紅顏草莓莖尖組培快繁技術研究

張黎鳳++錢雯婕++魏紅英++滕大芳

摘要 以紅顏草莓為試材，對草莓匍匐莖莖尖進行組培脫毒壯苗快繁技術與應用研究。結果表明：適宜紅顏草莓誘導分化增殖培養基配方以 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L最好；繼代增殖培養基配方以MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L較適宜；誘導生根培養基配方以1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L較理想，最佳移栽基質為營養土∶珍珠巖∶蛭石=1∶1∶1，移植成活率可達95%以上。

關鍵詞 草莓；莖尖；組織培養；快繁

中圖分類號 S668.4 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）07-0071-01

草莓是薔薇科，草莓屬，多年生草本植物，屬于當今世界七大水果之一，在我國栽培面積僅次于葡萄。草莓品種過去主要用傳統匍匐莖分株繁殖，繁殖速度慢，親本的優良性狀無法保持，植株容易積累多種疾病，導致種苗退化，草莓品質下降[1-2]。采用草莓組培脫毒進行無性繁殖，可以大量生產優質的無毒苗，提高草莓的品質。因此，組織培養作為植物優良品種大量繁殖的最有效方式。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試草莓品種為紅顏，選取生長健壯、無病的植株，在新長的匍匐莖頂端剪去5 cm左右作試驗材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體處理。采集健壯的草莓匍匐莖尖，將匍匐莖用水沖洗莖尖，再把莖尖放入3%雙氧水消毒瓶中消毒10 min，倒出雙氧水，再用無菌水沖洗3遍，然后轉放到超凈工作臺上進行滅菌處理。具體滅菌流程：先用75%酒精消毒10 s，倒出酒精，用無菌水沖洗3次，然后加入0.1%升汞消毒8 min，最后用無菌水沖洗4～5次。在顯微鏡下用解剖刀剝去幼葉，切取0.5～1.0 mm的莖尖接種到培養基上。培養室溫度為22～26 ℃，光照強度為1 500～2 000 lx，光照12 h/d[3]。

1.2.2 培養基選擇。試驗以MS為基本培養基，其中附加奈乙酸（NAA）、6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）。葡萄糖30 g/L，瓊脂6 g/L。誘導培養基：MS培養基+6-BA（0.2、0.5、1.0 mg/L）+NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L）；繼代培養基：MS培養基+6-BA（0.5、1.0、1.5 mg/L）+IAA（0.1、0.3、0.5 mg/L）；生根培養基：MS培養基+IBA（0.5、1.0、1.5 mg/L）或NAA（0.5、1.0、1.5 mg/L）。培養基pH值為5.8。使用前需要高壓滅菌，在101.325 kPa下，高壓滅菌20 min。

2 結果與分析

2.1 不同激素水平對草莓誘導的影響

外植體經過2周左右的培養后，可慢慢分化出叢生芽。由表1可知，4號和5號培養基的萌發數最高，4號培養基的褐化數最少。隨著NAA的比例增大，褐化數也逐漸增多，6-BA和NAA有一定的比例，才能促使芽增長。因此，最佳誘導培養基為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

2.2 不同激素水平對草莓繼代培養的影響

經過初代培養后產生小芽叢苗，在超凈工作臺上用鑷子、剪刀、培養皿，分隔成3～4株在一起的小芽叢，再將誘導分化出的叢生芽接種于不同激素配比的繼代增殖培養基中進行培養，每瓶3～4株芽叢。由表2可知，當IAA濃度為0.1 mg/L時，增殖芽數最多，且隨IAA濃度的增加增殖芽數減少，增殖芽數最多的是4號培養基。因此，草莓最佳繼代培養基為MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L[4-5]。

2.3 不同草莓組培苗生根培養基對草莓生根的影響

將生長良好的無根草莓苗接種于生根培養基30 d后，由表3可知，培養基中加入一定比例的生長激素可以促進生根。當1/2MS培養基上添加IBA和NAA可以增加平均根數，當IBA濃度為1.0 mg/L時，生根率為90%，平均根長為5 cm；當NAA濃度為0.1 mg/L時，生根率為95%，平均根長為6 cm。因此，草莓最佳生根培養基為1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L。

2.4 試管苗的移栽

當試管苗長有5～6條根時，可慢慢開瓶煉苗，使試管苗逐漸適應移栽環境。經過1周左右的時間煉苗，從瓶中取出試管苗，沖洗掉瓊脂，用多菌靈浸泡后移栽到營養土∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1的基質中，并且蓋上塑料薄膜來維持濕度。每周可噴灑營養液1次[6]。移栽結束后，幼苗所生長的環境需要保持高濕度，濕度應在85%～95%之間，且移植后的環境溫度應稍高于移植前幼苗生長的環境溫度。白天可控制在25～26 ℃，夜間不低于14～18 ℃。

3 結論與討論

該試驗結果表明，紅顏草莓誘導分化增殖最適宜培養基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，繼代增殖最適宜培養基是MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L，最佳生根培養基是1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L。營養土∶珍珠巖∶蛭石=1∶1∶1的基質適宜進行馴化煉苗[7-8]。本試驗發現的不同激素種類和配比，直接影響紅顏草莓生根的發生，能較好地誘導出愈傷組織，這將為紅顏草莓的快速繁殖、規?；a提供技術支持。

4 參考文獻

[1] 張志宏，肖敏，楊洪一，等.草莓病毒病脫除方法的比較與評價[J].果樹學報，2006，23（5）：720-723.

[2] 何歡樂，陽靜，蔡潤，等.草莓莖尖培養脫毒效果研究[J].北方園藝，2005（5）：79-81.

[3] 劉健，劉向蕾，胡繁榮，等.草莓熱處理結合莖尖培養脫毒效果研究[J].浙江農業科學，2009（6）：1088-1090.

[4] 陳德海，潘文蘭，楊濤，等.草莓組織培養細胞發育過程德電鏡觀察[J].廈門大學學報（自然科學版），1999，36（6）：918-920.

[5] 王常蕓，李曉亮，王建玲，等.草莓脫毒技術與開發應用[J].山東農業科學，2007（4）：118-120.

[6] 胡淑明，張學英，李青云，等.草莓脫毒技術研究進展[J].河北果樹，2007（4）：1-2.

[7] 張志恒，王強.草莓安全生產技術手冊[M].北京：中國農業出版社，2008.

[8] 陳愛萍，葉祖云，繆雄平.草莓莖尖組織培養研究[J].中國南方果樹，2002，31（2）：42-43.