HPLC測定不同產(chǎn)地白蘇子中迷迭香酸的含量

李婷，成彥，陳偉，雍菁

（1．南京明基醫(yī)院中藥房/南京醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210019；2．南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，江蘇 南京 210001；3．蘇州市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 蘇州 215009）

HPLC測定不同產(chǎn)地白蘇子中迷迭香酸的含量

李婷1，成彥1，陳偉3，雍菁2

（1．南京明基醫(yī)院中藥房/南京醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210019；2．南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，江蘇 南京 210001；3．蘇州市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 蘇州 215009）

目的：比較不同產(chǎn)地白蘇子產(chǎn)品中迷迭香酸的含量，擬建立白蘇子的質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。方法：通過高效液相色譜法（HPLC）對8批次不同白蘇子產(chǎn)品進(jìn)行迷迭香酸含量測定；采用迪馬Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇-0.1%甲酸溶液（40∶60），流速：1.0 mL/min，柱溫：35 ℃，檢測波長330 nm，進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果：8個(gè)批次的白蘇子中迷迭香酸含量為0.149%～0.196%。結(jié)論：HPLC測定白蘇子產(chǎn)品中迷迭香酸的方法重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，可作為研究白蘇子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法。

白蘇子；不同產(chǎn)地；高效液相色譜法；含量測定；迷迭香酸

白蘇子始載于《名醫(yī)別錄》，列為上品。陶弘景曰：“荏狀如蘇，高大白色，不甚香其子研之，雜米作糜，甚肥美，下氣補(bǔ)益?！碧K頌認(rèn)為：“蘇有數(shù)種：有水蘇、白蘇、山魚蘇，皆是荏類”；并謂，“白蘇，方徑圓葉，不紫，亦甚香，實(shí)亦入藥?！崩顣r(shí)珍謂：“紫蘇者，以別白蘇也”，進(jìn)一步闡明：“其面背皆白者即白蘇，乃荏也[1-4]?！弊咸K是民間常用的中草藥，全草均可入藥，其性溫、味辛，歸肺、脾、胃經(jīng)，具有解毒，散寒，行氣和胃等功效，用于風(fēng)寒感冒，咳嗽，嘔惡，妊娠嘔吐，解魚鱉蟲毒等。嫩尖也可當(dāng)茶用，有清熱解毒之功效。白蘇的分布極為廣泛，資源豐富，是我國傳統(tǒng)的藥食兩用植物之一。中國藥典只收載了紫蘇子，但白蘇子在市場上大量流通。紫蘇子含迷迭香酸，該酸具有抗炎、抗氧化和免疫抑制等多種活性[5-9]，《中華人民共和國藥典》（2010年版）便以它作為紫蘇子的含量測定成分。本文以迷迭香酸含量為指標(biāo)，考察白蘇子飲片中迷迭香酸的含量，為白蘇子的質(zhì)量控制提供可靠依據(jù)。

1 樣品情況

收集樣品共8批，具體來源見表1。

表1 樣品收集

2 儀器與試藥

高效液相色譜儀（Waters e2695-2998，PDA檢測器，Empower 3色譜工作站）；迪馬Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；電子天平（Sartorius，BP115D，d＝0.1 mg）；高速離心機(jī)（Thermo，Biofuge primo R）；超聲波清洗儀（KQ-400GKDV，昆山市超聲儀器有限公司）。

2.2 試藥

甲醇（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（色譜純，美國Sigma-Aldrich公司）；去離子水（Milli-Q超純水機(jī)制備，美國Millipore公司）。

迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品（批號：201505）購自中國藥品生物制品檢定研究院。

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

以Diamonsil C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）為填充劑[10]；流動相：甲醇-0.1%甲酸溶液（40∶60），流速：1.0 mL/min，柱溫：35 ℃，檢測波長330 nm，進(jìn)樣量為10 μL。

3.2 溶液的制備

5.堅(jiān)定不移地狠抓防疫體系建設(shè)，確保有效提升服務(wù)能力。圍繞“基層隊(duì)伍素質(zhì)提升化”，大力實(shí)施基層獸醫(yī)遠(yuǎn)程教育和定期培訓(xùn)，在全區(qū)218名鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)人員中，中專以上文化程度達(dá)到80%，在42名機(jī)關(guān)人員中，有碩士研究生8名，畜牧獸醫(yī)管理和技術(shù)人員結(jié)構(gòu)得到多層次優(yōu)化。以全面打造標(biāo)準(zhǔn)化鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站為目標(biāo)，采取中央投資與自籌相結(jié)合的方式，近年投入改擴(kuò)建項(xiàng)目建設(shè)資金500多萬元，改建全區(qū)34個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，完善了區(qū)級及鄉(xiāng)級的冷鏈體系和電腦、打印機(jī)等辦公設(shè)備，新建改建凍庫3個(gè)、配備冰柜、冰箱共計(jì)90余臺、電腦50余臺，打印機(jī)30余臺。全區(qū)的鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站通過規(guī)范建設(shè)后面貌煥然一新。

對照品溶液的制備：精密稱取迷迭香酸對照品10 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液[11]。用甲醇稀釋成各種濃度的對照品溶液。

供試品溶液的制備：取白蘇子粉末0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流2 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

3.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

3.3.1 專屬性試驗(yàn) 在“3.1”色譜條件下，迷迭香酸峰形良好，無雜質(zhì)干擾（圖1-1，圖1-2，圖1-3）。

3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 精密吸取對照品儲備液配置成迷迭香酸濃度分別為5.200，10.399，20.798，41.597，83.192，103.992，207.983 μg/mL的對照品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，迷迭香酸回歸方程為:

圖1-1 迷迭香酸陰性對照溶液HPLC圖

結(jié)果表明迷迭香酸對照品濃度在5.200～207.983 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

3.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取迷迭香酸濃度為41.597 μg/mL的對照品溶液10 μL，按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄迷迭香酸峰面積。迷迭香酸峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.906%。

圖1-2 迷迭香酸對照品溶液HPLC圖

3.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批白蘇子樣品6份，1 g/份，分別精密稱定，按照“3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述HPLC條件測定。結(jié)果迷迭香酸含量的RSD為1.719%。

3.3.5 最低檢測限和定量限 信噪比S/N為3時(shí)，最低檢測限為0.1078 μg/mL，信噪比S/N為10時(shí)，最低定量限為0.3234 μg/mL。見圖2、圖3。

圖2 迷迭香酸最低檢出限

圖3 迷迭香酸最低定量限

3.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取混合對照品溶液（迷迭香酸濃度為20.798 μg/mL）分別在0，2，4，6，8，10及12 h分別進(jìn)樣10 μL，RSD分別為0.348%，表明對照品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.3.7 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批白蘇子5份，0.25 g/份，精密稱定，分別精密加入迷迭香酸對照品溶液。按照“3.2”項(xiàng)下方法制備供試溶液，按上述HPLC條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

3.4 樣品測定

分取上述8批藥材，按照“3.2”項(xiàng)下方法操作，提取供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測定迷迭香酸的色譜峰面積，代入線性回歸方程：

Y＝33163X＋1085.6，

計(jì)算出藥材中迷迭香酸的含量，測定結(jié)果見表3。

表2 迷迭香酸加樣回收率

表3 迷迭香酸含量 （mg）

4 討論

預(yù)試驗(yàn)考察了80%甲醇、甲醇、乙醇、50%乙醇、超聲30，50，60 min，以及80%甲醇、甲醇、乙醇、50%乙醇加熱回流1，1.5，2，3 h[12]，結(jié)果表明80%甲醇回流2 h提取效率最高。測定樣品8批，最低測定值為迷迭香酸0.149%。以最低測定值的80%設(shè)限，迷迭香酸為0.119%，暫定本品按干燥品計(jì)算，含迷迭香酸（C18H16O8）不得少于0.12%。

分別采用3種不同品牌色譜柱進(jìn)行測定，結(jié)果表明在不同色譜柱上，迷迭香酸均峰形良好，供試品主峰均能與雜質(zhì)峰得到基線分離。

本文較好地運(yùn)用HPLC檢測了白蘇子中迷迭香酸的含量，方法快速簡便，重現(xiàn)性好，為研究白蘇子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠的實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。

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本文編輯：蘇日力嘎

Determination of Rosmarinci Acid Content in Perilla frutescens(L.)Britt. from Different Habitats by HPLC

Li Ting1, Cheng Yan1, Chen Wei3, Yong Jing2

(1. Mingji Hospital of Nanjing City, Jiangsu Nanjing 210019, China; 2. The Third Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Jiangsu Nanjing 210001, China; 3. Suzhou Traditional Chinese Medical Hospital, Jiangsu Suzhou 215009, China)

Objective：To compare the rosmarinic acid content in Perilla frutescens (L.) Britt. from different habitats in order to establish the quality standard for Perilla frutescens. Methods：The rosmarinic acid contents in eight batches of Perilla frutescens preparation were determined by HPLC using Diamonsil C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) chromatographic column. Methanol-0.1% formic acid (40∶60) was served as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was 35 ℃, while the detection wavelength was 330 nm, and the sample loading was 10 μL. Results：The rosmarinic acid contents in eight batches of Perilla frutescens preparation were 0.149%～0.196%. Conclusion：The HPLC method for determination of rosmarinic acid content in Perilla frutescens is precise and reproducible, which may be used for the study on quality standard for Perilla frutescens.

Perilla frutescens; Different Habitats; High Performance Liquid Chromatography (HPLC); Content Determination; Rosmarinic Acid

R284.1

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.03.008

2017 - 01 - 19

南京市中醫(yī)藥轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)基地項(xiàng)目（ZYYZH1304）;南京市中醫(yī)院科研項(xiàng)目（YJLC201605）

李婷，女，主管中藥師。研究方向：中藥學(xué)。E-mail：yxhgrace@163.com

雍菁，女，主管中藥師。研究方向：中藥學(xué)。E-mail：1565661221@qq.com