培元膠囊對正常小鼠免疫功能的影響

汪光云 汪 寧 宣自華 楊 光 桂雙英 戴 敏 王 鍵

(安徽中醫藥大學新安醫學省部共建教育部重點實驗室 安徽省中醫藥科學院中藥藥效與安全性評價研究所,安徽 合肥 230031)

培元膠囊對正常小鼠免疫功能的影響

汪光云 汪 寧 宣自華 楊 光 桂雙英 戴 敏 王 鍵

(安徽中醫藥大學新安醫學省部共建教育部重點實驗室 安徽省中醫藥科學院中藥藥效與安全性評價研究所,安徽 合肥 230031)

目的 探討培元膠囊(PYC)對正常小鼠免疫功能的影響。方法 3批小鼠，每批60只，隨機分成空白對照組、陽性對照組、培元膠囊高、中、低劑量組(劑量分別為3.6、1.8、0.9 g生藥/kg)。給藥組連續灌胃培元膠囊15 d，空白對照組和陽性對照組分別以等量的生理鹽水和甘露聚糖肽代替。灌胃結束后，測定小鼠脾臟、胸腺指數，脾淋巴細胞轉化能力以及單核-巨噬細胞碳廓清指數。結果 培元膠囊各劑量組的正常小鼠的免疫器官臟器系數均顯著高于空白對照組；培元膠囊中、高劑量組小鼠脾淋巴細胞轉化能力顯著高于空白對照組；培元膠囊各劑量組小鼠的吞噬系數顯著高于空白組(P<0.05，P<0.01)。結論 培元膠囊能增強正常小鼠的免疫功能。

培元膠囊；免疫功能

培元膠囊保健方是在新安醫家汪機“固本培元”的理論指導下，在其再傳弟子孫一奎“壯元湯”的基礎上擬方，強調補氣、補陰、生血、補脾胃，從整體上激活機體的防御系統〔1～4〕。本文觀察培元膠囊對正常小鼠免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 培元膠囊：安徽省中醫院制劑室制備。昆明種清潔級小鼠，雌雄各半，常州卡文斯實驗動物有限公司〔SCXK(蘇)2011-0003號〕提供，甘露聚糖肽片：廣東宏遠集團藥業有限公司生產；刀豆球蛋白(Con)A Sigma公司；MTT、二甲基亞砜 Sigma分裝，武漢生命技術有限公司；PBS緩沖液：北京中杉金橋生物技術有限公司；胎牛血清(FBS)杭州四季青公司；Hanks液、RPMI1640 賽默飛世爾生物化學制品有限公司；Na2CO3宜興市展望化工試劑廠；印度墨汁：上海遠慕生物科技有限公司。

1.2 實驗儀器和設備 Multiskan spectrum型酶標儀、371型二氧化碳培養箱、Multifuge XLR型水平離心機(德國Thermo Scientific公司)；紫外可見光分光光度計(上海光譜儀器有限公司)；DMI4000型倒置顯微鏡(德國Leica公司)；Countstar IC1000型自動細胞計數儀(美國Inno-Alliance Biotech Inc公司)；FA2004型電子精密天平(上海精密科學儀器有限公司)；培養瓶、培養皿、96孔培養板(美國Corning公司)。

1.3 試驗方法 3批昆明種小鼠，每批60只(18～22 g)，隨機分為：空白對照組、陽性對照組、培元膠囊高、中、低劑量組(3.6、1.8、0.9 g生藥/kg)，每組12只。實驗組給小鼠灌胃不同劑量的培元膠囊,陽性對照組給予等量甘露聚糖肽溶液(3.9 mg/kg)，空白對照組給予等量生理鹽水。每天1次,連續15 d。末次給樣1 h以后進行各項免疫指標的測定〔5〕。

1.3.1 臟器/體重比值測定 末次給樣1 h以后,稱重并處死小鼠,無菌取出胸腺和脾臟,用濾紙吸干表面血污，在電子天平上稱重,計算臟器/體重比值〔6～8〕。

1.3.2 ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗 小鼠脫頸椎處死后無菌取脾,置于盛有適量無菌Hanks液的平皿中，輕輕將其磨碎，用4層紗布過濾，制成單細胞懸液。用 Hanks 液將細胞懸液洗滌2次，1 000 r/min離心10 min，然后將細胞懸浮于1 ml的完全培養液中，用臺酚蘭染色計數活細胞數，調整細胞濃度為3×106個/ml。將每只實驗小鼠的脾細胞懸液分兩孔加入24孔培養板中，每孔1 ml，其中一孔加75 μl ConA液，另一孔作為對照，置于5% CO2、37℃CO2孵箱中培養72 h。培養結束前4 h，每孔輕輕吸去上清液0.7 ml，加入0.7 ml不含小牛血清的 RPMI1640 培養液，同時加入 MTT(5 mg/ml)50 μl/孔，繼續培養4 h。培養結束后，每孔加入1 ml DMSO，吹打混勻，使紫色結晶完全溶解，最后將24孔中液體以每孔3個復孔分裝于96孔培養板中，用酶聯免疫檢測儀，于570 nm波長處，測定每孔吸光度。淋巴細胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值D(570 nm)減去不加ConA孔的光密度值D(570 nm)表示〔9〕。

1.3.3 小鼠碳廓清實驗 末次給樣后1 h經尾靜脈給小鼠注射用生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁,每10 g體重注射0.1 ml墨汁注入后立即計時,于注入后第2和第10分鐘分別從眼內眥靜脈叢取血20 μl,加入到2 ml 0.1%Na2CO3溶液、搖勻,以Na2CO3溶液作空白對照,用半自動生化儀測光密度值D(600 nm)將小鼠處死,取肝和脾臟,稱重,計算吞噬指數〔10〕。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1 各組小鼠免疫器官臟器/體重比值比較 與空白對照組相比，培元膠囊各劑量組可顯著增加正常小鼠的脾臟及胸腺免疫器官的臟器系數(P<0.05，P<0.01)。見表1。

表1 各組小鼠免疫器官指數的比較

與空白對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；下表同

2.2 各組小鼠脾淋巴細胞轉化能力比較 與空白對照組相比，培元膠囊中、高劑量組可顯著增強ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化能力(P<0.05，P<0.01)。見表2。

2.3 各組小鼠單核-巨噬細胞碳廓清功能比較 與空白對照組相比,培元膠囊劑量為3.6、1.8 g/kg時，小鼠的吞噬系數有顯著差異(P<0.05，P<0.01)。見表2。

表2 各組小鼠脾淋巴細胞轉化能力、碳廓清功能比較

3 討 論

培元膠囊是在“固本培元”學說指導下，在孫一奎“壯元湯”的基礎上，通過文獻、臨床療效等調研、篩選確定處方組成，該方由人參、黃芪等中藥組成。孫一奎是我國明代著名醫學家，因善用參芪，歷代以來多以“溫補派”而備受推崇，他認為人參、黃芪不僅補氣，亦能補血，不僅補陰，還能補陽〔11〕，其“固本培元”的“本”側重于腎，通過推動腎間動氣，即激發人體生命的原動力，來抵御外邪，治療疾病。故孫一奎治療疾病多采用益氣藥與溫陽藥共用〔12〕。免疫系統是機體內擔負免疫功能的物質結構，由免疫器官、免疫細胞和免疫分子構成，它們是機體免疫應答的物質基礎〔13〕。胸腺是中樞免疫器官，脾臟是外周免疫器官，二者均是體內的主要免疫器官，與體液免疫和細胞免疫均的功能有密切關系〔14〕。通過檢測胸腺和脾臟等臟器系數的大小可反映機體免疫水平的高低，本文中培元膠囊各劑量組小鼠脾指數和胸腺指數均有顯著升高，作為重要的免疫器官，胸腺與脾臟的重量增加，提示免疫功能的增強〔15,16〕。小鼠的脾細胞主要為免疫細胞，免疫增強劑能誘導其發生增殖反應。MTT法則通過檢測細胞轉化而間接反映細胞增殖的程度，是機體重要的細胞免疫指標〔17,18〕。本文提示培元膠囊對小鼠的免疫細胞及免疫功能有直接的調節作用。巨噬細胞是免疫效應細胞，具有多種免疫功能，包括免疫防御，免疫監視，免疫調節及抗原呈遞等〔19〕，通過吞噬作用清除體內衰老損傷和凋亡細胞及免疫復合物和病原體等抗原性異物，因此單核吞噬細胞的吞噬能力是衡量機體非特異性免疫功能的標志之一，單核吞噬細胞清除的速率可反映其吞噬功能〔20,21〕。本文顯示培元膠囊的劑量為3.6、1.8 g/kg時，可顯著提高小鼠吞噬指數，說明培元膠囊可以增強正常小鼠非特異性免疫功能。

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〔2016-01-04修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

Effect of Peiyuan capsule on normal mice immunologic function

WANG Guang-Yun,WANG Ning,XUAN Zi-Hua,etal.

Key Laboratory of Xin′an Medicine, Ministry of Education, Hefei 230031, Anhui, China

Objective To observe the immunomodulatory activity of Peiyuan capsule(PYC) in normal mice.Methods The mice were divided into 5 groups: normal control, positive control, PYC high, middle and low dose (3.6, 1.8, 0.9 g/kg) groups.Mice in drug groups were administrated intragastrically with PYC for 15 days. Mice in normal and positive control groups were given equal amount of saline and mannatide. After that, mice were examined for the data of immune organs weights, lymphocyte transformation capability and mononuclear macrophage phagorytosis function. Results The spleen index and thymus index in PYC groups were significantly increased than those of normal control group (P<0.05,P<0.01).The lymphocyte transformation capability in middle and high dose PYC groups were significantly stronger than those of normal control group (P<0.01). High and middle dose of PYC could significantly increase the mononuclear macrophage phagorytosis function than that of normal control group (P<0.05,P<0.01).Conclusions PYC can improve the immune function of normal mice.

Peiyuan capsule(PYC);Immune function

十二五科技支撐計劃 (No.2012BAI26B03)

汪 寧(1970-)，男，教授，碩士生導師，主要從事中藥藥效學與功能性評價研究。

汪光云(1989-)，男，碩士，主要從事中藥藥理學研究。

R151.41

A

1005-9202(2017)09-2090-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.09.004