凝膠過濾/離子交換全二維液相色譜系統的構建與評價

張 政, 唐 濤, 楊三東, 孫元社, 李 彤, 張維冰

(1. 齊齊哈爾大學化學與化學工程學院, 黑龍江 齊齊哈爾 161006; 2. 大連依利特分析儀器有限公司,遼寧 大連 116023; 3. 華東理工大學 上海市功能性材料化學重點實驗室, 上海 200237)

研究論文

凝膠過濾/離子交換全二維液相色譜系統的構建與評價

張 政1,2, 唐 濤2, 楊三東2, 孫元社2, 李 彤2, 張維冰1,3*

(1. 齊齊哈爾大學化學與化學工程學院, 黑龍江 齊齊哈爾 161006; 2. 大連依利特分析儀器有限公司,遼寧 大連 116023; 3. 華東理工大學 上海市功能性材料化學重點實驗室, 上海 200237)

基于蛋白質的尺寸及帶電性質,將凝膠過濾色譜(GFC)與離子交換色譜(IEC)兩種分離模式結合,采用雙捕集柱接口構建了GFC/2×IEC二維液相色譜(2-D LC)分離系統,同時考慮離子交換色譜分離蛋白質對等電點范圍的限制,進一步結合中心切割平行柱的方法實現對蛋白質的全二維分離。為與后續蛋白質在線酶解、多肽分離及質譜鑒定匹配,系統中采用常規柱以保證蛋白質質譜鑒定對樣品量的要求,3種常規分離柱分別選用凝膠過濾色譜柱TSK-GEL G3000SWXL(300 mm×7.8 mm, 5 μm)、強陰離子交換色譜柱Hypersil SAX(100 mm×4.6 mm, 10 μm)和強陽離子交換色譜柱Hypersil SCX(100 mm×4.6 mm, 10 μm)。最終以酵母細胞蛋白質提取液為樣品,對構建的二維系統加以評價,在總蛋白質濃度13.5 mg/mL、上樣體積100 μL的條件下,將第一維分離等時間切割17次,并將切割餾分全部導入第二維繼續分離,二維系統在148 min內獲得的總峰容量達到884。說明所構建的系統可以用于蛋白質的在線全二維分離。

全二維液相色譜;凝膠過濾色譜;離子交換色譜;強陰離子交換;強陽離子交換;蛋白質;酵母