海南部分城區菜市場淡水魚及禽類感染菲律賓毛細線蟲的調查

王彬瑾，李制一，張凝，李斯，林桂芬，周利民，范志剛

1.海南醫學院基礎醫學與生命科學學院病原生物學教研室，海南 海口 571199；

2.海南職業技術學院，海南 ?？?570100；

3.海南醫學院科學實驗中心，海南 ?？?571199

菲律賓毛細線蟲(Capillaria philippinensis)又稱腸毛細線蟲，可感染人體導致腸毛細線蟲病(intestinal capillariasis)[1]。2010年，海南省儋州市發現一例感染菲律賓毛細線蟲病例[2]。2015 年4 月至2016 年9 月海口市區菜市場淡水魚腸的調查未發現菲律賓毛細線蟲[3-5]。為了解海南其他市縣的相關情況，2016 年11～12 月本課題組結合本省主要河流南渡江、昌化江、萬泉河等的流經地區和出?？谇闆r選取采集點，對瓊海市、陵水黎族自治縣(陵水縣)、樂東黎族自治縣(樂東縣)城區菜市場的淡水魚及活禽腸道內感染菲律賓毛細線蟲情況進行了調查。

1 材料與方法

1.1 樣本采集 從海南省瓊海市、陵水縣、樂東縣城區菜市場采集鳙魚、羅非魚和鴨類樣本。鳙魚、羅非魚、鴨類的市面售賣價分別為25～30元/尾、4～10元/尾、60～70 元/只。新鮮樣本進行相應處理，淡水魚采集其魚腸(含腸道內容物)，禽類采集其糞便。采集的樣本分別裝于干凈封口袋，標明種類、編號，放置冰盒中帶回實驗室當天檢查。

1.2 檢查方法

1.2.1 魚腸及腸道內容物檢查 采集的魚腸樣本用鑷子反復刮取2～3次得到分離的腸道內容物與魚腸，分離出的腸道內容物、魚腸按照編號分別置于相應的培養皿、燒杯中。適量生理鹽水加于裝有腸道內容物的培養皿中，混合均勻，直接涂片并記為“糞便”組；50 目鋼篩過濾含有生理鹽水的腸道內容物混合液，濾液2 000 r/min離心10 min，取離心沉淀物進行生理鹽水涂片，記為“糞便離心”組。燒杯中的魚腸用外科手術剪縱向剖開，觀察并記錄剖開的腸壁有無病變或穿孔，刮取魚腸腸壁黏膜及附著物，用適量生理鹽水將刮取的物質與魚腸一同浸泡于相應編號燒杯中放置3 h，浸泡液2 000 r/min離心10 min，取離心沉淀物進行生理鹽水涂片鏡檢，記為“腸壁”組。魚類的不同涂片組別是指“糞便”組、“糞便離心”組和“腸壁”組。

1.2.2 活禽糞便檢查 操作步驟與1.2.1 魚腸及腸道內容物檢查的“糞便”組和“糞便離心”組操作相同，故不重復說明。鴨的不同涂片組別為“糞便”組和“糞便離心”組。

1.3 統計學方法 應用Excel 整理數據并進行χ2檢驗，對比不同地區菜市場間淡水魚及活禽感染寄生蟲的概率，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 基本情況 瓊海、陵水、樂東城區菜市場共采集淡水魚魚腸(含腸道內容物)177 份(包含野生羅非魚23尾：瓊海市大路鎮文嶺水庫收集14尾，陵水縣收集9尾)，活禽糞便82份，共計259份，未檢出菲律賓毛細線蟲，但發現其他寄生蟲(寄生蟲)感染。

2.2 淡水魚及禽類腸道內寄生蟲的檢出情況 在對樣品進行檢查的過程中，寄生蟲的檢出率為10.39%。其中鳙魚、鴨、羅非魚腸道中寄生蟲的檢出率由高到低分別為21.1%、10.4%、5.94%，差異有統計學意義(χ2=9.723，P＜0.05)。

2.2.1 不同涂片組別的檢出情況 同物種不同涂片組別中，鳙魚的糞便組、糞便離心組和腸壁組寄生蟲檢出率分別為3.95%、7.89%和9.21%，差異無統計學意義(χ2=1.748，P＞0.05)；羅非魚的糞便組、糞便離心組和腸壁組寄生蟲檢出率分別為2.97%、2.97%和0，差異無統計學意義(χ2=3.061，P＞0.05)；鴨的糞便組和糞便離心組寄生蟲檢出率分別為2.60%和7.79%，差異無統計學意義(χ2=2.110，P＞0.05)。同一涂片組別不同物種中，不同物種的糞便組之間寄生蟲檢出率差異無統計學意義(χ2=0.246，P＞0.05)，不同物種的糞便離心組之間寄生蟲檢出率差異無統計學意義(χ2=2.600，P＞0.05)，魚腸組不同物種之間寄生蟲檢出率差異有統計學意義(χ2=9.686，P＜0.05)，見表1。

2.2.2 不同地區的檢出情況 同地區不同物種中，瓊海市鳙魚、羅非魚和鴨腸道中寄生蟲檢出率分別為16.2%、1.52%和0，差異有統計學意義(χ2=8.526，P＜0.05)；陵水縣鳙魚、羅非魚和鴨腸道中寄生蟲檢出率分別為22.2%、4.00%和29.2%，差異無統計學意義(χ2=5.586，P＞0.05)；樂東縣鳙魚、羅非魚和鴨腸道中寄生蟲檢出率分別為28.6%、40.0%和2.00%，差異有統計學意義(χ2=15.682，P＜0.05)。同物種不同地區中，鳙魚不同地區之間寄生蟲檢出率差異無統計學意義(χ2=1.250，P＞0.05)，羅非魚不同地區之間寄生蟲檢出率差異有統計學意義(χ2=23.242，P＜0.05)，鴨不同地區之間寄生蟲檢出率差異有統計學意義(χ2=13.217，P＜0.05)，見表2。

表1 不同涂片組別不同物種腸道內寄生蟲的檢出情況

表2 不同地區不同物種中寄生蟲的檢出情況

3 討論

菲律賓毛細線蟲主要流行于東南亞地區，可以影響腸道吸收功能，造成液體、蛋白質和電解質流失，導致低蛋白血癥和低鉀血癥等[1]。2010年海南省報道第一例菲律賓毛細線蟲病例[2]。2015 年至2016 年課題組采集?？谑袇^的大量樣本展開相應調查，以了解?？谑蟹坡少e毛細線蟲的感染情況，結果未發現菲律賓毛細線蟲的感染[3-5]。根據海南省各市縣分布情況及河流分布特點，本次調查以東線萬泉河入?？诃偤Ｊ?、西線昌化江流經地樂東縣及兩地居中點陵水縣作為采集點，以小樣本量抽樣的方式進行調查。調查結果與李斯等[5]?？谑袇^菜市場淡水魚菲律賓毛細線蟲感染情況的相關報道一致，未發現菲律賓毛細線蟲。本課題組2016年9月至2018年10月在?？诶^續進行大樣本量調研也沒有發現菲律賓毛細線蟲。這可能與調查地點菜市場的淡水魚主要來自人工養殖魚塘有關[3]。本調查采集對象主要為菜市場的淡水魚禽，而2010 年報道的海南儋州菲律賓毛細線蟲病病例的起因為患者生食泥鰍[2]。這可能也是調查未檢出菲律賓毛細線蟲的原因之一。因此，瓊海、陵水、樂東城區菜市場淡水魚及禽類與海口市區菜市場的淡水魚一樣不存在菲律賓毛細線蟲感染市民的風險。

本調查結果與王延等[3]、但彩虹等[4]?？谑袇^菜市場菲律賓毛細線蟲感染情況調查中檢出其他寄生蟲的結果相似，發現了其他寄生蟲的感染。本調查顯示瓊海、樂東地區鳙魚的寄生蟲檢出率、羅非魚的寄生蟲檢出率及鴨的寄生蟲檢出率之間的差異均具有統計學意義。海南島有三大主要淡水河流，分別為南渡江、昌化江、萬泉河。萬泉河的南北支流于瓊海市合口咀匯合，昌化江流經樂東縣并且為樂東境內兩大河流之一。不同流域的內部環境多樣復雜，河流中所棲居的生物也不盡相同。這可能是造成其檢出率差異的原因之一。本調查還顯示鳙魚的腸壁寄生蟲檢出率高于羅非魚的檢出率。因此，不同地區居民食用不同淡水魚禽可能感染寄生蟲的風險將有所不同。文獻顯示，國內不同地區淡水魚感染寄生蟲的概率有所不同，人們生食(或半生食)淡水魚將存在感染寄生蟲的風險[6-9]。近年來人們對食材的口感、新鮮度有了更高追求，在魚類食材的處理方面，不少當地居民選擇將其制成魚類刺身、魚生粥等菜肴后食用；而對家禽類食材的常見處理，海南多數家庭偏愛于將其煮至快熟的半生狀態后斬件、斬塊食用(簡稱白斬)。這些飲食行為和習慣將增加居民感染寄生蟲的風險。因此，當地居民應提高防范意識，將淡水魚禽煮熟煮透后食用，當地防疫部門也應當做好相應的預防宣傳、定期檢疫等工作。

為了明確瓊海、陵水和樂東是否是菲律賓毛細線蟲的自然疫源地，本課題組之后將根據實際情況前往當地水庫、河流及濕地等地區對野生淡水魚、泥鰍、水禽及候鳥等進行調研。