分析HPLC—MS/MS法快速檢測中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學成分

目的：通過HPLC-MS/MS法快速檢測中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學成分。方法：將藥品與甲醇混合制備成混合標準溶液與供試品，在工作條件下采用ESI電離源和MRM掃描方式進行測定分析。結果：HPLC-MS/MS法可準確檢測中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學成分，檢測限為（0.1-1.0）ng。結論：HPLC-MS/MS法靈敏度高、操作簡便、快速，具有良好的適用性和有效性。

近年來，在具有減肥功效的中成藥物和保健品中發(fā)現(xiàn)非法添加化學成分的報道屢見不鮮。常見的添加成分有鹽酸西布曲明、鹽酸麻黃堿、鹽酸芬氟拉明、呋塞米、酚酞、咖啡因。這些藥物長期服用會對消費者的健康和生命造成威脅。因此，探索科學合理的檢測方法是十分必要的。本文建立HPLC-MS/MS法對中成藥及保健食品中這6種減肥類非法添加化學成分，取得良好的成果，現(xiàn)報道如下。

儀器與方法

儀器與試藥。研究采用的儀器包括美國Aglient 1200-G6410B三重四極桿液質聯(lián)用儀與ESI電離源。采用的藥品均購自中國藥品生物制品檢定所，包括鹽酸西布曲明、鹽酸麻黃堿、鹽酸芬氟拉明、呋塞米、酚酞、咖啡因。研究中所用水為超純水、流動相中所用甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。霧化氣和干燥氣為高純氮氣。流動相分別為甲酸鈉-甲醇、甲酸-甲醇、甲酸-乙腈溶液、乙酸鈉-甲醇、甲酸銨-乙腈溶液、乙酸鈉-乙腈溶液、乙酸-甲醇、乙酸-乙腈。其中銨溶液濃度為（5-20）mmol/L，酸溶液濃度為（0.1-0.5）%。

方法。（1）工作條件：研究對呋塞米采取負離子模式監(jiān)測，對其余5種對照藥品均采用正離子模式監(jiān)測，色譜柱溫為30℃、進樣量為10uL、流速為0.5ml/min、毛細管電壓為4.0kV、霧化氣壓力為20psi、干燥氣溫為350℃、干燥氣流量為12L/min。采取最高相對離子豐度的子離子作為檢測離子，采取MRM（多反應監(jiān)測）模式，范圍為50-400。（2）制備實驗溶液。①混合標準溶液，將6種對照藥品分別取適量，與甲醇溶液進行溶解和稀釋，制成10ug/ml的混合溶液。②供試品溶液：片劑、丸劑。細致研磨粉碎，取一次服用量。膠囊劑。去其內容物，研細，稱取1次口服劑量。口服液。量取1次口服劑量。軟膠囊。稱取軟膠囊總重，采用注射器抽出內容為置于50ml量瓶。將藥品加入30ml甲醇渦旋處理10min，超聲提取10min，冷卻，以甲醇定容至刻度后搖勻，再將其以0.22um有機濾膜過濾，待用。

測定。取供試品，對照品溶液，以1.2.1所述工作條件進行測定分析，確保色譜峰的保留時間、特征碎片離子與混合對照品一致，對供試品溶液進行過多次反映離子監(jiān)測掃描。計算對照品和樣品的相對離子豐度比（在允許偏差范圍內），則可判定供試品中是否含有非法添加化學成分。

結果分析

相對離子豐度最大容許誤差。相對離子豐度≤10%，最大允許偏差為（±50）%。 相對離子豐度>（10-20）%，最大允許偏差為（±30）%。 相對離子豐度>（20-50）%，最大允許偏差為（±25）%。 相對離子豐度>50%，最大允許偏差為（±20）%。

對照片、樣品離子流圖。筆者對市面上流通的42批減肥類中成藥及保健食品進行，其中有11批檢出非法添加化學成分，添加種類多為咖啡因、酚酞、鹽酸西布曲明，對照品離子流圖如圖1、樣品離子流圖如圖2。

檢測限。研究采取甲醇溶液將對照品進行逐步稀釋，以工作條件進行測定，當S：N（信噪比）為3：1時，化學成分檢出限均<1.5ng。

討論

中成藥及保健食品市場產品質量參差不齊，監(jiān)督難度較大，不法分子受利益驅使添加化學成分。這些成分主要通過刺激腸壁、降低食欲、興奮中樞神經、刺激新陳代謝的途徑達到快速減肥的目的，長期服用會對消費者的生命健康造成極大的威脅。

現(xiàn)行的檢測體系（多為多個流動相體系檢測法）存在諸多缺陷，方法繁瑣、分離度差、耗時長。研究構建的HPLC-MS/MS法的原理為計算定性離子與定量離子豐度比，進而來確認樣品的陽性結果。采取HPLC-MS/MS法能夠有效的避免日常檢驗中出現(xiàn)假陽性的判定結果，節(jié)省了檢驗時間，提高了檢驗的精準度。筆者首先嘗試將流動相比例進行調整，結果發(fā)現(xiàn)對1ml/L的甲酸-甲醇溶液進行梯度洗脫能夠在較短時間內分離，提高分離度（≥1.5）。這一比率能夠明顯改善其他體系運行過程中出現(xiàn)的管道易堵塞、基線噪音較大、柱壓較高、峰重疊等問題。其次，考慮到現(xiàn)行文獻中對LC-MS/MS法的測定標準中未討論到相對豐度比。筆者對HPLC-MS/MS法補充如下，對于同等實驗條件下，樣品液與標準液中待測物質的色譜峰相對保留時間≤2.5%，扣除背景色譜，目標物離子與對照品的相對離子豐度在表1的誤差允許范圍內（對均出線），則可判定樣品中存在目標物品。