對阿爾茨海默病患者腦脊液和血漿中sTNFR1和sTNFR2的含量水平的分析研究

王維生，李桂芹，白 琳，李明偉，肖 靜，李真玉，馬志強(qiáng)，趙 敏

(山東壽光市人民醫(yī)院， 山東 濰坊 262700)

對阿爾茨海默病患者腦脊液和血漿中sTNFR1和sTNFR2的含量水平的分析研究

王維生，李桂芹，白 琳，李明偉，肖 靜，李真玉，馬志強(qiáng)，趙 敏

(山東壽光市人民醫(yī)院， 山東 濰坊 262700)

目的研究阿爾茨海默病患者腦脊液和血漿中sTNFR1和sTNFR2的含量水平變化。方法ELISA方法。結(jié)論在AD病人的腦脊液和血漿中，sTNFR1和sTNFR2的含量均明顯升高。這就提示了sTNFR可以作為阿爾茨海默病早期診斷的可靠客觀的生物標(biāo)記。

阿爾茨海默病；腫瘤壞死因子轉(zhuǎn)化酶；腦脊液；血漿

1 材料和方法

1.1 材料來源

血漿收集中，要求患者為空腹?fàn)顟B(tài)，靜脈抽取后由EDTA抗凝管保存，在此基礎(chǔ)上將戴柏酶抑制劑置于其中，離心后將上層血漿吸取，于-80℃環(huán)境下利用EP管保存，切忌出現(xiàn)反復(fù)凍融情況。此外，收集腦脊液后，要求混勻并在-80℃環(huán)境下保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

ELISA試劑盒：Human sTNFR1 Immunoassay；Human sTNFR1 Immunoassay；Human sTNFR2 Immunoassay；Human sTNFR2 Immunoassay，R＆D system公司產(chǎn)品。

TACE的酶底物：R＆D system公司產(chǎn)品。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

酶標(biāo)儀(SpectraMax M5)：美國Molecular Devices公司。

1.4 ELISA方法操作步驟

在96孔板內(nèi)置入稀釋液RD1-650 μL，分別將將抗對照組血漿、AD病人血漿、200 uL標(biāo)準(zhǔn)液加入，對于稀釋液然200 μL需在室溫下通過空白孔檢測，孵育時間2 h。

沖洗3次后，每孔加入200 μL的sTNFR偶聯(lián)物，室溫孵育2小時。

洗3次后，每孔加入200 μL的底物，室溫避光孵育20分鐘。

每孔加入50 μL終止液，輕輕混勻。

酶標(biāo)儀450 nm波長處測吸光度(OD)值，減去空白孔OD值，即為測試樣品OD值。

2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±S.E.M.)表示。應(yīng)用SPSS11.5軟件統(tǒng)計(jì)。對比健康對照組、AD病人腦脊液以及血漿結(jié)果，以t檢驗(yàn)，P＜0.05表示結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 AD病人腦脊液和血漿中sTNFR1的含量增高

AD病人腦脊液中的sTNFR1的含量為930.9±297.3pg/ ml明顯高于健康對照組(HC)(705.0±343.8 pg/mL)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；血漿中sTNFR1比較，AD病人286.3± 137.3 pg/mL高于HC組204.0±104.2 pg/mL，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(圖1)。

3.2 AD病人腦脊液和血漿中sTNFR2的含量增高

AD病人腦脊液中sTNFR2的含量為832.1±306.3 pg/ mL，健康對照組腦脊液中sTNFR2的含量為409.6±157.2 pg/mL，兩者相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；AD病人血漿中sTNFR2的含量為390.3±90.3 pg/mL，健康對照組血漿中sTNFR2的含量為228.2±61.8 pg/mL，兩者相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(圖2)(表1，表2)。

圖1 AD病人和健康對照組腦脊液和血漿中sTNFR1的含量

圖2 AD病人和健康對照組腦脊液和血漿中sTNFR2的含量

4 討論

作為神經(jīng)退行性疾病之一，AD在臨床癥狀上多以記憶功能惡化、認(rèn)知功能減退、日常生活能力差等為主，且部分患者有行為障礙、神經(jīng)精神癥狀表現(xiàn)。從發(fā)病機(jī)制上看，其仍是研究的重點(diǎn)，如部分研究中可發(fā)現(xiàn)，AD發(fā)病中鉛中毒假說、Aβ異常沉積、炎癥學(xué)說等都可能參與其中，尤其在炎癥學(xué)說方面表現(xiàn)更加明顯。一般在炎性途徑下，很可能出現(xiàn)ADAβ異常沉積情況，其是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的組要原因。此外，當(dāng)前老年疾病中，老年性癡呆也逐漸成為嚴(yán)重威脅健康的疾病，需要做到及早發(fā)現(xiàn)、及早治療，有助于病情的控制。

研究發(fā)現(xiàn)，在ELISA實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)用下，觀察到血漿和腦脊液中sTNFR1和sTNFR2的含量是明顯升高的，這就提示了sTNFR可以作為老年癡呆早期診斷的可靠客觀的生物標(biāo)記。

[1] Iqbal K，Grundke-Iqbal I，Zaidi T，Ali N，Wisniewski HM.Are Alzheimer neurofibrillary tangles insoluble polymers?Life Sci，1986，38：1695-1700.

[2] Gandy S.The role of cerebral amyloid beta accumulation in common forms of Alzheimer disease.J Clin Invest，2005，115：1121-1129.

本文編輯：羅 蘭

R453

B

ISSN.2095-8242.2017.12.2339.01