氣相色譜法同時測定油脂食品中抗氧化劑BHA、BHT、TBHQ的含量

張鳳妹++朱炳祺++金紹強++胡帆

摘要：利用乙腈直接提取油脂中的丁基羥基茴香醚（BHA）、二叔丁基羥基甲苯（BHT）和特丁基對苯二酚（TBHQ），利用氣相色譜法進行分析測定。結果表明，3種抗氧化劑加標回收率為86.9%～104.8%，BHA和BHT的最低檢出限均為2 mg/kg，TBHQ的最低檢出限為5 mg/kg，相對標準偏差為2.5%～3.2%，線性范圍為1～200 μg/mL，線性相關系數均大于0.999。該方法簡便、快速、穩定、可靠，適用于油脂及含油脂食品中BHA、BHT和TBHQ的快速定量檢測。

關鍵詞：氣相色譜法；BHA；BHT；TBHQ；油脂食品

中圖分類號：O657.7；TS227 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）08-1545-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.08.035

Simultaneous Determination of BHA，BHT and TBHQ

in Oil Foods by Gas Chromatography

ZHANG Feng-mei， ZHU Bing-qi， JIN Shao-qiang， HU Fan

（Zhejiang Institute for Food and Drug Control， Hangzhou 315100，China）

Abstract： In this study，three antioxidants butylhydroxy anisd（BHA）， butylated hydroxytoluene（BHT）， and tertiary butylhydroquinone（TBHQ） were extracted by acetonitrile from oils directly and analyzed by gas chromatography. The recoveries of three antioxidants ranged from 86.9% to 104.8%. The results showed that the detection limits of BHA，BHT and TBHQ were 2， 2 and 5 mg/kg，respectively. The relative standard deviations were from 2.5% to 3.2%. The linear ranges were from 1 to 200 μg/mL，with their correlation coefficients were higher than 0.999. This method was simple， rapid and stable. It can be used for the fast determination of BHA，BHT and TBHQ in oil foods.

Key words： gas chromatography； BHA； BHT； TBHQ； oil food

食用油脂和含有油脂的食品在不適當的保存條件下或者超過一定的保質期就會發生酸敗現象，而加入抗氧化劑延緩油脂的氧化，能夠提高食品的穩定性。其工作原理是與油脂在氧化過程中產生的過氧化物結合，中斷氧化過程，達到抗氧化、防酸敗的目的[1]。目前最常用的抗氧化劑是丁基羥基茴香醚（BHA）、二叔丁基羥基甲苯（BHT）和特丁基對苯二酚（TBHQ），但過量添加均對人體健康有害，如BHA有潛在的致癌性，BHT可能會抑制人體呼吸酶活性，因此研究測定食品中BHA、BHT和TBHQ含量是非常有必要的[2]。

近年來，BHA、BHT和TBHQ常用的分析方法主要有薄層色譜法、紫外分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法等[3-10]。2009年中國頒布的可同時測定食品中BHA、BHT和TBHQ 3種抗氧化劑的國家標準GB/T 23373-2009《食品中抗氧化劑丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）與特丁基對苯二酚（TBHQ）的測定》。但該方法前處理復雜，凈化過程繁瑣，使用的凝膠色譜柱花費高。本研究采用正己烷脫脂，乙腈直接提取油脂中的BHA、BHT和TBHQ，其檢測時間短、操作方便、回收率高，適用于油脂及含油脂食品中BHA、BHT和TBHQ的快速定量檢測。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

BHA、BHT、TBHQ標準品（Dr. Ehrenstorfer GmbH）；乙腈（分析純），乙醇（分析純），正己烷（分析純），石油醚（分析純，沸程30～60 ℃），乙酸乙酯環己烷（色譜純，Merck）。

Agilent7890型氣相色譜儀（配FID檢測器）、色譜柱HP-5石英毛細管柱（30 m×0.320 mm×0.25 μm）、渦旋混合器、旋轉蒸發儀（IKEA）。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理 根據樣品中油脂的實際含量，稱取20～30 g粉碎并混合均勻的薯類樣品，置于250 mL具塞錐形瓶中，加入適量石油醚，使樣品完全浸沒，放置過夜，用快速濾紙過濾后，減壓回收溶劑，得到油脂試樣備用。準確稱取備用油脂試樣0.5 g，加入正己烷20 mL，將溶液轉移至150 mL分液漏斗中，用20 mL含0.1%抗壞血酸乙腈提取3次，合并乙腈層提取液于收集下層乙腈于圓底燒瓶中。旋轉蒸發儀濃縮至干，精確加入5 mL乙酸乙酯∶環己烷（1∶1）溶解，經0.45 μm濾膜過濾進行氣相色譜分析。

1.2.2 標準曲線制備 BHA、BHT、TBHQ混合標準貯備液的配制。稱取BHA、BHT和TBHQ標準品各0.05 g（精確至0.1 mg），用乙酸乙酯∶環己烷（1∶1）溶解定容至50 mL，溶液每毫升相當于1 mg BHA、BHT和TBHQ，搖勻，備用。

混合標準工作溶液配制。精確量取混合標準貯備液，用乙酸乙酯∶環己烷（1∶1）稀釋成1、2、5、10、25、50、100、200 μg/mL的混合標準工作溶液。

1.2.3 色譜條件 色譜柱初始溫度為150 ℃，保持2 min，以3 ℃/min升至180 ℃，保持5 min，再以35 ℃/min升至240 ℃，保持5 min；載氣為高純氮，純度≥99.999%；恒流1.0 mL/min；進樣口溫度260 ℃；檢測器溫度300 ℃；進樣量1.0 μL；分流比10∶1；空氣流速400 mL/min；氫氣流速40 mL/min。

1.2.4 計算公式 X=■。式中，X—樣品中BHA、BHT、TBHQ的含量，g/kg；C—由標準曲線計算出試樣測定液中BHA、BHT、TBHQ的濃度，mg/mL；V—定容體積，mL；m—樣品質量，g；N—稀釋倍數。

2 結果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

分別采用無水乙醇、乙腈作為提取溶劑，大部分油脂溶于乙醇中，萃取效果不理想。而在提取前用正己烷溶解油脂，再用乙腈直接提取抗氧化劑，提取效果好，回收率高。

2.2 色譜條件的選擇

采用HP-5毛細管柱，經過程序升溫，各組分保留時間適中，峰形良好，并能達到很好的分離基線，標準色譜見圖1。

2.3 線性關系和檢出限

對標準系列溶液進行測定，以峰面積為縱坐標，抗氧化劑質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算相關系數和回歸方程，以基線噪聲3倍峰面積對應的BHA、BHT、TBHQ的含量為最低檢出限，結果如表1所示。

2.4 精密度和準確度

在已知不添加抗氧化劑的薯類樣品中加入混合標準工作溶液，進行精密度試驗，測定精密度符合要求，結果見表2。在已知不添加抗氧化劑的薯類樣品中加入高、中、低濃度的混合標準工作溶液進行加標回收測定，計算加標回收率，結果表明，BHA回收率為86.9%～104.8%，BHT回收率為86.9%～87.0%，TBHQ回收率為89.6%～98.6%，結果見表3。

2.5 與國標方法測定TBHQ含量的比較

在已知不添加抗氧化劑的薯類中加入不等量的標準溶液，按照GB/T 21927-2008方法進行測定。結果（表4）表明，試驗方法測定TBHQ回收率符合要求，可以準確測定TBHQ含量。

3 結論

采用正己烷脫脂，乙腈直接提取油脂中的BHA、BHT和TBHQ，利用氣相色譜法進行分析測定。3種抗氧化劑加標回收率為86.9%～104.8%，BHA和BHT的最低檢出限均為2 mg/kg，TBHQ的最低檢出限為5 mg/kg，精密度試驗相對標準偏差為2.5%～3.2%。抗氧化劑在質量濃度1～200 μg/mL范圍內線性良好，線性相關系數均大于0.999。該方法較GB/T 23373-2009和GB/T 21927-2008具有樣品前處理步驟簡單、準確度高等優點，而且可以同時測定3種抗氧化劑，適用于油脂及含油脂食品中BHA、BHT和TBHQ的快速定量檢測。

參考文獻：

[1] 楊惠芬，李明元，沈 文.食品衛生理化檢驗標準手冊[M].北京：中國標準出版社，1998.

[2] 游飛明，翁其香.氣相色譜法快速測定油脂及加工食品中的BHA、BHT、TBHQ[J].福建分析測試，2005，14（4）：2290-2292.

[3] 唐麗娜，寧煥焱，曾憲遠，等.抗氧化劑的超高效液相色譜-串聯質譜法測定[J].中國釀造，2014，33（7）：98-101.

[4] 潘 媛，張曉紅. HPLC和GC對食用油脂中抗氧化劑BHA、BHT、TBHQ的測定[J].云南大學學報，2008，30（S1）：344-347.

[5] 陳毓芳，奚星林，李憲華，等.高效液相色譜法同時測定食用油脂中叔丁基對苯二酚和叔丁基對羥基茴香醚[J].中國衛生檢驗雜志，2007，17（7）：1163-1165.

[6] 毛江勝，陳子雷，杜紅霞，等.毛細管氣相色譜法測定食用油中的酚類抗氧化劑BHA、BHT、TBHQ[J].化學分析計量，2006，15（6）：11-12.

[7] GB/T5009.30-2003，食品中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對甲酚（BHT）的測定[S].

[8] 劉年豐，涂一名，夏 虹，等.高效液相色譜法測定油脂中抗氧化劑BHA、TBHQ[J].分析科學學報，2003，19（6）：549-551.

[9] 胡小鐘，余建新，孫國保，等.用高效液相色譜法同時測定油脂中的9種抗氧化劑[J].分析測試學報，1999，18（5）：21-24.

[10] 岳振峰，藍 芳，謝麗琪.氣相色譜-質譜法測定XO醬中BHA、BHT和TBHQ[J].中國糧油學報，2004，19（5）：83-85.