腎透明細胞癌中Rac1和WAVE2的表達及其相關性

關有良 臧東鈺 王 丹

(錦州醫科大學附屬第一醫院泌尿外科，遼寧 錦州 121001)

腎透明細胞癌中Rac1和WAVE2的表達及其相關性

關有良 臧東鈺1王 丹2

(錦州醫科大學附屬第一醫院泌尿外科，遼寧 錦州 121001)

目的 研究Rac1和WAVE2蛋白在腎透明細胞癌中的表達及其相關性。方法 采用免疫組織化學SP法對腎透明細胞癌標本Rac1和WAVE2的表達進行檢測。結果 腎癌組Rac1和WAVE2表達陽性率明顯高于癌旁組。且Rac1和WAVE2的表達水平與患者年齡、性別無明顯關聯，而與腫瘤轉移有關。Rac1和WAVE2在腎癌中的表達呈正相關。結論 腎癌中Rac1和WAVE2蛋白陽性表達率高于正常腎組織，并呈正相關性，可能在腎透明細胞癌的發生發展過程中起關鍵作用。

腎透明細胞癌；Rac1；WAVE2

腎癌是泌尿系統常見的惡性腫瘤，其中60%～85%為腎透明細胞癌。目前認為腫瘤細胞的侵襲和轉移是造成肺癌治療失敗的主要原因〔1〕。Rac1作為Rho家族成員之一，參與包括細胞骨架重構、基因轉錄、細胞增殖以及細胞生存等過程〔2〕。在腫瘤組織中的研究表明Rac1通過參與腫瘤細胞的增殖分化與凋亡、細胞運動、侵襲與轉移及腫瘤血管生成，影響腫瘤細胞的生物學特性，并且已陸續有研究報道表明Rac1在鼻咽癌、肝癌組織中過表達〔3,4〕。WAVE2作為一種新的肌動蛋白調節蛋白，參與細胞信號的轉導，調節肌動蛋白的聚合及細胞骨架的重排，在片狀偽足的形成和細胞遷移中的作用備受人們關注。而片狀偽足的形成則主要是由Rac來介導的，WAVE2作為Rac的下游效應物〔5〕。本研究采用免疫組織化學法檢測合Rac1與WAVE2在腎癌組織中的表達水平，分析Rac1和WAVE2在腎癌組織中的表達及其與腎癌的臨床病理特征的關系。

1 材料與方法

1.1 標本 26例腎透明細胞癌標本均來自遼寧醫學院第一附屬醫院2013年10月至2014年10月腎癌手術的患者，男17例，女9例，年齡50～75(平均62歲)。并隨機選取10例組織標本的癌旁組織標本作對照。所有病例均于術后病理證實為腎透明細胞癌。

1.2 實驗試劑和儀器 小鼠抗人Rac1兔多克隆抗體(Abaom公司)，WAVE2兔多克隆抗體(Santa Cruz公司)，兔超敏二步法檢測試劑盒、DAB顯色系統均購于中杉金橋生物技術有限公司，光學顯微鏡(Olympus BX51)。

1.3 免疫組織化學方法 采用免疫組織化學PV二步法檢測Rac1、WAVE2蛋白在石蠟包埋病理標本的表達情況。實驗操作步驟按試劑盒說明，以PBS代替一抗為陰性對照。

1.4 結果判定 兩種蛋白的免疫組化陽性染色細胞中均呈現粗大棕黃色顆粒，參考相關文獻〔6〕隨機取5個高倍視野，計算每個高倍視野中陽性細胞數占腫瘤細胞總數的百分比，最后計算5個高倍視野的平均百分比，(1)陽性染色細胞數:≤10%為1分；11%～50%為2分；51%～75%為3分；>75%為4分(2)陽性染色強度分級:無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。以上兩項積分乘積為最終評定結果，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性()，5分為強陽性()，另規定:0～2分視為低表達，3～4分視為中度表達，5分為高表達。

1.5 統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行χ2檢驗及Spearman等級相關分析。

2 結 果

2.1 Rac1和WAVE2在腎癌組織與癌旁組織中的表達 腎癌組織中Rac1陽性表達為19例(73.1%)，陽性染色呈現粗大棕黃色顆粒；WAVE2陽性表達17例(65.4%)，陽性著色在胞質、細胞核可表達。而在癌旁組織Rac1及WAVE2均無表達。見圖1、圖2。

2.2 Rac1和WAVE2表達與臨床病理特征的關系 Rac1、WAVE2的表達水平與年齡、性別無明顯關聯，而與腫瘤轉移有關(P<0.05)，見表1。

圖1 Rac1在腎細胞癌與癌旁組織中的表達(DAB，×200)

圖2 WAVE2在腎細胞癌與癌旁組織中的表達(DAB，×200)

臨床病理參數nRac1P值WAVE2P值性別 男1712(706)069411(647)0920 女97(778)6(667)年齡(歲) <601511(733)097310(667)0873 ≥60118(727)7(636)淋巴結轉移 無94(444)00173(333)0012 有1715(882)14(824)

2.3 腎癌組織中Rac1、WAVE2蛋白表達的相關性 腎癌組織中Rac1與WAVE2呈正相關(r=0.47，P=0.015)。

3 討 論

Rac1蛋白屬于Rac1超家族中的Rho亞家族，Rac1的表達和激活對腫瘤細胞的滲出起重要作用。Rac1在人類的正常組織中呈現低水平表達或不表達，但在胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、結直腸癌等多種惡性腫瘤組織或細胞中表達增高，而且Rac1的高表達同腫瘤細胞的分化程度、病理分型、TNM分期等表型密切相關，腎癌組織的研究也表明激活Rac1可導致腎臟癌癥浸潤〔6～9〕。本文顯示腎癌組織中Rac1陽性表達明顯升高，與年齡、性別無明顯關聯，與腫瘤有無轉移相關。與上述文獻報道一致。

WAVE2涉及細胞骨架的重組，可以引發細胞偽足形成和細胞運動，表明WAVE2可能與腫瘤的侵襲轉移相關。文獻研究顯示喉癌組織中WAVE2蛋白的表達顯著高于癌旁黏膜組織；WAVE2蛋白表達與臨床分期、腫瘤大小和淋巴結轉移等臨床病理特征顯著相關；在喉癌組織中的表達水平與性別、年齡、腫瘤原發部位、病理學分級等無關〔10〕。WAVE2的過量表達與肝細胞癌的發生發展和侵襲轉移密切相關，可以作為評價肝癌預后的指標之一〔11〕。本研究結果與上述文獻報道一致，但與黃琰菁等〔12〕的研究結果有所不同。我們考慮，原因可能與腫瘤組織不同有關，WAVE2在胃癌組織的研究顯示下調WAVE2是抑制胃癌腫瘤轉移機制之一〔13〕，但也有文獻報道顯示在胃癌組織中WAVE2下調意味著淋巴轉移〔14〕。因此WAVE2與腫瘤的確切關系仍需進一步研究。

Eden等〔15〕研究發現:細胞信號從Rac傳遞至肌動蛋白的過程與活化的WAVE復合物密切相關。研究表明Rac1基因上調時，WAVE2表達增加〔16〕。Rac1引發特定的細胞突起通過WAVE2板狀偽足。本研究顯示Rac1與WAVE2呈顯著正相關，針對Rac1和WAVE2的表達及作用機制尚需進一步探討。

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11 陶一明.WAVE2在肝細胞癌侵襲轉移中的關鍵作用〔D〕.長沙：中南大學，2005.

12 黃琰菁，于世英，王江玲，等.乳腺癌中Abi1和c-Abl及WAVE2的表達及其相互關系〔J〕.中國組織化學與細胞化學雜志，2010;19(3):216-20.

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15 Eden S,Rohatgi R,Podtelejnikov AV,etal.Mechanism of regulation of WAVE1-induced actin nucleation by Rac1 and Nck〔J〕.Nature，2002;418(6899):790-3.

16 Takahashi K.WAVE2 protein complex coupled to membrane and microtubules〔J〕.J Oncol，2012;2012:590531.

〔2016-02-13修回〕

(編輯 曹夢園)

遼寧省自然科學基金項目(No.2013022009)；遼寧省高等學校優秀人才支持項目(LJQ2013092)；遼寧醫學院校長基金項目(No.XZJJ20130243)

王 丹(1974-)，女，講師，博士，主要從事肥胖、神經退行性相關疾病研究。

關有良(1973-)，男，副主任醫師，碩士，主要從事腎癌發病機制研究。

R737.11

A

1005-9202(2017)09-2121-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.09.017

1 錦州醫科大學附屬第三醫院胸外科

2 錦州醫科大學組織胚胎學教研室