火祭離體快繁技術研究

陶佩琳++沈蘇婷++董帆

摘要 火祭作為多肉市場上一種常見的觀葉植物，觀賞價值高，需求量大。本研究以火祭嫩葉為外植體，進行組織培養與快速繁殖研究。結果表明：誘導葉片愈傷組織的最適培養基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，愈傷誘導率達85.0%；最佳分化增殖培養基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，增殖系數為8.8；最佳生根培養基為1/2MS+NAA 0.2 mg/L+1.5 g/L活性炭，生根率為86.7%。

關鍵詞 多肉植物；火祭；離體快繁

中圖分類號 S682.33 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）07-0155-02

火祭又名秋火蓮，為景天科青鎖龍屬多年生匍匐肉質草本，植株叢生，莖四棱棒狀；具淺綠色橢圓形葉，交互對生，緊密排列呈蓮座狀。在光照充足的條件下，其莖、葉緣及葉的大部分轉為紅色，特別是在晚秋至初春的冷涼季節，葉色更鮮艷，給人以蓬勃向上的熱情活力之感，具有較高的觀賞價值。火祭常以單株或組合盆栽的形式，被廣泛應用于室內外環境裝飾[1]。

目前，繁殖火祭以扦插為主，也可播種、分株繁殖，但都不能在短期內提供大量種苗，滿足市場需要。本試驗以較高的增殖系數和較短的生產周期作為主要考量因素，利用火祭嫩葉作為外植體，對其離體快繁技術進行了研究，以期為實現其工廠化育苗提供技術支持，也為其他多肉植物的組培生產提供參考。

1 材料與方法

1.1 外植體選擇及消毒

選擇生長健壯、無病蟲害的火祭植株，取其嫩葉作為外植體。用洗衣粉水振蕩清洗干凈后，再用流水沖洗20 min，除去表面污物，之后轉移至超凈工作臺上進行表面消毒。先用75%酒精浸泡30 s，再用加有吐溫的無菌水沖洗1次；之后用0.1%升汞消毒5～6 min，用無菌水沖洗5～7遍。消毒及沖洗過程中要不斷搖動，使藥劑與材料充分接觸，消毒徹底。將消毒后的材料置于無菌濾紙上，備用。

1.2 愈傷組織誘導

將嫩葉切成1 cm見方的小塊，接種于含不同濃度6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）和 NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L）組合的MS培養基上，進行愈傷組織誘導。9個培養基組合分別為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A1）、MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A2）、MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A3）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A4）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A5）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A6）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A7）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A8）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A9），MS培養基中添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，pH值5.8。每種培養基30個重復，每瓶接種2個外植體。接種后先暗培養3～5 d，之后再每日以日光燈輔助光照12 h，光照強度2 000 lx，溫度（25±1）℃。觀察并統計各外植體愈傷組織誘導情況[2-3]。

1.3 分化增殖培養

選取生長狀態良好且狀態一致的愈傷組織，切成1 cm見方的小塊，接種至含不同濃度6-BA（1.0、2.0 mg/L）和 NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L）組合的MS培養基上，進行分化增殖培養。培養基組合分別為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A4）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A5）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A6）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A7）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A8）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A9）。培養條件為溫度（25±1）℃，光照時間12～14 h，光照強度1 500～2 000 lx。不定芽形成后，每45 d繼代1次[4-5]。

1.4 生根培養

將不定芽切成單芽苗，接種至生根培養基上進行培養。生根培養以MS及1/2MS作為基本培養基，分別附加不同濃度的NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L），并附加1.5 g/L活性炭，研究其對火祭生根情況的影響。培養30 d后統計試管苗的生根情況[6]。

2 結果與分析

2.1 愈傷組織的誘導

接種約10 d左右，可見葉片切口處開始膨大，邊緣向上卷曲拱起；20 d左右，葉片表面出現皺褶，邊緣產生淡綠色半透明的愈傷組織塊。由表1可知，除處理A3外，其他所有培養基上均可形成愈傷組織，但愈傷誘導率及褐化率存在差異。其中，處理A4愈傷誘導率最高，達85.0%；處理A7次之，誘導率為71.7%。在低濃度6-BA和高濃度NAA組合中，即處理A3、A6細胞分裂素及生長素濃度比較接近，不適合愈傷組織的誘導，且褐化率較高。其中，處理A3的褐化率高達100.0%。

2.2 分化增殖培養

在愈傷誘導培養基中，隨著培養時間的增長，部分愈傷組織上可見2～3 mm的綠色芽點。將其切割再轉入分化增殖培養基培養約30 d時，小芽點長成大量叢生芽，并逐漸分化出新葉和嫩莖。由表2可知，6-BA濃度為2.0 mg/L時（處理A7、A8、A9），叢生芽的增殖系數總體較高，可見不定芽的分化與增殖效率與 6-BA的濃度呈正相關。其中，處理A7增殖系數最大，為 8.8，且形成的叢生芽葉色濃綠，葉大芽多，確定為最佳增殖培養基。另外，在處理A8、A9有玻璃化試管苗的產生，這可能是高的6-BA濃度及細胞分裂素與生長素比例失調的結果。

2.3 生根培養

待增殖的叢生苗長至3～4 cm高時，將其轉入生根培養基中進行生根培養。培養30 d可見，供試培養基中均有根的發生。由表3可知，1/2MS培養基對根系發生的效果要明顯優于MS培養基，這與前人的研究結果一致[2]。生根率尤以1/2MS+NAA 0.2 mg/L+1.5 g/L活性炭培養基最佳，為86.7%，且根系較長、粗壯，狀態良好。

2.4 移栽與管理

生根的試管苗經過3～5 d的煉苗后，洗凈根部培養基，用多菌靈1 000倍液浸泡30 s，移栽至溫室大棚。移栽基質為珍珠巖∶草炭土=1∶3。試管苗移栽后，用清水澆透，溫度控制在20 ℃以上，相對濕度85%～95%。移栽30 d后成活率可達到80%以上。

3 討論與結論

多肉植物以其美觀獨特的外形、肥厚多汁的莖葉以及簡單粗放的管理方式，已逐漸在園藝花卉產業中占有一席之地。本研究旨在利用其優勢器官——肉質化葉片作外植體，通過不同濃度的細胞分裂素與生長素配比對其進行愈傷組織的誘導和再生植株的研究，以獲得優化的組培再生體系。

試驗結果表明，對于肉質葉片的消毒，在75%酒精和0.1%升汞處理之間，加用含吐溫的無菌水沖洗1次，對于減少消毒液的殘留和褐化發生率都比較有效。愈傷誘導最適培養基為MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L，誘導率達 85.0%，且褐化率最低。分化增殖誘導試驗結果顯示，6-BA的濃度對不定芽的分化與增殖效率起到關鍵作用，6-BA與NAA的比例失調可能會導致玻璃化的發生。最終確定MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L為最佳分化增殖培養基，增殖系數達8.8。最佳生根培養基為1/2MS+NAA 0.2 mg/L+1.5 g/L活性炭。生根試驗結果表明，1/2MS對根系發生的效果明顯優于MS培養基，這可能是因為低的鹽濃度有利于植物吸收營養而促進生根的結果。此外，不同濃度的NAA均可誘導出根的分化，而且在不定芽分化與增殖過程中也觀察到有根的發生。這表明，火祭與其他幾種景天科多肉植物一樣，均為易生根植物[3]。這也為組培苗的生根與移栽工作奠定了一定的基礎。

4 參考文獻

[1] 兌寶峰.紅紅火火的火祭[J].養花門診，2007（12）：59.

[2] 姚瑞玲，王胤，吳幼眉，等.馬尾松組培生根關鍵因子分析[J].廣西植物，2016，36（11）：1288-1294.

[3] 張瑩，陶佩琳，高政平.三七景天離體快繁技術研究[J].北方園藝，2013（7）：134-136.

[4] 田松青，徐紅，儲海霞，等.絲蘭屬觀賞植物種質資源及其研究進展[J].中國園藝文摘，2015（8）：60-63.

[5] 周歡，謝磊，郭和蓉，等.百合科植物組織培養的研究進展[J].湖北農業科學，2010（5）：1232-1237.

[6] 王海平，李錫香，沈鏑，等.離體保存技術在無性繁殖蔬菜種質資源保存中的應用[J].植物遺傳資源學報，2010（1）：52-56.