高效液相色譜法測(cè)定不同烤煙品種中綠原酸的含量

張偉娜　劉勇　龐立峰　朱先志　劉莉　王希玲　徐蕊　高強(qiáng)

摘要：該文采用高效液相色譜法對(duì)5個(gè)不同烤煙品種中綠原酸含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明：使用高效液相色譜法測(cè)定不同烤煙品種中綠原酸的含量，精密度好，平均回收率高。各品種中綠原酸含量差異較大，葉片中綠原酸含量的分布范圍4.7～9.3mg/g，花中綠原酸含量的分布范圍5.3～12.4mg/g。烤煙中綠原酸含量在不同品種不同部位間含量分布有差異，高效液相色譜法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于烤煙中綠原酸含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；烤煙；綠原酸；品種

綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯，具有清除體內(nèi)自由基、抗氧化、抗病毒、抗菌消炎、降血脂和保肝利膽等多種功效。茄科煙屬植物烤煙中富含綠原酸類化合物。但不同品種以及不同部位的烤煙中綠原酸含量差異較大。本文采用高效液相色譜法（以下簡(jiǎn)稱HPLC法）對(duì)5個(gè)烤煙品種中綠原酸含量進(jìn)行分析，為不同烤煙品種中綠原酸含量的測(cè)定及分離、純化提供參考，為烤煙資源的進(jìn)一步綜合開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1.材料與方法

1.1儀器與試劑 儀器：KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器；Agilent1100組合式高效液相色譜儀；ALC-1104電子天平。試劑：綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，乙腈為色譜純，乙醇、磷酸為分析純。

1.2試驗(yàn)材料 5個(gè)烤煙品種：NC89、NC196、豫煙6號(hào)、魯煙1號(hào)、韭菜坪2號(hào)，分別于2015年采于山東省臨沂市沂水煙葉試驗(yàn)站。洗凈后低溫烘干，備用。

1.3色譜條件 Ultimate AQ-C18（250mm×4.6mm，5um）色譜柱；流動(dòng)相為25%甲醇+75%磷酸氫二鈉緩沖溶液（pH4.0）；流速1.0mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量20uL；檢測(cè)波長(zhǎng)326nm。

1.4溶液制備 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品0.02g，用95%乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶，作為原液，搖勻備用。再分別稀釋到0.08mg/mL、0.05mg/mL、0.03mg/mL、0.005mg/mL。待測(cè)液制備：稱取烤煙粉末1.0g，加入60%乙醇10 mL，超聲波輔助提取65min，作為樣品待測(cè)液。

2.結(jié)果與分析

2.1HPLC法測(cè)定綠原酸的穩(wěn)定性考察 將一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液按色譜條件進(jìn)行分析，建立線性回歸方程為y=61302x-158.79，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。表明綠原酸在0.05-0.2mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。取0.05-0.2mg/mL的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每隔2h進(jìn)樣，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品峰面積，結(jié)果表明綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2HPLC法測(cè)定綠原酸的精密度考察 HPLC法測(cè)定綠原酸的精密度考察見(jiàn)表1。測(cè)定其峰面積RSD為0.13%，結(jié)果表明HPLC法測(cè)定綠原酸含量精密度良好。

2.3HPLC法測(cè)定綠原酸的加樣回收率考察 PLC法測(cè)定綠原酸的加樣回收率考察見(jiàn)表2。在樣品中分別加入一定濃度的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別計(jì)算加樣回收率，綠原酸的平均回收率為98.54%。

2.4樣品含量的測(cè)定 分別稱取5個(gè)烤煙品種葉片和花粉末，按“1.4”的方法制備樣液，對(duì)5個(gè)烤煙品種的葉片和花中綠原酸含量的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，各品種含量差異較大，花中綠原酸含量明顯高于葉片中綠原酸含量。葉片中綠原酸含量的分布范圍4.7-9.3mg/g，花中綠原酸含量的分布范圍5.3-12.4mg，g，其中魯煙1號(hào)中綠原酸含量最高，葉片中含量9.3mg/g，花中綠原酸含量為12.4mg/g。NCl96中綠原酸含量最低，葉片中含量4.7mg/g，花中綠原酸含量為5.3mg/g。

總之不同品種及不同部位的烤煙中活性成分-綠原酸含量的分布范圍是4.7-12.4mg/g，差異較大。使用該高效液相色譜法測(cè)定不同烤煙品種中綠原酸的含量，簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于烤煙中綠原酸含量的測(cè)定。