多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)在糖尿病腎病早期診斷中的臨床應(yīng)用

黃顥+韋鳳英+潘國(guó)剛+鄧益斌

【摘要】目的探討血清胱抑素C（Cys C）、同型半胱氨酸（Hcy）、β2微球蛋白（β2MG）及尿微量白蛋白（mAlb）聯(lián)合檢測(cè)在糖尿病腎病（DN）早期診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

方法選取264例2型糖尿病（T2DM）患者為研究對(duì)象，分為兩個(gè)觀察組，即132例糖尿病腎病患者為DN組，132例單純糖尿病患者為T(mén)2DM組；另選取132例同期健康體檢者為對(duì)照組。在貝克曼庫(kù)爾特AU680型全自動(dòng)生化分析儀上采用乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法測(cè)定血清中的Cys C、β2MG及尿液mAlb水平；羅氏Cobas E411型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上采用酶動(dòng)力學(xué)法測(cè)定血清Hcy水平。對(duì)比分析各組指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果。

結(jié)果與對(duì)照組比較，DN組和T2DM組的Cys C、Hcy、β2MG、mAlb四項(xiàng)觀察指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果均明顯增高（P<0.01），且DN組的四項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果增高更明顯 （P<0.01）；相關(guān)性分析結(jié)果顯示，Cys C與Hcy呈正相關(guān)（r=0.663， P<0.05），Cys C、Hcy與 mAlb均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.712、-0.632， P均<0.05），而Cys C、Hcy、mAlb均與β2MG相關(guān)不顯著；ROC曲線分析結(jié)果也顯示，Cys C、Hcy、β2MG及mAlb的ROC曲線下面積分別為0.815、0.916、0.807和0.783，標(biāo)準(zhǔn)誤（s〖AKx-D〗）分別為0.050、0.023、0.045和0.018，95%置信區(qū)間分別為0.736～0.893、0.875～0.965、0.733～0.885和0.712～0.865；四項(xiàng)指標(biāo)（Cys C+Hcy+β2MG+mAlb）聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為96.21%（127/132），三項(xiàng)指標(biāo)（Cys C+Hcy+β2MG）聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為90.15%（119/132），兩項(xiàng)指標(biāo)（Cys C+Hcy）聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為84.10%（119/132），均明顯高于單項(xiàng)指標(biāo)（Cys C）檢測(cè)的陽(yáng)性率71.96%（95/132）。

結(jié)論定期監(jiān)測(cè)血清Cys C、Hcy、β2MG及尿液mAlb等多項(xiàng)指標(biāo)變化，有助于了解糖尿病腎病患者的病情發(fā)展，其臨床應(yīng)用價(jià)值優(yōu)于單項(xiàng)觀察指標(biāo)，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】血清胱抑素C；同型半胱氨酸；β2微球蛋白；尿微量白蛋白；糖尿病腎病

中圖分類(lèi)號(hào)：R446.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.02.003

【Abstract】Objective To investigate the clinical value of combined detection of serum cystatin C（Cys C），homocysteine（Hcy），β2microglobulin （β2MG） and microalbuminuria（mAlb） in early diagnosis of diabetic nephropathy（DN）.

Methods 264 cases of type 2 diabetes mellitus（T2DM） patients were selected as research objects and divided into two observation groups，that was，132 DN patients were selected as DN group，and 132 patients with simple diabetes mellitus as T2DM group.And another 132 healthy subjects were selected as control group.And then，serum levels of Cys C，β2MG and mAlb were determined by latex enhanced immune scattering turbidimetry on Beckman Kurt AU680 automatic biochemical analyzer.Serum level of Hcy was measured by enzyme kinetic method on Roche Cobas E411 automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer.Test results of each index were compared and analyzed among all groups.

ResultsCompared with the control group，detection results of Cys C，Hcy，β2MG，mAlb of the DN group and T2DM group all significantly increased（P<0.01），and the detection results of the four indexes of the DN group increased more significantly（P<0.01）.Correlation analysis showed that the Cys C was positively correlated with Hcy（r=0.663，P<0.05），Cys C，Hcy and mAlb were negatively correlated（r=-0.712，-0.632，all P<0.05），while Cys C，Hcy，mAlb were all not significantly correlated with β2MG.ROC curve analysis results also showed that area under the ROC curve of Cys C，Hcy，β2MG and mAlb were 0.815，0.916，0.807 and 0.783，respectively，standard errors（s〖AKx-D〗） was 0.050，0.023，0.045 and 0.018，respectively，95% confidence intervals was 0.736～0.893，0.875～0.965，0.733～0.885 and 0.712～0.865，respectively.The positive rate of combined detection of the four indicators （Cys C+Hcy+β2MG+mAlb） was 96.21%（127/132），that of combined detection of the three indicators （Cys C+Hcy+β2MG） was 90.15%（119/132），and that of combined detection of the two indicators （Cys C+Hcy） was 84.10%（119/132），all significantly higher than that 71.96%（95/132） of single index （Cys C）.

ConclusionRegular monitoring for changes of indexes like Cys C，Hcy，β2MG and urine mAlb can help to understand the development of diabetic nephropathy patients，and its clinical value is better than that of single observation index.Thus， it is worthy of popularization and application.

【Key words】Cys C；Hcy；β2MG；mAlb；DN

根據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟（IDF）的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)糖尿病患者已高達(dá)1.14億，居世界首位。糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病發(fā)展過(guò)程中導(dǎo)致的終末期病變，是2型糖尿病（T2DM）最常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥，其對(duì)人體健康的危害程度居慢性非傳染性疾病的第三位[1]。DN隱蔽性強(qiáng)，當(dāng)患者出現(xiàn)典型臨床癥狀時(shí)，通常為時(shí)已晚，即使通過(guò)治療也難以達(dá)到理想效果[2～3]。因此，尋找糖尿病腎病早期診斷指標(biāo)對(duì)早期預(yù)防腎功能衰竭具有重要的意義。本文探討血清胱抑素C（Cys C）、同型半胱氨酸（Hcy）、β2微球蛋白（β2MG）、尿微量白蛋白（mAlb）等多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)在DN早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值，以期為DN早期診斷與治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2014年2月～2016年9月我院內(nèi)分泌科收治的2型糖尿病患者264例為研究對(duì)象，其中糖尿病腎病患者132例（DN組），男84例，女48例，平均年齡（53.5±8.3）歲，平均病程（6.5±3.3）年；單純糖尿病患者132例（T2DM組），男76例，女56例，平均年齡（52.5±8.6）歲，平均病程（5.1±3.5）年。選取同期健康體檢者132例為對(duì)照組，男70例，女62例，平均年齡（55.8±8.9）歲，經(jīng)糖耐量試驗(yàn)排除糖尿病，血壓、血脂均正常，無(wú)糖尿病及高血壓家族史。三組對(duì)象一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2儀器與試劑

Cys C和β2MG檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海執(zhí)誠(chéng)生物科技有限公司；Hcy檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；mAlb試劑盒購(gòu)自寧波美康生物科技有限公司；貝克曼庫(kù)爾特AU680型全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司；羅氏Cobas E411型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀購(gòu)自德國(guó)ROCHE有限公司。

1.3入組標(biāo)準(zhǔn)

（1）2型糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)符合1999年世界衛(wèi)生組織（WHO）規(guī)定的診斷與分型標(biāo)準(zhǔn)；（2）近期無(wú)經(jīng)常熬夜、吸煙、飲酒、飲咖啡等不良影響因素；（3）排除患有嚴(yán)重心、肝、肺、腎、腦等臟器功能不全患者；（4）排除血液系統(tǒng)疾病及急性感染性疾病患者。

1.4方法

所有觀察對(duì)象均空腹?fàn)顟B(tài)下采集靜脈血5 ml，留取中段尿2 ml。血液標(biāo)本2000 r/min離心10 min，取血清檢測(cè)；尿液標(biāo)本2000 r/min離心5 min，取上清液檢測(cè)。其中Cys C、β2MG、mAlb采用乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法測(cè)定，在貝克曼庫(kù)爾特AU680型全自動(dòng)生化分析儀上樣檢測(cè)；Hcy采用酶動(dòng)力學(xué)法測(cè)定，在羅氏Cobas E411型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上樣檢測(cè)。所有檢測(cè)項(xiàng)目在實(shí)驗(yàn)前均進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控分析，高、中、低值質(zhì)控均在控。結(jié)果判斷采用試劑盒說(shuō)明書(shū)中的參考范圍：Cys C為0～1.25 mg/L；Hcy為0～15.0 μmol/L；β2MG為0～2.8 mg/L；mAlb為0～30 mg/L。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（〖AKx-D〗±s）表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用q檢驗(yàn)（NewmanKeuls法），計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)；診斷效能評(píng)價(jià)采用ROC曲線，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1各組觀察指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的比較

與對(duì)照組比較，DN組和T2DM組的Cys C、Hcy、β2MG、mAlb四項(xiàng)觀察指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果均明顯增高（P<0.01），且DN組增高更明顯 （P<0.01）。見(jiàn)表1。

2.2DN組中各觀察指標(biāo)間的相關(guān)性分析

DN組中Cys C與Hcy呈正相關(guān)（r=0.663， P<0.05）；Cys C、Hcy與 mAlb均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.712、-0.632，P均<0.05）；Cys C、Hcy、mAlb均與β2MG相關(guān)不顯著。

2.3DN組中各觀察指標(biāo)對(duì)DN的診斷效能

根據(jù)DN組和對(duì)照組的各指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果繪制出ROC曲線圖，并計(jì)算曲線下面積、標(biāo)準(zhǔn)誤和置信區(qū)間。結(jié)果顯示，Cys C、Hcy、β2MG及mAlb的ROC曲線下面積分別為0.815、0.916、0.807和0.783，標(biāo)準(zhǔn)誤（s）分別為0.050、0.023、0.045和0.018，95%置信區(qū)間分別為0.736～0.893、0.875～0.965、0.733～0.885和0.712～0.865，均具有較高的診斷效能。見(jiàn)圖1。

2.4DN組中多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)與單項(xiàng)指標(biāo)的陽(yáng)性率比較

四項(xiàng)指標(biāo)（Cys C+Hcy+β2MG+mAlb）聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為96.21%，三項(xiàng)指標(biāo)（Cys C+Hcy+β2MG）聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為90.15%，兩項(xiàng)指標(biāo)（Cys C+Hcy）聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為84.10%，單項(xiàng)指標(biāo)（Cys C）檢測(cè)的陽(yáng)性率71.96%，四組診斷陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），單項(xiàng)指標(biāo)診斷陽(yáng)性率低于聯(lián)合檢測(cè)，并且診斷陽(yáng)性率隨著聯(lián)合指標(biāo)數(shù)量增多而有遞增趨勢(shì)。見(jiàn)表2。

3討論

Cys C是一種低分子量堿性糖化蛋白質(zhì)，在所有有核細(xì)胞中恒定持續(xù)表達(dá)，生成速度和循環(huán)水平較為恒定，不受肌肉、感染、蛋白排泄率的影響，且與年齡、性別、腫瘤、免疫性和內(nèi)分泌疾病無(wú)關(guān)，是腎功能早期損傷較好的內(nèi)源性標(biāo)志物[4～5]。Hcy是一種與血管損傷密切相關(guān)的氨基酸，DN早期往往會(huì)發(fā)生血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，從而導(dǎo)致Hcy增高，是腎功能早期損傷的另一內(nèi)源性標(biāo)志物[6]。β2MG是一種小分子量蛋白質(zhì)，生成量恒定，不與血漿蛋白結(jié)合，可自由通過(guò)腎小球，幾乎全被近曲腎小管完全吸收，繼而在腎臟進(jìn)行分解代謝，能較早反映腎小球?yàn)V過(guò)功能的損傷情況，也作為早期腎功能損傷的敏感指標(biāo)物[7]。正常情況下，腎小球?yàn)V過(guò)膜上的負(fù)電荷屏障會(huì)阻止mAlb通過(guò)，尿液中幾乎檢測(cè)不到mAlb的存在，但腎損傷早期主要破壞腎小球?yàn)V過(guò)膜的負(fù)電荷屏障，致使尿液中出現(xiàn)大量的mAlb，因此，檢測(cè)尿液中的mAlb含量變化也可反映腎功能的早期損傷情況[8]。盡管這些觀察指標(biāo)都能從不同角度反映腎功能早期變化情況，但單一指標(biāo)的診斷效能比較低，因此推測(cè)，多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)有可能會(huì)提高其臨床診斷效能。

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，DN組和T2DM組的Cys C、Hcy、β2MG、mAlb四項(xiàng)觀察指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果均明顯增高，且DN組的增高更明顯；相關(guān)性分析結(jié)果顯示，Cys C與Hcy呈正相關(guān)，Cys C、Hcy與 mAlb均呈負(fù)相關(guān)，而Cys C、Hcy、mAlb均與β2MG相關(guān)無(wú)顯著性。說(shuō)明當(dāng)腎小球功能出現(xiàn)輕微損傷時(shí)，血漿Cys C、Hcy、β2MG及尿mAlb濃度均可出現(xiàn)異常變化，且會(huì)隨著病情加劇不斷加重。ROC曲線分析結(jié)果也顯示，Cys C、Hcy、β2MG及mAlb的ROC曲線下面積分別為0.815、0.916、0.807和0.783，標(biāo)準(zhǔn)誤（s〖AKx-D〗）分別為0.050、0.023、0.045和0.018，95%置信區(qū)間分別為0.736～0.893、0.875～0.965、0.733～0.885和0.712～0.865，說(shuō)明這四項(xiàng)觀察指標(biāo)均具有較高的診斷效能，都可以用于DN的早期診斷，而且四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率（96.21%）明顯高于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的陽(yáng)性率（71.96%）。

綜上所述，定期監(jiān)測(cè)Cys C、Hcy、β2MG、mAlb等多項(xiàng)指標(biāo)變化，有助于了解DN患者的病情發(fā)展，其臨床應(yīng)用價(jià)值優(yōu)于單項(xiàng)觀察指標(biāo)，值得推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2016-11-23 修回日期：2017-03-27）

（編輯：梁明佩）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81460123）；百色市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（百科計(jì)字〔2016〕14號(hào)）；百色市右江區(qū)科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（右科計(jì)字〔2016〕1號(hào)）

作者簡(jiǎn)介：黃顥，男，主管技師，研究方向：臨床檢驗(yàn)診斷技術(shù)研究與開(kāi)發(fā)。Email：77278652@qq.com

▲通信作者：鄧益斌。Email：dengyb75@163.com