癲癇患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ 水平變化及其意義

桂蘭，康靖，呂麗英 (興安職業技術學院醫學分院，內蒙古烏蘭浩特37400；興安盟人民醫院)

癲癇患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ 水平變化及其意義

桂蘭1，康靖2，呂麗英2
(1興安職業技術學院醫學分院，內蒙古烏蘭浩特137400；2興安盟人民醫院)

目的 觀察兒童癲癇患者血清高遷移率族蛋白1(HMGB1)、白細胞介素1(IL-2)、干擾素-γ(INF-γ)變化，并探討其意義。方法 選擇10例兒童癲癇患者為觀察組，30例健康兒童為對照組。觀察組癲癇頻發29例，持續狀態22例，非頻發或持續狀態38例。采用雙抗體酶聯免疫吸附法檢測兩組血清HMGB1、IL-2及INF-γ水平。結果 觀察組血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平高于對照組(P均<0.05)。觀察組癲癇頻發、處于持續狀態患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平高于非頻發或持續狀態患兒(P均<0.05)，癲癇頻發患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平與持續狀態患兒相比，P均>0.05。結論 癲癇患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平升高。檢測HMGB1、IL-2、INF-γ可能有助于兒童癲癇的診斷及病情評估。

癲癇；高遷移率族蛋白1；白細胞介素2；干擾素-γ

免疫功能的紊亂以及炎癥性反應在成人癲癇發作過程中有重要作用[1，2]。高遷移率族蛋白1(HMGB1)是廣泛存在于心、肝、脾、肺、腎等組織細胞中的非組蛋白染色體結合蛋白，有研究發現[3]，HMGB1參與了顱內感染、腦缺血、腦損傷以及敗血癥等炎癥性疾病的發生發展過程。IL-2由活化的CD4+T、CD8+T細胞合成并分泌，是具有廣泛生物活性的調控免疫應答的細胞因子，有研究證實白細胞介素2(IL-2)在癲癇發生發展過程中扮演重要作用[4]。干擾素-γ(INF-γ)是在一定刺激原作用下由T淋巴細胞分泌的細胞因子，能通過調節并誘導細胞趨化因子的表達而促進炎癥性反應的發生[5]。但是癲癇兒童血清HMGB1、IL-2、IFN-γ水平的變化并不明確。本研究觀察了癲癇兒童血清中HMGB1、IL-2、IFN-γ水平變化，探討其在兒童癲癇發生發展過程中的作用及其臨床意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2014年1月～2016年12月收治的89例兒童癲癇患者為觀察組，其中男49例、女40例，年齡3個月～14歲、平均5.7歲。病程3個月～5年，平均1.2年。納入標準：①符合2010年國際抗癲癇聯盟和國際癲癇局制定的癲癇發作和癲癇綜合征診斷指南[6]，并結合臨床特征、病史、腦電圖、MRI等檢查確診的原發性癲癇；②年齡0～14歲；③近1個月內未服用免疫抑制劑、激素類以及其它可能影響本研究結果的藥物；④患者家屬在知情同意書上簽字；⑤獲得醫院倫理委員會的通過。排除標準：①顱腦損傷、腦出血、中樞神經系統等引起的繼發性癲癇；②近期感染性疾病者；③內分泌性疾病、惡性腫瘤等患者。根據癲癇發作的頻率以及每次發作持續時間，本組癲癇頻發29例、持續狀態22例、非癲癇頻發或持續狀態38例。另選取同期查體的30例健康兒童為對照組，其中男18例，女12例；年齡1～13歲，平均6.1歲。本研究已經我院醫學倫理委員會批準。所有受試者的監護人已簽署知情同意書。

1.2 血清HMGB1、IL-2、IFN-γ檢測方法 觀察組患兒清晨采集癲癇發作12 h內空腹肘靜脈血4 mL，對照組兒童于清晨體檢時采集空腹肘靜脈血4 mL，在室溫下靜置30 min后以3 000 r/min的速度離心10 min，留取血清液置于-80 ℃環境下保存待測。采用雙抗體酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平，其中HMGB1、IL-2試劑盒均購自上海生工生物工程股份有限公司(HMGB1檢測試劑盒批號：A729AD0275，IL-2檢測試劑盒批號：A729AD0276)，INF-γ試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司(INF-γ檢測試劑盒批號：20130403)。嚴格按照試劑盒說明書操作。

2 結果

2.1 兩組血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平比較 觀察組患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平均高于對照組(P均<0.05)。兩組患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平比較見表1。

表1 兩組患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平比較

注：與對照組相比，*P<0.05。

2.2 觀察組不同病情患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平比較 觀察組不同病情癲癇兒童血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平水平見表2。觀察組癲癇頻發、處于持續狀態患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平高于非頻發或持續狀態患兒(P均<0.05)，癲癇頻發患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平與持續狀態患兒相比，P均>0.05。經Pearson積矩相關分析，觀察組患者血清HMGB1與IL-2、INF-γ均呈正相關關系(r=0.793、0.659，P<0.05)，血清IL-2與INF-γ呈正相關關系(r=0.812，P<0.05)。

HMGB1主要存在于心、肝、脾、肺、腎等組織的真核細胞中，是一類非組蛋白染色體結合蛋白，具有調節神經細胞出芽以及遷移的作用，參與了腦發育的生理過程。報道表明[11]，HMGB1參與了組織損傷、缺血性腦損傷、膿毒血癥等疾病的病理過程。Huang 等[12]研究顯示，癲癇大鼠海馬神經元細胞、星形膠質細胞中HMGB1水平升高，Choy等[13]發現癲癇患者海馬組織中HMGB1表達明顯增加。IL-2主要是由激活的T細胞分泌的可溶性因子，具有調節淋巴細胞平衡、促進淋巴細胞增生的功能。研究發現[14]，IL-2抗體、IL-2受體的抗體可以抑制興奮性氨基酸的神經傳導作用，并促進γ氨基丁酸的神經傳遞作用，進而抑制癲癇的發作。由此推斷，IL-2作為炎癥因子，可能參與了癲癇的發病過程。IFN是具有廣泛生物活性的防御糖蛋白，具有免疫調節、抗病毒、抗細胞增殖等作用，INF-γ主要是由T細胞、NK細胞所分泌，屬于小分子多肽，只存在于人或者靈長類動物組織細胞中。研究發現[15]，INF-γ介導了機體感染后的多種免疫應答反應。

表2 觀察組不同病情癲癇患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平比較

注：與非癲癇頻發或持續狀態者相比，#P<0.05。

3 討論

本研究結果顯示，觀察組患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平高于對照組，提示HMGB1、IL-2、INF-γ可能參與了癲癇的發病過程，與文獻[12,16]一致。兒童癲癇發病過程極為復雜，發作頻率、發作持續時間對評估癲癇病情有重要意義，發作頻率越高、持續時間越久，患者預后相對越差。本研究結果顯示，觀察組癲癇頻發、處于持續狀態患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平高于非頻發或持續狀態患兒，癲癇頻發患兒血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平與持續狀態患兒相比P均>0.05。說明發作頻繁、發作持續時間久的兒童癲癇患者血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平明顯升高，HMGB1、IL-2、INF-γ水平越高，癲癇病情越嚴重。癲癇病情越嚴重，免疫應答反應越強烈，合成并分泌的細胞因子水平越高。

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癲癇是臨床常見的綜合征，我國人群癲癇的患病率在3.3%～5.8%之間，其中約有75%～80%在兒童期起病[7]。正規抗癲癇治療后，約70%的癲癇患者病情可得到有效控制甚至治愈，30%的患者反復發作而發展為難治性癲癇。癲癇嚴重損傷腦組織，加上藥物的不良反應，給患者的神經系統發育造成嚴重影響[8]。免疫系統在復雜的神經網絡中具有雙向調節作用，神經系統可產生不同類型的神經調質介導免疫功能，而免疫系統可產生免疫活性物質介導神經功能。因此，神經系統性疾病常伴發不同程度的免疫系統功能紊亂，神經系統能產生并分泌多種細胞因子，同時也能表達多種細胞因子受體。研究發現[9]，癲癇發病機制中，神經免疫調節功能的失衡具有重要作用，并且癲癇發病類型、病程的長短以及發作頻率等均會影響免疫系統功能，從而造成體內細胞因子分泌水平的不同。Bembeeva 等[10]研究顯示，細胞因子在癲癇患者腦組織及癲癇動物模型大腦皮層中呈不同程度的升高。

2018年7月初，連續降雨致使許多蘋果園葉片出現生理性“蒸葉”現象，根系生長受阻，進一步影響樹體對養分的吸收、運輸和轉化。

相關性分析顯示，病例組患者血清HMGB1與IL-2、INF-γ均呈正相關，血清IL-2與INF-γ呈正相關，提示HMGB1與IL-2、INF-γ相互作用，共同參與癲癇的發病過程。HMGB1處于致炎因子網絡的中心環節，受損壞死細胞、巨噬細胞被激活后能釋放HMGB1，進而利用信號通路誘介導IL-2、INF-γ等細胞因子的合成和分泌，反過來，HMGB1和細胞因子又能促進HMGB1的釋放，最終通過互相調節的正反饋環路而在癲癇發病過程中啟動、維持、放大炎癥反應。

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