不同藥劑處理對(duì)南方根結(jié)線蟲胚胎發(fā)育的影響及田間防效

丁曉帆　黃小篩　唐琦　周珊虹　兀旭輝

摘要：采用室內(nèi)浸漬法研究不同藥劑處理對(duì)南方根結(jié)線蟲胚胎發(fā)育的影響，并在田問測(cè)定了3種藥劑與有機(jī)肥配施對(duì)根結(jié)線蟲的防治效果。結(jié)果表明：供試藥劑均對(duì)線蟲卵胚胎發(fā)育起抑制作用，多數(shù)胚胎停在原腸期和1齡幼期階段，其中9.00 mg/L 1.8%阿維菌素乳油，16.00、32.00 mg/L 3.2%甲維鹽·氯氰微乳劑的死亡卵比例分別高達(dá)48.49%、49.97%、54.23%，均顯著高于滅菌水對(duì)照；不同藥劑與有機(jī)肥配施對(duì)白菜根圍土壤中的侵染性根結(jié)線蟲幼蟲均有較好的防控效果，藥后18 d，10.5%阿維·噻唑磷顆粒劑速效性最好，線蟲減退率為46.76%，防效達(dá)49.36%；藥后35 d，3.2%甲維鹽·氯氰微乳劑持效性最好，線蟲減退率為85.42%，防效達(dá)90.36%。

關(guān)鍵詞：藥劑；根結(jié)線蟲；胚胎發(fā)育；防治效果

中圖分類號(hào)：S433.89 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002—1302（2016）01—0146—02

海南島地處熱帶，可為發(fā)展反季節(jié)農(nóng)業(yè)提供良好的環(huán)境與氣候條件，因此反季節(jié)蔬菜已經(jīng)成為海南省熱帶高效農(nóng)業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)。根結(jié)線蟲（Meloidogyne spp.）是一類植物土傳病原物，據(jù)調(diào)查，海南島大部分地區(qū)瓜菜根結(jié)線蟲病株發(fā)病率在50%以上，以南方根結(jié)線蟲（M.incognita）為優(yōu)勢(shì)種群。大棚蔬菜由于其特殊的栽培環(huán)境，蔬菜生長(zhǎng)周期短，土地復(fù)種指數(shù)高，根結(jié)線蟲主要以卵、卵囊和幼蟲在土壤中持續(xù)危害，線蟲無(wú)明顯越冬越夏現(xiàn)象，蟲口密度大，最終造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。基于蔬菜對(duì)農(nóng)藥殘留的特殊要求，適用于線蟲防治的藥劑較少，目前登記用于蔬菜根結(jié)線蟲病防治的藥劑僅十幾種，國(guó)家明令禁止高毒農(nóng)藥用于蔬菜線蟲病防治。為了篩選高效、低毒、低殘留且對(duì)蔬菜安全的殺線蟲劑和施用方法，筆者以南方根結(jié)線蟲為靶標(biāo)，測(cè)定不同藥劑處理對(duì)線蟲卵胚胎發(fā)育的抑制效果，并通過(guò)田間試驗(yàn)比較了不同藥劑與有機(jī)肥配施對(duì)根結(jié)線蟲的防治效果。

1材料與方法

1.1供試材料

1.1.1供試農(nóng)藥及肥料 主要農(nóng)藥有：（1）1.8%阿維菌素乳油，江蘇豐源生物工程有限公司產(chǎn)品；（2）3.2%甲維鹽·氯氰微乳劑（甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽含量0.2%、氯氰菊酯含量3%），上海滬聯(lián)生物藥業(yè)（夏邑）股份有限公司產(chǎn)品；（3）10.5%阿維·噻唑磷顆粒劑（阿維菌素含量0.5%、噻唑磷含量10%），北京燕化永樂農(nóng)藥有限公司產(chǎn)品。供試肥料：雙春牌有機(jī)肥料粉劑[總養(yǎng)分含量（N+P₂O₅+K₂O）≥5%，有機(jī)質(zhì)含量≥45%]，澄邁恒富肥業(yè)科技有限公司產(chǎn)品。

1.1.2試驗(yàn)材料 試驗(yàn)材料為南方根結(jié)線蟲，由海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院線蟲實(shí)驗(yàn)室采用番茄苗培養(yǎng)擴(kuò)繁獲得。供試植物為大白菜（Brassica campestris）（早皇京白皮球大白菜），由汕頭市金韓種業(yè)有限公司提供。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1不同藥劑處理對(duì)南方根結(jié)線蟲胚胎發(fā)育的影響 將番茄根結(jié)線蟲病根洗凈后挑取卵囊，用0.5%次氯酸鈉溶液振蕩消毒15 min，過(guò)325、500目篩，用滅菌水沖洗直至沒有次氯酸鈉氣味。回收500目篩上的卵懸液，用移液器吸取10粒單胞卵到單凹玻片上，分別加入不同稀釋濃度的藥劑各100μL，其中1.8%阿維菌素乳油為9.00（2000倍液）、6.00 mg/L（3000倍液），3.2%甲維鹽·氯氰微乳劑為32.00（1 000倍液）、16.00（2000倍液）、10.67 mg/L（3 000倍液）。每個(gè)處理設(shè)6次重復(fù)，以滅菌水作為空白對(duì)照（cKn），將單凹玻片置于保濕的培養(yǎng)皿中，于25℃培養(yǎng)；48 h后將藥液除去，置換成滅菌水后繼續(xù)保濕培養(yǎng)；6 d后于解剖鏡下觀察記錄胚胎各個(gè)發(fā)育階段的卵數(shù)，并按Duncans新復(fù)極差法測(cè)驗(yàn)各處理的差異顯著性。

1.2.2不同藥劑與有機(jī)肥配施防治大白菜根結(jié)線蟲病的田間小區(qū)試驗(yàn) （1）試驗(yàn)地點(diǎn)：試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在海南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)展示示范園區(qū)，立柱蔬菜大棚，試驗(yàn)田平坦，根結(jié)線蟲病普遍發(fā)生。（2）試驗(yàn)方法。本試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)處理，4次重復(fù)，共20個(gè)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列，小區(qū)面積10m²（1.2 m×8.0 m），小區(qū)間以排水溝作為隔離保護(hù)行。有機(jī)肥作基肥的處理在整地時(shí)撒入拌勻，使用量0.6 kg/m²。施藥后2 d撒播大白菜種子，除受控因子外，田間管理按當(dāng)?shù)亓?xí)慣進(jìn)行，各小區(qū)其他管理一致。具體處理如下：T1處理：有機(jī)肥作基肥，耙平后用10 mL 1.8%阿維菌素乳油稀釋2 000倍（9 mg/L）均勻澆灑土壤；T₂：有機(jī)肥作基肥，耙平后用10 mL 3.2%甲維鹽·氯氰微乳劑稀釋2 000倍（16 mg/L）均勻澆灑土壤；T₃：有機(jī)肥作基肥，用10 g 10.5%阿維·噻唑磷顆粒劑拌毒土，與有機(jī)肥一起在整地時(shí)撒入拌勻；T4：6 kg有機(jī)肥作基肥，整地時(shí)撒入拌均勻；CK：整地時(shí)拌入6 kg細(xì)沙并澆水作為空白對(duì)照。（3）調(diào)查方法：分別在藥前、藥后18 d、藥后35 d采用5點(diǎn)取樣法取大白菜根圍（0～20cm深）土樣，每個(gè)小區(qū)土樣充分混勻后量取200 mL采用淺盤法分離線蟲，在體視解剖鏡下統(tǒng)計(jì)侵染性線蟲數(shù)量，并用以下公式計(jì)算線蟲減退率和防治效果。

式中：CK為空白對(duì)照區(qū)線蟲減退率，%；PT為藥劑處理區(qū)線蟲減退率，%。

2結(jié)果與分析

2.1不同藥劑處理對(duì)南方根結(jié)線蟲胚胎發(fā)育的影響

圖1中Ⅰ至Ⅴ為南方根結(jié)線蟲胚胎正常發(fā)育各個(gè)階段的卵，Ⅵ、Ⅶ為停止發(fā)育的死亡卵，可以看出正常發(fā)育的卵內(nèi)含物清晰可辨，而死亡卵內(nèi)含物模糊，細(xì)胞處于離析降解狀態(tài)。結(jié)合圖1、表1分析可知，隨著藥劑濃度的增高，死亡卵的比例呈正相關(guān)增加，9.00 mg/L 1.8%阿維菌素乳油，16.00、32.00 mg/L 3.2%甲維鹽·氯氰微乳劑處理組的死亡卵比例分別高達(dá)48.49%、49.97%、54.23%，差異不顯著，但與滅菌水對(duì)照相比均差異顯著；各處理組卵胚胎發(fā)育多數(shù)停止在原腸期、1齡幼期階段，正常孵化的2齡幼蟲比例均為0，而滅菌水對(duì)照中2齡幼蟲期所占比例高達(dá)59.60%，且在6 d后鏡檢時(shí)原腸期前卵態(tài)已極少，僅見1.85%的多胞期卵。

2.2不同藥劑對(duì)大白菜根結(jié)線蟲病的防治效果

表2結(jié)果表明：不同藥劑與有機(jī)肥配施對(duì)大白菜根圍土壤中的侵染性根結(jié)線蟲幼蟲均有較好的防控效果。藥后18 d，阿維·噻唑磷處理組線蟲減退率為46.76%，防效較其他2個(gè)藥劑稍高，達(dá)49.36%，說(shuō)明阿維·噻唑磷的速效性較阿維菌素和甲維鹽·氯氰好；藥后35 d，空白對(duì)照組線蟲數(shù)增多，達(dá)2 471.25條/L，而3個(gè)藥劑處理組線蟲數(shù)明顯下降，線蟲減退率均超過(guò)70%，甲維鹽·氯氰防效最高，達(dá)90.36%，說(shuō)明3個(gè)藥劑中甲維鹽·氯氰的持效性最好；同時(shí)，有機(jī)肥處理組對(duì)線蟲影響不大，藥后18、35 d線蟲減退率分別僅為9.28%、6.21%。

3結(jié)論與討論

卵胚胎發(fā)育試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著不同藥劑處理濃度的增高，根結(jié)線蟲停止發(fā)育的死亡卵比例呈正相關(guān)增加，盡管發(fā)育到原腸期或1齡幼期的卵也不能正常孵化成2齡幼蟲，處理濃度為9.00 mg/L的阿維菌素乳油與16.00、32.00 mg/L的甲維鹽·氯氰微乳劑對(duì)卵的致死率差異不顯著，即阿維菌素較低濃度的作用效果仍與較高濃度的甲維鹽·氯氰微乳劑相當(dāng)，說(shuō)明根結(jié)線蟲卵的胚胎發(fā)育對(duì)阿維菌素的敏感性較高。漆永紅等研究表明，10%噻唑磷、3%阿維菌素單劑分別對(duì)根結(jié)線蟲卵囊、卵表現(xiàn)出極強(qiáng)的抑制作用。田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，藥后18、35 d，藥劑對(duì)線蟲的減退率均超過(guò)40%、70%，防效均超過(guò)40%、80%，說(shuō)明藥劑對(duì)侵染性線蟲有直接的致死作用，同時(shí)影響線蟲卵、卵囊的發(fā)育與孵化，直接干擾線蟲的有效侵染。本研究中，有機(jī)肥的施用不僅起到增產(chǎn)作用，而且對(duì)植物寄生線蟲種群數(shù)量表現(xiàn)出一定的抑制作用，說(shuō)明有機(jī)肥能有效調(diào)控土壤環(huán)境、抑制侵染性線蟲的種群數(shù)量，但其在土壤中施用對(duì)線蟲病害的防控機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

綜合以上試驗(yàn)結(jié)果，生產(chǎn)中建議藥劑與有機(jī)肥配施，以提高土壤肥力、增強(qiáng)植株的抗病蟲能力，并注意藥劑輪換使用，防止病原線蟲產(chǎn)生抗藥性。對(duì)于葉菜類作物生長(zhǎng)周期比較短的蔬菜可在播種或定植前施用1次藥劑即可；生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)的茄科、豆科植物建議在藥后35 d以后，根據(jù)作物生理特點(diǎn)追施1～2次藥劑。