超高效液相色譜法測定調味醬中的苯甲酸和山梨酸

建立了超高效液相色譜快速測定調味醬中苯甲酸、山梨酸的方法。樣品以亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白質。使用C18色譜柱，流動相為0.02 mol/L乙酸銨–甲醇（95：5，v/v），梯度洗脫，用二極管陣列檢測器在波長240nm處檢測，流速為0.35 mL/min。結果表明，苯甲酸、山梨酸在5min內可以很好的分離，加標回收率在96.00-99.30%之間，相對標準偏差（RSD）在0.53-1.39%之間。該法簡單、靈敏，適用于調味醬中苯甲酸和山梨酸的檢測。

調味醬是我國人民日常生活中使用的產品，由于其中含有豐富的營養成分，在長期儲存中極易變質，在大規模工業生產中，企業為防止其變質，會在其加工過程中常加入苯甲酸和山梨酸等防腐劑。但是食用含有過量苯甲酸和山梨酸的食品會嚴重影響人體健康。

本實驗的目的是建立一種超高效液相色譜法測定調味醬中的苯甲酸和山梨酸的方法，用于快速檢測苯甲酸和山梨酸在調味醬中的含量。

材料與方法

材料與試劑。苯甲酸標準品、山梨酸標準品：純度99%；甲醇（色譜純）；乙酸銨（色譜純）；超純水；10%亞鐵氰化鉀；22%乙酸鋅。

儀器與設備。超高效液相色譜儀：Waters UPLC ：配有紫外檢測器；渦旋振蕩器；高速冷凍離心機。

標準工作曲線配制。準確稱取0.1g（精確至0.0001g）苯甲酸和山梨酸標準品于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配成1.0mg/mL的標準儲備液。

分別移取濃度為1.0mg/mL的苯甲酸和山梨酸標準儲備液0.20mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL，至100mL容量瓶中，用水稀釋成濃度分別為2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的混合標準工作溶液。

樣品處理。稱取5g（精確至0.01 g）調味醬樣品，于50mL容量瓶中，加入20mL-30mL純水混勻，加入10%亞鐵氰化鉀、22%乙酸鋅各10.0mL，加水至刻度混勻，靜置30min后用濾紙過濾，取濾液過0.45μm濾膜，待測。

色譜條件。色譜柱：ACOUITY UPLCTM BEH C18柱（1.7μm，2.2mm×50mm）；二極管陣列檢測器；檢測波長：230nm；流動相：A為甲醇，B為0.02mol/L乙酸銨；流速：0.35mL/min；柱溫：30℃；進樣體積：1.0μL。

結果與分析

樣品處理方法。調味醬中基質復雜，且含蛋白質較多，本實驗分別采用國家標準中規定的方法和文獻中報道的方法進行對比。

方法一：樣品稀釋后，加入10%亞鐵氰化鉀和22%乙酸鋅定容混勻后，沉淀樣品中的蛋白質，靜置30min后用濾紙過濾，取濾液過0.45μm濾膜，進樣。

方法二，樣品采用甲醇提取，離心取上清，過固相萃取柱，甲醇洗脫后，過0.45μm濾膜進樣。

實驗結果表明兩種前處理方法均能得到較好的提取和凈化效果，但是采用第一種方法，操作簡單且除蛋白比較徹底。

流動相初始比例與進樣量的確定。實驗比較了初始甲醇比例分別為1-10%時對分離效果的影響，發現當甲醇比例較低時，2個峰都能分開，但甲醇比例越低出峰時間越慢；而甲醇比例逐漸增加至10%時，隨著比例的升高，苯甲酸和山梨酸的峰分離度變差且色譜峰響應值降低，綜合考慮選擇流動相中甲醇的初始比例為5%。實驗比較了進樣量分別為1、2、4、6、8、10μL時對分離效果的影響，發現當進樣量為1μL，苯甲酸和山梨酸的分離效果很好，峰形好看；而到10μL時，苯甲酸和山梨酸的峰則分離不明顯，因此選擇進樣量為1μL。

檢測波長的確定。通過二極管陣列檢測器在220-300nm之間對各組分的標準溶液進行全掃描，發現苯甲酸的最大吸收波長為225.6nm，山梨酸為243.2nm，在230-240nm之間都能檢測出2種防腐劑的峰；而在230 nm處，2種防腐劑的吸收峰都比較明顯，因此選擇230 nm作為檢測波長。

方法線性范圍和檢出限的確定。配制質量濃度為2.0-50μg/mL的苯甲酸和山梨酸混合標準溶液。繪制標準曲線，其線性回歸方程分別為y = 11740x + 3779和y = 1867x - 394.58，相關系數分別為0.9994和0.9999，以S/N=3作為檢出限，則苯甲酸和山梨酸的檢出限分別為6mg /kg和7.8mg /kg。

樣品測定。采用本方法測定市場上隨機抽取的10批次調味醬樣品測定，測定結果表明：調味醬中主要含有苯甲酸，含量為0.56-0.78g/L，均低于國標標準1.0g/L。

通過實際樣品的測定，本地區所檢測調味醬中的苯甲酸和山梨酸含量均符合國家標準要求，但是不能說明其他部分企業生產的產品也滿足國家標準要求，我國調味醬市場龐大，建議食品安全相關部門還需加強監管，確保食品質量安全。