結(jié)果表明，本法選擇60%甲醇超聲提取30min效果最好。

本試驗考察了不同溶劑系統(tǒng)甲醇-01%冰醋酸溶液[2]、乙腈-水-磷酸[3]、乙腈-01%冰醋酸為流動相，結(jié)果表明，流動相為乙腈-01%冰醋酸（15∶85）時，供試品中落新婦苷與其他雜質(zhì)峰能有效分離，峰形對稱。

本試驗考察了不同品牌色譜柱對比研究，結(jié)果表明不同品牌十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱對含量測定無影響。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2]王建平，張海燕，傅旭春.土茯苓的化學(xué)成分和藥理作用研究進展[J].海峽藥學(xué)，2013，25（1）：42-44.

[3]陳幸，李彬，黎萬壽，等.HPLC法測定土茯苓中落新婦苷的含量[J].藥物分析雜志，2004，24（4）：437-439.

（收稿日期：2017-01-23編輯：程鵬飛）