HCoV-OC43逃避人樹突狀細胞免疫清除機制的初步研究①

楊 權 庹玖玲 黃旭斌 羅洪嬌 周 凱 張 甜 曹開源 徐 霖

(廣州醫(yī)科大學基礎學院病原生物學與免疫學教研室，廣州511436)

·基礎免疫學·

HCoV-OC43逃避人樹突狀細胞免疫清除機制的初步研究①

楊 權 庹玖玲②③黃旭斌④羅洪嬌②③周 凱②③張 甜②③曹開源②③徐 霖②③

(廣州醫(yī)科大學基礎學院病原生物學與免疫學教研室，廣州511436)

目的：了解人冠狀病毒OC43(Human coronavirus OC43，HCoV-OC43)逃避人樹突狀細胞(Dendritic cell,DC)免疫監(jiān)視作用的初步機制。 方法：利用HCoV-OC43陽性病人的標本感染BSC-1細胞分離OC43病毒，相差顯微鏡觀察細胞病變(Cytopathic effect,CPE)，實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-time PCR)進行鑒定；利用人細胞因子GM-CSF和IL-4聯(lián)合體外誘導DC分化，于誘導7 d后用HCoV-OC43病毒感染DC。采用透射電鏡觀察DC感染后的形態(tài)，Real-time PCR檢測DC功能相關細胞因子的表達水平；流式細胞術檢測DC比例及其功能相關共刺激分子的表達。結果：成功建立HCoV-OC43體外感染DC的體系。HCoV-OC43能感染DC并刺激其產生免疫應答，但培養(yǎng)上清中不能檢測到病毒核酸；HCoV-OC43感染會導致DC細胞表達IFN-α、IFN-β、CCL3和CCL5的量顯著下調，但其共刺激分子HLA-DR、CD1c和CD86的表達不受抑制。 結論：HCoV-OC43可感染人DC細胞并刺激其產生免疫應答，但不能產生活的子代病毒；HCoV-OC43可通過抑制宿主DC細胞IFN-α等相關炎癥因子和趨化因子的分泌，來實現(xiàn)免疫逃逸。

人冠狀病毒OC43；人樹突狀細胞；細胞因子；免疫逃逸

冠狀病毒(Coronavirus， CoV)是目前已知的基因組最大的RNA病毒， 1937年首次從雞身上分離得到，由于其病毒包膜上有形似皇冠的棘突而命名為冠狀病毒[1]。動物感染了冠狀病毒可引起一系列的疾病，包括支氣管炎、腸胃炎、腦炎、腹瀉、腹膜炎和呼吸道疾病等[2]。目前發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒(Human coronavirus，HCoV)主要有6個亞型：HCoV-229E、HCoV-OC43、SARS-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKU1和MERS-CoV，其傳播分布于世界各地[1,3-5]。HCoV感染通常不會引起嚴重的疾病，但SARS-CoV和MERS-CoV的爆發(fā)[6-9]，提示高致病性CoV可傳播到人群當中并對人類生命健康造成嚴重的威脅。目前對HCoV的致病性及機體抗病毒感染的研究較少，其機制尚未完全清楚。已有研究表明，病毒與宿主固有免疫細胞之間的相互作用是病毒致病的重要環(huán)節(jié)，對于病毒感染及免疫反應至關重要。樹突狀細胞(Dendritic cell,DC)是體內最重要的固有免疫細胞之一[10]，作為功能最強的專職性抗原提呈細胞，擔負著激發(fā)免疫應答，聯(lián)結固有免疫與適應性免疫應答的重要功能，是產生抗病毒免疫的關鍵環(huán)節(jié)，是抗病毒感染最重要的“哨兵”，能啟動天然免疫和獲得性免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗病毒免疫反應[11]。病毒可通過多種機制來干擾DC的作用，從而實現(xiàn)免疫逃逸，包括抑制DC的發(fā)生發(fā)展、成熟以及功能等[12-14]。但是目前HCoV-OC43與宿主DC之間的相互作用少見報道。為此，本研究通過利用HCoV-OC43體外感染人DC細胞，檢測感染體系中CD11c+DC的比例、細胞因子表達量以及共刺激分子的表達情況，初步了解HCoV-OC43免疫逃逸的機制。

1 材料與方法

1.1 材料 HCoV-OC43陽性病人咽拭子標本由十二五國家科技重大專項“傳染病監(jiān)測技術平臺”華南監(jiān)測實驗室提供；猴腎細胞系BSC-1由香港大學惠贈；健康人外周血由廣東省血液中心提供；MEM基礎培養(yǎng)基購自Hyclone公司；RPMI1640基礎培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)、青霉素、鏈霉素、DEPC水和Trizol Reagent購自Invitrogen 公司； Ficoll淋巴細胞分離液(密度1.077/ml)購自天津市灝洋生物制品科技有限公司；Hu-GM-CSF和Hu-IL-4購自PeproTech公司；LPS購自Sigma-Aldrich 公司；QIAamp? minElute? Virus Spin RNA提取試劑盒購自QIAGEN公司；Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit 購自Thermo公司；iQ Supper MIX購自BIO-RAD 公司；Premix Ex Taq? Version 2.0、pMD?18-T Vector和SYBR? Premix Ex TaqTM購自寶生物工程(大連)有限公司；抗人CD11c、CD1c、HLA-DR和CD86購自ebioscience公司；Mastercycler PCR儀和Mastercycler ep realplex 2購自Eppendorf公司；凝膠成像系統(tǒng)和電泳儀購自BIO-RAD 公司；細菌培養(yǎng)箱和CO2培養(yǎng)箱購自Thermo公司；倒置顯微鏡購自Olympus公司；10色分析型流式細胞儀購自Beckman Coulter公司。

1.2 方法

1.2.1 HCoV-OC43分離培養(yǎng) 取生長狀態(tài)好的BSC-1細胞，接種到6孔板中進行培養(yǎng)，接種密度約50%。待細胞長到70%～80%時進行病毒感染，感染MOI=0.1。用MEM基礎培養(yǎng)基補足感染標本體積至200 μl，緩慢加入細胞表面，對照組加入200 μl MEM基礎培養(yǎng)基。37℃細胞培養(yǎng)箱中孵育1 h后，加入2 ml的MEM基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)。當病變細胞達80%左右時將細胞和上清一起收集，反復凍融3次制成病毒液，凍存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 HCoV-OC43鑒定 取200 μl病毒液，用QIAamp?minElute?Virus Spin RNA提取試劑盒提取病毒RNA。取10 μl病毒RNA，用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit進行逆轉錄合成cDNA。隨后，利用Real-time PCR對HCoV-OC43進行鑒定，上游引物:5′-CGATGAGGCTATTCCG-ACTAGGT-3′；下游引物:5′-CCTTCCTGAGCCTTCAATATAGTAACC-3′；探針:FAM-TCCGCCTGGCACGGTACTCCCT-TAMAR。反應體系為：10 μl 2×iQ Supper MIΧ，0.25 μmol/L引物和探針各0.5 μl，2 μl cDNA模板和6.5 μl DEPC水。反應程序為：94℃ 5 min，94℃ 15 s，55℃ 1 min，第二步開始45個循環(huán)，第三步收集熒光。

1.2.3 病毒拷貝數(shù)計算標準曲線制備 利用HCoV-OC43鑒定的上下游引物對其高度保守的NP基因進行擴增。擴增體系為：10 μl Premix Ex Taq，10 μmol/L上下游引物各1 μl，2 μl 病毒cDNA，6 μl DEPC水。擴增程序為：95℃ 5 min，95℃ 30 s，52℃ 40 s，72℃ 1 min，72℃ 10 min，第2～4步35個循環(huán)。擴增產物鑒定純化后進行轉化，挑取陽性菌落送至上海英駿公司進行測序。對測序通過的菌液進行質粒抽提，以不同濃度的質粒為模板進行Real-time PCR檢測。根據(jù)如下公式計算相應濃度下質粒的拷貝數(shù)：(6.02×1 023)×(ng/μl×10-9)/(DNA length×660)=copies/μl，根據(jù)拷貝數(shù)及相應CT值讀數(shù)制作標準曲線。

1.2.4 人DC體外誘導分化 用人淋巴細胞分離液對健康人外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)進行分離，操作步驟嚴格按照說明書進行。成功分離后，加入1 ml RPMI1640培養(yǎng)液重懸PBMC，計數(shù)。按細胞數(shù)量計算接種孔數(shù)，每孔接種4×106細胞，4 ml培養(yǎng)基；按比例加入各種培養(yǎng)因子，使終濃度為：10%胎牛血清(FBS)、1%雙抗(鏈霉素和青霉素)、50 ng/ml Hu-GM-CSF和10 ng/ml Hu-IL-4；用RPMI1640 培養(yǎng)基將細胞懸液濃度調整至1×106cells/ml，混勻，接種；每隔3 d更換新鮮培養(yǎng)液：吸棄3 ml舊培養(yǎng)液，加入3 ml含各種培養(yǎng)因子的新的完全培養(yǎng)液。

1.2.5 Real-time檢測細胞因子的表達 DC培養(yǎng)第7天，將2×106(MOI=0.5)HCoV-OC43顆粒均勻加入DC培養(yǎng)體系中，對照組加入同體積的病毒顆粒溶劑。分別收集HCoV-OC43感染人DC后6 h和24 h的細胞，2 000 r/min離心5 min，棄上清。利用Trizol Reagent提取細胞總RNA。取0.5 μg RNA，用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit進行逆轉錄合成cDNA。利用Real-time PCR反應檢測實驗組與對照組中與DC功能相關的細胞因子的表達，引物序列如表1所示。反應體系如下：10 μl SYBR Green Mix，2 μmol/L上下游引物各2 μl，2 μl cDNA，4 μl DEPC水。反應程序如下：95℃ 3 min，95℃ 10 s，60℃ 35 s，第二步開始40個循環(huán)。

1.2.6 流式細胞術檢測DC表型 DC培養(yǎng)第5天，加入LPS(1 μg/ml)刺激DC成熟。LPS加入后48 h，將2×106(MOI=0.5)HCoV-OC43顆粒均勻加入DC培養(yǎng)體系中，對照組加入同體積的病毒顆粒溶劑。共培養(yǎng)72 h后，收集細胞，2 000 r/min離心5 min，棄上清；按說明書用量將適量抗體加入100 μl PBS中，混勻，加入細胞沉淀中，渦旋混勻，4℃ 避光孵育30 min；加入3 ml PBS緩沖液終止染色，2 000 r/min離心5 min，棄上清；向細胞沉淀中加入500 μl含2%多聚甲醛的PBS緩沖液重懸細胞，渦旋混勻后用流式細胞儀進行檢測，讀取50 000個細胞，結果在CellQuest(Becton Dickinson,Mountain View,CA)軟件上進行分析。

1.2.7 電子顯微鏡觀察DC細胞 DC培養(yǎng)第7天，將2×106(MOI=0.5)HCoV-OC43顆粒均勻加入DC培養(yǎng)體系中，對照組加入同體積的病毒顆粒溶劑。37℃細胞培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)12 h后，棄培養(yǎng)上清，加入2 ml PBS緩沖液洗滌2次。向培養(yǎng)體系中加入原細胞培養(yǎng)液，37℃細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后，吹打收集半懸浮細胞，2 000 r/min離心5 min，收集上清Real-time PCR檢測HCoV-OC43核酸，細胞沉淀經2.5%戊二醛-鋨酸固定，送至中山醫(yī)學院電鏡室進行超薄切片和透射電鏡觀察。

表1 Real-time PCR 檢測細胞因子引物序列

Tab.1 Primers for Real-time PCR detection of cytokines

GeneForwardprimer(5′-3′)Reverseprimer(5′-3′)IL?1βTCCAGGGACAGGATATGGAGTCATCTTTCAACACGCAGGAIL?6ATGAGGAGACTTGCCTGGTGGGGTCAGGGGTGGTTATTGIL?8CAAACCTTTCCACCCCAAAGCCCTCTTCAAAAACTTCTCCIL?10GCTGAGAACCAAGACCCAGAGCATTCTTCACCTGCTCCACIL?12TCACAAAAGATAAAACCAGCACAGCACAGGGCCATCATAAAAGIFN?αCTCCTGGCACAGATGAGGAGATGGTTTCAGCCTTTTGGAIFN?βTCTCCTGTTGTGCTTCTCCAGATGTCAAAGTTCCTCCTGTCCTNFCGTGGAGCTGAGAGATAACCAGCTCTTGATGGCAGAGAGGACCL?3TGCAACCAGTTCTCTGCATCTTTCTGGACCCACTCCTCACCCL?5ATCTGCCTCCCCATATTCCTACACACTTGGCGGTTCTTTCMIP?1αCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACTGTGGAATCTGCCGGGAGGTGTAGMCP?1CATTGTGGCCAAGGAGATCTGCTTCGGAGTTTGGGTTTGCTTIP?10CTGACTCTAAGTGGCATTTGATGGCCTTCGATTCTGβ?actinCCCAAGGCCAACCGCGAGAAGATGTCCCGGCCAGCCAGGTCCAG

2 結果

2.1 HCoV-OC43分離培養(yǎng)和鑒定 HCoV-OC43陽性標本接種靶細胞BSC-1后第6天，大部分細胞發(fā)生病變，出現(xiàn)CPE(圖1A)，與陰性對照組相比，接種病毒的細胞出現(xiàn)皺縮、變圓和細胞融合等現(xiàn)象，符合HCoV-OC43典型細胞病變的表現(xiàn)。通過構建陽性質粒(圖1B)，制作得到病毒拷貝數(shù)計算公式：Y=-0.986 2X+42.822(X：CT值讀數(shù)，Y：log2拷貝數(shù)/μl)。Real-time PCR檢測結果顯示，收集的病毒培養(yǎng)液CT值讀數(shù)為19.76，通過計算得出與陰性對照相比，實驗組培養(yǎng)體系中病毒拷貝數(shù)擴增了105倍，說明HCoV-OC43分離培養(yǎng)成功。

2.2 電子顯微鏡觀察HCoV-OC43感染后人DC形態(tài) 病毒感染24 h后收集細胞進行電子顯微鏡觀察，同時收集上清進行Real-time PCR檢測。結果表明(圖2)，與對照組相比，病毒感染組的DC細胞突觸變短變粗，并可觀察到胞漿內形成的病毒顆粒與囊泡，表明OC43可被DC識別、攝取、加工和提呈。但培養(yǎng)上清中未能檢測到病毒核酸的存在，表明OC43雖可感染DC，但不能釋放出成熟的子代病毒。

2.3 HCoV-OC43感染抑制DC功能相關細胞因子表達 分別收集病毒感染6 h和24 h后的DC細胞，檢測與DC功能相關的細胞因子的表達。病毒感染初期，DC表達IFN-α的量顯著上升(P<0.01，圖3)，隨著感染時間的推移,IL-1β、IL-8及趨化因子IP-10的表達顯著增強(P<0.01，圖3)。但隨著時間的延長，Ⅰ型干擾素(IFN-α及IFN-β)和趨化因子CCL3和CCL5(P<0.01，圖3)的表達顯著下降。這些結果表明HCoV-OC43能快速刺激DC發(fā)生免疫應答反應，但感染一段時間后，DC部分功能細胞因子的表達會受到顯著抑制。

圖1 HCoV-OC43分離培養(yǎng)CPE觀察和病毒拷貝數(shù)計算標準曲線Fig.1 CPE of BSC-1 cells inoculated with HCoV-OC43 and standard curve for calculation of HCoV-OC43 copiesNote：Isolation and CPE observation of HCoV-OC43 on BSC-1 cells.A and standard curve for calculation of OC43 copies B.

圖2 電子顯微鏡觀察HCoV-OC43感染的人樹突狀細胞Fig.2 Electron microscope observation of human DC infected by HCoV-OC43

圖3 Real-time PCR檢測OC43病毒感染6 h和24 h后DC功能相關細胞因子的表達Fig.3 Expression level analysis of DC function related cytokines after infected with OC43 virus for 6 h and 24 h using Real-time PCRNote：**.P<0.01 vs control group.

圖4 流式細胞術檢測DC的比例及共刺激分子的表達Fig.4 Flow cytometry analysis of DC proportion and expression level of costimulatory molecules

2.4 HCoV-OC43感染不影響DC 共刺激分子的表達 DC培養(yǎng)第5天，加入LPS刺激其成熟，48 h后加入HCoV-OC43共培養(yǎng)。病毒感染72 h后，收集細胞進行流式細胞術檢測。結果表明我們的體系誘導出來的是CD11c+CD1c-HLA-DR+DC，其CD86呈弱陽性表達(圖4A)。與對照組相比，HCoV-OC43感染能顯著促進成熟DC細胞HLA-DR平均熒光強度(P<0.05，圖4B)，同時CD86的表達也發(fā)生上調，說明HCoV-OC43能激活成熟DC產生抗病毒免疫反應，其共刺激分子的表達并不受病毒感染的影響。此外， HCoV-OC43感染成熟DC可導致CD1c呈弱陽性表達，說明病毒感染可能會改變培養(yǎng)體系中DC的分化和亞型分布。

3 討論

病毒與宿主固有免疫細胞之間的相互作用是病毒致病的重要環(huán)節(jié)，對于病毒感染及免疫反應至關重要，其中又以IFN在抗病毒感染的固有免疫中的作用最為關鍵。病毒進入機體后，可被DC模式識別受體識別，并通過一系列級聯(lián)反應引起IFN-α、IFN-β的分泌，這是機體天然免疫系統(tǒng)應對病毒感染的第一道防線[15]。迄今為止已報道了來自于93種不同病毒的超過170種由病毒編碼產生的干擾素拮抗物質，作用于干擾素環(huán)路中的誘導活化、信號傳導、效應發(fā)揮的不同環(huán)節(jié)[16]。研究病毒的免疫逃逸機制已經成為闡明病毒致病性的關鍵環(huán)節(jié)，具有十分重要的科學和實踐意義。自1967年Mclntosh等[6]用人胚氣管培養(yǎng)法從感冒病人中分離出HCoV-OC43病毒株以來，已證實人感染HCoV-OC43的癥狀主要為普通感冒，約占普通感冒的15%～30%，且基本都不屬于下呼吸道感染[7]，表明其致病力較低，但其在人群中的高感染率和反復感染性提示OC43可能已經較好地適應了人免疫力，具有一定的免疫逃逸機制。目前已有學者對HCoV-229E和HCoV-SARS的致病性及免疫逃逸機制進行了研究，但HCoV-OC43與人DC相互作用及其免疫逃逸機制目前尚不清楚。

Kuri等[17]研究發(fā)現(xiàn)HCoV-229E和HCoV-SARS等多種HCoV均具有抗干擾素反應的作用，HCoV-229E可感染肺泡巨噬細胞，并抑制其IFN-α和IFN-β的產生，但不抑制其CCL3和CCL4的分泌[18]。目前，HCoV-OC43在DC中是否能產生類似的抗干擾素的免疫逃逸效應少見相關文獻報道。本研究首先在體外分離得到HCoV-OC43，并建立體外感染體系，對HCoV-OC43的致病性及免疫逃逸機制進行了初步研究。HCoV-OC43并不能像HCoV-229E一樣殺死DC細胞[19]，培養(yǎng)上清中也檢測不到HCoV-OC43的核酸，但是我們發(fā)現(xiàn)與Law等[20]對HCoV-SARS的研究結果相似，HCoV-OC43感染后，DC細胞突觸會變短變粗，細胞內顆粒增多，并可觀察到胞漿及囊泡內攝取和加工的病毒顆粒。本研究結果表明HCoV-OC43可感染人DC細胞但不能釋放成熟子代病毒，DC胞漿內的病毒可被其加工提呈，刺激產生相應的抗病毒免疫應答。

對DC功能相關細胞因子表達分析的結果顯示，在病毒與DC接觸的初期(感染6 h)，IFN-α的表達迅速增多，到24 h時，IL-1β、IL-8及IP-10產量也相繼增多，說明HCoV-OC43入侵后，DC會迅速分泌包括IFN-α在內的相關的炎癥因子，刺激自身的成熟及遷移到外周啟動后續(xù)免疫反應。但是在病毒感染24 h時，我們發(fā)現(xiàn)Ⅰ型干擾素(IFN-α和IFN-β)的表達出現(xiàn)了顯著下調，同時趨化因子CCL3和CCL5表達也明顯下降。Ⅰ型干擾素及其他一些炎癥因子(如IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等)產生后，可激活下游信號通路，從而引發(fā)更多抗病毒反應，抑制病毒的復制與增殖[21]：干擾素可干擾病毒本身的復制，誘導NK細胞和巨噬細胞殺死或吞噬已被病毒感染的細胞，從而增強DC對T細胞的抗原提呈能力，對抗病毒感染等[22]。趨化因子CCL3可募集及激活中性粒細胞；CCL5可募集白細胞到炎癥位點，同時誘導NK細胞增殖與活化[23,24]。這些結果說明HCoV-OC43可能通過抑制Ⅰ型干擾素及趨化因子CCL3和CCL5分泌的相關信號通路，損害DC、中性粒細胞及NK細胞等相關免疫細胞的功能，實現(xiàn)免疫逃逸，干擾機體的抗病毒反應，這些免疫逃逸機制可能是HcoV-OC43感染后不能產生持久有效的免疫力的原因之一。

與Law等[20]對HCoV-SARS的研究結果相似，本研究對DC表面標志物的分析發(fā)現(xiàn)HCoV-OC43感染能顯著增加成熟DC的HLA-DR的表達(P<0.05)，CD86的表達也發(fā)生上調。此外，與對照組相比， HCoV-OC43感染成熟DC可導致CD1c呈弱陽性表達，說明HCoV-OC43共培養(yǎng)可能會影響培養(yǎng)體系中DC的分化和亞型分布。本研究結果顯示，HCoV-OC43與DC相互作用并不抑制DC的成熟及共刺激能力，盡管Ⅰ型干擾素及部分趨化因子的表達受到抑制，DC在HCoV-OC43感染和抗原刺激后仍可產生抗病毒免疫應答反應，此發(fā)現(xiàn)也可從一定程度上解釋HcoV-OC43感染人后并不能導致嚴重的呼吸道疾病的特點。

綜上所述，本課題對HCoV-OC43致病性及免疫逃逸機制的初步研究結果顯示，HCoV-OC43與DC相互作用后并不抑制DC的成熟及共刺激能力，DC在受到感染和抗原刺激后仍可產生抗病毒免疫應答；但HCoV-OC43能顯著抑制DC細胞的Ⅰ型干擾素及趨化因子CCL3和CCL5的表達，產生免疫逃逸，其作用可能與其致病特點有關。本研究結果為進一步闡明HCoV-OC43的致病性及免疫逃逸機制奠定了基礎，為HCoV與免疫系統(tǒng)相互作用的研究提供了重要的參考依據(jù)，為HCoV的疫苗制備和抗病毒藥物的研究提供了新的線索及思路。

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[收稿2016-08-21 修回2016-10-25]

(編輯 許四平)

Preliminary mechanism study of HCoV-OC43 escape from human dendritic cell immune elimination

YANGQuan,TUOJiu-Ling,HUANGXu-Bin,LUOHong-Jiao,ZHOUKai,ZHANGTian,CAOKai-Yuan,XULin.

DepartmentofPathogenBiology&Immunology,CollegeofBasicSciences,GuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou511436,China

Objective:To study the possible immune escape mechanisms of HCoV-OC43 from human dendritic cells(DC).Methods：HCoV-OC43 was isolated from clinical specimen using BSC-1 cells and identified by Real-time PCR,and the cytopathic effect was observed by phase contrast microscope.DCs were induced in vivo using hu-GM-CSF and IL-4 cytokines,and after 7 days of differentiation,DCs were infected by HCoV-OC43.The morphology of HCoV-OC43 infected DC was observed by transmission electron microscope,and the cytokines related to DC functions were detected by Real-time PCR after infection.DC proportion and function related co-stimulatory molecules were analyzed by flow cytometry.Results：In vitro HCoV-OC43 infected human DC model was successfully built.HCoV-OC43 can infect DC and generate immune response of DC in vitro,but no virus nucleonic acid could be detected in culture supernatant.The DC expression of IFN-α,IFN-β,CCL3 and CCL5 were significant decreased when infected with HCoV-OC43,but the expression of costimulatory molecules including HLA-DR,CD1c and CD86 were not affected by HCoV-OC43 infection.Conclusion：Human DC could be infected by HCoV-OC43 and generate immune response,but could not produce progeny virus.HCoV-OC43 may escape from immune response by suppressing the expression of IFN-α and other inflammatory cytokines and chemokines in DC.

Human coronavirus OC43;Human dendritic cells;Cytokine;Immune escape

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.04.002

①本文受國家傳染病防治科技重大專項(No.2012ZX10004-213)、國家自然科學基金項目(No.81000230)和廣東省自然科學基金青年項目(No.A030310282)資助。

楊 權(1985年-)，男，博士，講師，主要從事髓系細胞分化機制方面的研究，E-mail：yquangy2015@163.com。

及指導教師：徐 霖(1976年-)，女，博士，副教授，主要從事病毒和腫瘤學相關研究，E-mail：xulin@mail.sysu.edu.cn。

R373.1 R392.12

A

1000-484X(2017)04-0488-06

②中山大學熱帶病防治研究教育部重點實驗室，廣州510080。

③中山大學香港大學粵港傳染病監(jiān)測聯(lián)合實驗室，廣州510080。

④中山大學附屬第一醫(yī)院MICU室，廣州510080。