采用HPLC—ELSD法測定冠心泰丸中兩種人參皂苷的含量

肇靜靜+李文蘭++尹濤

【摘 要】目的：建立同時測定冠心泰丸中兩種人參皂苷（人參皂苷Rg1；人參皂苷Re）的高效液相-蒸發光散射含量檢測方法。方法：采用色譜柱YMC-Pack ODS-A （250mmx4.6mm， 5μm），流動相乙腈（A）-水（B） 梯度洗脫系統，流速1.0mL /min。結果：人參皂苷Rg1線性范圍為1.04μg～10.40μg，平均回收率為97.9 %，RSD值為2.0%；人參皂苷Re線性范圍為1.02μg～10.20μg，平均回收率為95.6%，RSD值為1.6%。結論：HPLC-ELSD法測定結果精密準確，操作簡單，適用于冠心泰丸的含量測定。

【關鍵詞】人參皂苷Rg1 人參皂苷Re HPLC-ELSD法 含量測定

冠心泰丸由人參等14味中藥制成，功效為益氣養心、活血通脈，用于胸痹心痛之氣陰兩虛證，臨床上對冠心病、心絞痛療效確切。原標準中對人參皂苷Rg1進行了測定，但所采用的方法為薄層色譜掃描法，操作方法較為繁瑣，干擾較大，重現性較差，給實際生產檢測帶來很大不便。人參皂苷含量測定方法已有很多報道[1、2、3]。本文采用HPLC-ELSD法，以求更為有效地控制冠心泰丸中人參皂苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent1200 series）；蒸發光檢測器（SEDEX LT-85）。

1.2 試藥

人參皂苷Rg1（110703-201128 中國食品藥品檢定研究院）；人參皂苷Re（110754-201324 中國食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純TEDIR）；甲醇（AR）；水（注射用水）；冠心泰丸（哈藥集團世一堂制藥廠提供）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

YMC-Pack ODS-A 色譜柱（250mmx4.6mm 5μ）；以乙腈（A）-水（B）為流動相，按下表設定參數洗脫（見表1）；以蒸發光散射檢測器檢測。

柱溫：35 ℃；漂移管溫度：40℃；載氣壓力：3.0bar；流動相流速：1ml/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

取對照品適量，用甲醇溶解，制成人參皂苷Rg1和Re濃度分別為0.2 mg/ml、0.3mg/ml的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

稱取研磨好的冠心泰丸10g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇100ml，稱定重量，靜置16小時，超聲處理（300W，40kHz）45分鐘，放置至室溫，稱重，若有損失，用甲醇補足。濾過，取續濾液50ml，水浴揮干，用甲醇溶解殘渣，制成10ml溶液，搖勻、濾過，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備

照冠心泰丸制法，去除人參，制成制劑，照2.2.2項下方法制成溶液。

2.3 線性關系考察

精密稱取兩種人參皂苷（Rg1和Re）對照品適量，加甲醇溶解，制成每1ml含兩種人參皂苷（Rg1和Re）分別為0.52 mg和0.51mg的混合溶液。分別精密吸取對照品溶液2.0 μl、4.0 μl、8.0 μl、12μl、16μl、20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，分別以兩種人參皂苷峰面積積分值的對數值（Y）和對照品量（μg）的對數值（X）作為縱坐標和橫坐標，建立標準曲線，得回歸方程：人參皂苷Rg1 Y=1.580X+2.206 r=0.9991（n= 6）。人參皂苷ReY=1.548X+2.252 r=0.9992（n= 6）。試驗表明，人參皂苷Rg1的線性范圍為1.04～10.40μg；人參皂苷Re的線性范圍為1.02～10.20μg。

2.4 專屬性考察

吸取2.2項下的溶液各10μl，進樣。結果表明，陰性對照中各成分對人參皂苷Rg1和Re的檢出無干擾；供試品中，其它成分吸收峰與人參皂苷Rg1和Re吸收峰均能較好分離。

2.5 重復性考察

取研磨好的冠心泰丸，重復測定6次。結果表明人參皂苷Rg1的平均含量為0.248mg/g，RSD為1.9% （n=6）；人參皂苷Re的平均含量為0.521mg/g，RSD為1.9% （n=6）。表明該方法重復性較好。

2.6 準確度考察

取已知含量的冠心泰丸，研磨細粉，稱取6份，各約5.0g，置具塞錐形瓶中，加入混合對照品溶液（含人參皂苷Rg1 0.318 mg/ml，人參皂苷Re 0.550mg/ml）5ml、甲醇溶液95 ml，稱重，放置16小時，測定含量，計算回收率。結果，人參皂苷Rg1的平均回收率為97.9%，RSD為2.0% （n=6）；人參皂苷Re的平均回收率為 95.6%，RSD為1.6% （n=6）。

2.7 樣品測定

選擇3批連續批號樣品進行測定。結果，兩種人參皂苷（Rg1和Re）的平均含量分別為0.23mg/g和0.50mg/g。

3 結語

本實驗曾采用203nm波長進行檢測，結果基線漂移較嚴重，影響了兩種人參皂苷的有效檢出，而采用蒸發光檢測能很好的解決基線漂移的問題。

原標準中采用薄層掃描檢測法只測定了人參皂苷Rg1的含量，且檢出限度較低，干擾較大，重現性差。本試驗方法可同時有效檢測出兩種人參皂苷的含量，重現性好，操作簡便，可用于冠心泰丸的質量控制。

參考文獻：

[1]劉高峰，顧鳳云，徐凱建，等.薄層掃描法測定肝素寧膠囊人參皂苷 Rg1的含量[J].中國中藥雜志，1996，21（9）：542-543.

[2]王林，趙春杰，王書法.比色法測定君春樂膠囊中人參皂苷的含量[J].中國藥學雜志，1995，30（6）：364-365.

[3]閆天午，宋成吉，杜秀娟.人參首烏精中人參皂苷含量測定[J].中成藥，1993，15（11）：14 -15.