晶帽石斛的化學成分研究

楊丹 程忠泉 丁中濤 周俊 胡江苗

摘要： 該研究利用硅膠、凝膠、MCI、中壓制備色譜 （MPLC） 和高效液相半制備色譜 （semiHPLC） 等方法，對晶帽石斛 （Dendrobium crystallinum）進行了化學成分研究。結果表明：提純、分離共得到 10 個化合物，經波譜數據分析及與文獻數據對照，分別鑒定為石斛酚（1），3，4′二羥基5甲氧基聯芐（2），3，4′，5三羥基3甲氧基聯芐 （3），二氫藜蘆醇（4），安告佛醇（5），3′，5，7三羥基4′甲氧基黃烷酮（6），4′，5，7三羥基 6甲氧基黃烷酮（7），丁香樹脂醇（8），β谷甾醇（9），β胡蘿卜苷（10）。其中，除化合物2和化合物10以外，其余8個化合物均在該種植物中首次發現。

關鍵詞： 晶帽石斛， 化學成分， 結構鑒定

中圖分類號： Q946文獻標識碼： A文章編號： 10003142（2017）09118205

Abstract： The constituents of Dendrobium crystallinum were isolated by silica gel， Sephadex LH20 column chromatography and reversedphase semiHPLC. Their structures were elucidated by analyzing their spectral data and comparing with the previously reported literatures. Ten compounds were identified as gigantol （1）， 3，4′dihydroxy5methoxydihydrostilbene （2）， 3，4′，5 trihydroxy3methoxydihydrostilbene （3）， dihydroresveratrol （4）， angophorol （5）， 3′，5，7 trihydroxy4′methoxyflavanone （6）， 4′，5，7trihydroxy6methoxyavanone （7）， syringaresinol （8）， βsitosterol（9）， βdaucosterol （10）. All compounds were firstly isolated from this plant except for compounds 2 and 10.

Key words： Dendrobium crystallinum， chemical constituents， structure identification

石斛屬（Dendrobium）為蘭科（Orchidaceae）第二大屬，有1 500余種植物，我國記載的石斛共83種，供藥用的石斛屬植物有30多種，中國藥典（2010版）僅收載5種（邵曰鳳等，2012）。近十年來，課題組已經對云南產石斛屬球花石斛（D. thyrsiflorum）、金釵石斛（D. nobile）等近十種植物進行了系統的植物化學成分及活性研究，并取得了相關的研究成果。結合課題研究方向，我們對產于云南南部（勐臘、勐海、景洪）的晶帽石斛（D. crystallinum）進行了系統的化學成分研究，為其深入開發與利用提供參考。晶帽石斛莖直立或斜立，稍肉質，圓柱形，生于海拔540～1 700 m的山地林緣或疏林中樹干上，分布于緬甸、泰國、老撾、柬埔寨、越南（中國植物志編輯委員會，1988）。

本研究利用多種色譜技術手段（硅膠柱、Sephadex LH20、RP18、MCI、HPLC）等，從晶帽石斛 95% 乙醇提取物中分離并鑒定10個化合物，化合物類型涉及聯芐、黃酮、木質素等。對照文獻波譜數據分別鑒定為石斛酚（1），3，4′二羥基5甲氧基聯芐 （2），3，4′，5三羥基3甲氧基聯芐 （3），二氫藜蘆醇（4），安告佛醇（5），3′，5，7三羥基4′甲氧基黃烷酮（6），4′，5，7三羥基6甲氧基黃烷酮（7），丁香樹脂醇（8），β谷甾醇（9），β胡蘿卜苷（10）。化合物結構見圖1。

1材料與方法

1.1 儀器與材料

Bruker AV400、Bruker Avance Ⅲ600 型超導核磁共振儀，內標為TMS （四甲基硅烷）；API QSTAR Pulsar I 液相四級桿飛行時間質譜儀；薄層層析硅膠、柱層析硅膠 （200～300目，自青島海洋化工廠）；XRC1 型顯微熔點儀（四川大學科儀廠）；Jasco P1020 數字式旋光儀；UV2401PC 型紫外光譜儀；Bruker Tensor 27 FTIR 型紅外光譜儀； LiChroprep RP18 （40～63 μm， Merck， Darmstadt， Germany）； MCI gel CHP 20P （75～150 μm， Mitsubishi Chemical Corp.， Tokyo， Japan）； Sephadex LH20 （Amersharm Biosciences， Uppsala， Sweden）；顯色劑為H2SO4 （10%） 乙醇溶液，所有試劑均為分析純。

晶帽石斛于2010年10月采于云南省版納市勐臘，經于虹教授鑒定為晶帽石斛（Dendrobium crystallinum）。標本存放于中國科學院昆明植物研究所藥用植物資源化學研究組。

1.2 提取

自然陰干的晶帽石斛莖 3.0 kg，粉碎后用 95% 乙醇回流提取（15 L × 4）。減壓回收乙醇，濃縮為水混懸液，分別用乙酸乙酯 （3 L × 3） 和正丁醇 （3 L × 3） 萃取。乙酸乙酯部分 100 g 經硅膠柱色譜（CHCl3∶MeOH = 60∶1， 20∶1， 5∶1） 洗脫，得到4個組分 A-D。

組分 B （20 g） 經硅膠柱（CHCl3∶MeOH = 90∶1， 60∶1， 30∶1， 10∶1） 洗脫得到4個組分 （B1-B4）。組分 B3 （8 g） 經硅膠柱 （CHCl3∶MeOH = 60∶1， 30∶1， 20∶1） 和 Sephadex LH20 凝膠 （CHCl3∶MeOH = 1∶1） 得到化合物 1 （20 mg）， 2 （15 mg） 和 9 （200 mg）。組分 C （20 g） 經 RP18反相柱 （MeOH∶H2O = 30∶70， 50∶50， 70∶30， 90∶10） 洗脫得到5個組分 C1-C5。C2 （7 g） 經過硅膠柱 （CHCl3∶MeOH = 60∶1， 40∶1， 20∶1， 10∶1）洗脫，進一步用 Sephadex LH20 凝膠柱 （CHCl3∶MeOH = 1∶1） 純化得到化合物 3 （4 mg）， 4 （20 mg）， 5 （3 mg） 和 6 （5 mg）。組分 D （10 g） 經過硅膠柱 （CHCl3∶MeOH = 40∶1， 20∶1， 10∶1， 5∶1） 洗脫，并且用 RP18反相柱 （MeOH∶H2O = 20∶80， 40∶60， 60∶40， 80∶20）純化得到化合物 7 （8 mg），8 （20 mg） 和 10 （200 mg）。

2結構鑒定

化合物1白色粉末， C16H18O4， 1H NMR （CDCl3， 600 MHz） δ： 6.82 （1H， d， J = 7.8 Hz， H5′）， 6.70 （1H， dd， J = 7.8， 1.8 Hz， H6′）， 6.63 （1H， d， J = 1.8 Hz， H2′）， 6.31 （1H， J =1.8， H2）， 6.26 （2H， d， J =1.8， H6， 4）， 3.83 （3H， s， OMe5）， 3.75 （3H， s， OMe5′）， 2.78 （4H， m， CH2CH2）； 13C NMR （CDCl3， 150 MHz） δ： 160.7 （s， C5）， 156.6 （s， C3）， 146.2 （s， C3′）， 144.5 （s， C4′）， 143.6 （s， C1）， 133.7 （s， C1′）， 120.9 （d， C6′）， 114.2 （d， C5′）， 111.2 （d， C2′）， 108.1 （d， C2）， 106.7 （d， C6）， 99.0 （d， C4）， 55.8 （q， OMe 5）， 55.2 （q， OMe3′） ， 38.2 （t， Ca）， 37.2 （t， Ca′）。以上波譜數據與文獻（Juneja et al，1985）報道的一致，故鑒定1為石斛酚。

化合物2無色油狀， C15H16O3， 1H NMR （CDCl3， 600 MHz） δ： 7.02 （2H， d， J = 8.4 Hz， H2′， 6′）， 6.74 （2H， d， J = 8.4 Hz， H3′， 5′）， 6.31 （1H， d， J = 2.4， H4）， 6.24 （2H， d， J = 2.4， H2， 6）， 3.75 （3H， s， OCH34′）， 2.80～2.83 （4H， m， Hα， α′）； 13C NMR （CDCl3， 150 MHz） δ： 160.8 （s， C3）， 156.5 （s， C5）， 153.7 （s， C4′）， 144.6 （s， C1）， 133.9 （s， C1′）， 129.6 （d， C2′， 6′）， 116.2 （d， C3′， 5′）， 108.0 （d， C2）， 106.8 （d， C6）， 99.0 （d， C4）， 55.3 （q， OCH34′）， 38.2 （t， α）， 36.6 （t， α′）。以上波譜數據與文獻（王磊等，2011）報道的一致，故鑒定2為 3，4′二羥基5甲氧基聯芐。

化合物3白色粉末， C15H16O4； 1H NMR（CDCl3， 600 MHz） δ： 6.82 （1H， d， J = 7.8 Hz， H5′）， 6.73 （1H， dd， J = 8.0， 1.8 Hz， H6′）， 6.61 （1H， d， J = 1.8 Hz， H5′）， 6.23 （2H， d， J = 1.8 Hz， H2， 6）， 6.19 （1H， dd， J = 1.8， 1.8 Hz， H4）， 3.84 （3H， s， OMe3′）， 2.832.75 （4H， m， Ha， a′）； 13C NMR （CDCl3， 150 MHz） δ：156.6 （s， C3， 5）， 146.2 （s， C3′）， 144.9 （s， C4′）， 143.7 （s， C1）， 133.5 （s， C1′）， 121.0 （d， C6′）， 114.2 （d， C5′）， 111.1 （d， C2′）， 108.2 （d， C2， 6）， 100.4 （d， C4）， 55.9 （q， OCH33′）， 38.0 （t， α）， 37.1 （t， α′）。以上波譜數據與文獻（Majumder et al，1993）報道的一致，故鑒定3為3，4′，5三羥基3′甲氧基聯芐。

化合物4油狀， 1H NMR （CDCl3， 600 MHz） δ： 7.02 （2H， d， J = 8.4 Hz， H2′， 6′）， 6.72 （2H， d， J = 8.4 Hz， H3′， 5′ ）， 6.20 （2H， d， J = 1.8 Hz， H2， 6）， 6.17 （1H， d， J = 1.8 Hz， H4）， 2.742.69 （4H， m， Ha， a′）； 13C NMR （CDCl3， 150 MHz） δ： 159.2 （2C， s， C3， 5）， 156.3 （s， C4′）， 145.2 （s， C1）， 133.5 （s， C1′）， 130.1 （d， C2′， 6′）， 115.8 （d， C3′， 5′）， 107.7 （d， C2， 6）， 101.1 （d， C4），39.0 （t， α）， 37.5 （t， α′）。以上波譜數據與文獻（Adesanya et al，1989）報道的一致，故鑒定4為二氫藜蘆醇。

化合物5白色粉末， C16H14O5， 1H NMR （Acetone 600 MHz） δ： 7.37 （2H， d， J = 7.8 Hz， H2′， 6′）， 6.87 （2H， d， J = 7.8 Hz， H3′， 5′）， 5.93 （2H， br s， H6， 8）， 5.42 （1H， d， J = 13.2 Hz， H2）， 3.14 （1H， dd， J = 16.8， 13.2 Hz， H3a）， 2.70 （1H， dd， J = 16.8， 2.4 Hz， H3b）； 13C NMR （Acetone 150 MHz） δ： 195.9 （s， C4）， 167.5 （s， C7）， 165.2 （s， C5）， 164.3 （s， C9）， 130.7 （s， C1′）， 129.0 （d， C2′， 6′）， 116.1 （d， C3′， 5′）， 103.1 （s， C10）， 96.8 （d， C6）， 95.8 （d， C8）， 79.9 （d， C2）， 49.7 （q， OMe4′）， 43.4 （t， C3）。以上波譜數據與文獻（Wagner et al，1976）報道的一致，故鑒定5為安告佛醇。

化合物6黃色粉末， C16H14O6， 1H NMR （CDCl3 600 MHz） δ： 7.37 （2H， d， J = 7.8 Hz， H2′， 6′）， 6.87 （2H， d， J = 7.8 Hz， H3′， 5′）， 5.93 （2H， br s， H6， 8）， 5.42 （1H， d， J = 13.2 Hz， H2）， 3.14 （1H， dd， J = 16.8， 13.2 Hz， H3a）， 2.70 （1H， dd， J = 16.8， 2.4 Hz， H3b）； 13C NMR （CDCl3， 150 MHz） δ： 195.9 （s， C4）， 164.6 （s， C7）， 164.3 （s， C5）， 164.2 （s， C9）， 130.2 （s， C1′）， 119.6 （d， C6′）， 114.5 （d， C5′）， 108.8 （d， C2′）， 103.2 （s， C10）， 96.8 （d， C6）， 95.5 （d， C8）， 79.4 （d， C2）， 56.0 （q， OMe4′）， 43.4 （t， C3）。以上波譜數據與文獻（Mosihuzzman et al，1983）報道的一致，故鑒定6為 3′，5，7三羥基4′甲氧基黃烷酮。

化合物7黃色粉末， C16H14O6， 1H NMR （CDCl3， 600 MHz） δ： 7.30 （2H， d， J = 8.4 Hz， H2′， 6′）， 6.92 （2H， d， J = 8.4 Hz， H3′， 5′）， 6.18 （H， s， H8）， 5.40 （1H， m， J = 10.8 Hz， H2）， 3.08 （1H， d， J = 16.8， Hz， H3a）， 2.86 （1H， d， J = 16.8 Hz， H3b）； 13C NMR （CDCl3， 150 MHz） δ： 196.5 （s， C4）， 159.5 （s， C7）， 159.4 （s， C4′）， 155.0 （s， C9）， 155.0 （s， C5）， 127.8 （d， C2′， 6′）， 113.1 （d， C3′， 5′）， 103.1 （s， C10）， 95.5 （d， C8）， 79.2 （d， C2）， 61.8 （q， OMe4′）， 43.4 （t， C3）。以上波譜數據與文獻（Mosihuzzman et al，1983）報道的一致，故鑒定7為4′，5，7三羥基 6甲氧基黃烷酮。

化合物8白色粉末， C22H26O8， 1H NMR （CDCl3， 600 MHz） δ： 6.57 （4H， br s， H2′， 2"， 6′， 6"）， 4.72 （2H， d， J = 4.2 Hz， H2 and 6）， 4.26 （2H， dd， J = 8.4， 6.6 Hz， Ha4 and Ha8）， 3.89 （2H， d， J = 3.0 Hz， Hb4 and Hb8）， 3.80 （12H， s， OMe3′， 3"， 5′， 5"）， 3.08 （2H， br s， H1， 5）； 13C NMR （CDCl3， 150 MHz） δ： 147.1 （s， C3′， 3"， 5′， 5"）， 134.2 （s， C4′， 4"）， 132.0 （s， C1′， 1"）， 102.6 （d， C2′， 2"， 6′， 6"）， 86.0 （d， C2， 6）， 71.7 （t， C4， 8）， 56.3 （q， OMe3′， 3"， 5′， 5"）， 54.2 （d， C1， 5）。以上波譜數據與文獻（Vermes et al，1991）報道的一致，故鑒定8為丁香樹脂醇。

化合物9白色針晶，在 10%硫酸乙醇溶液中顯紫紅色，與β谷甾醇標準品對照，TLC 檢測 Rf 值一致，且混合后熔點不降低。故化合物9鑒定為β谷甾醇。

化合物10白色粉末，在 10%硫酸乙醇溶液中顯紫紅色，與β胡蘿卜苷標準品對照，TLC 檢測 Rf 值一致，且混合后熔點不降低。故化合物10鑒定為 β胡蘿卜苷。

3討論

已有研究證實，石斛屬植物具有抗腫瘤、防治白內障、抗氧化、抗誘變等活性，中藥石斛在中醫臨床上主要用于滋陰清熱，在眼科疾病、咽炎、胃病等方面應用廣泛（林萍等，2003）。石斛屬植物化學成分差別較大，如鐵皮石斛、流蘇石斛、鼓槌石斛等主要化學成為聯芐、菲類等酚性化合物；金釵石斛、鉤狀石斛等主要成分為石斛堿類生物堿、倍半萜（苷）類化合物。從晶帽石斛中分離的化合物類型包括聯芐、黃酮、木質素等酚性化合物，結合文獻（王磊等，2008，2011）報道，晶帽石斛主要化學成分與鐵皮石斛等相近。應進一步對晶帽石斛藥理活性進行研究，驗證是否具有臨床應用價值，在資源保護的前提下，進行可持續的植物資源開發利用。

參考文獻：

ADESANYA SA， OGUNDANA MF， 1989. Dihydrostilbene phytoalexins from Dioscorea bulbifera and D. dumentorum [J]. Phytochemistry， 28： 773-774.

Editorial Committee of Flora of China， 1988. Floral of China [M]. Beijing： Science Press， 19： 109. [中國植物志編委會. 1988. 中國植物志 [M]. 北京： 科學出版社， 19： 109.]

JUNEJA RK， SHAMA SC， TANDON JS， 1985. A substituted 1， 2diarylethane from Cymbidium giganteum [J]. Phytochemistry， 24： 321-324.

LING P， BI ZM， XU H， et al， 2003. Advances in studies on pharmacology of plants from Dendrobium Sw [J]. Chin Trad Herb Drugs， 34（11）：19-22. [林萍， 畢志明， 徐紅， 等， 2003. 石斛屬植物藥理活性研究進展. 中草藥 [J]. 34（11）：19-22.]

MOSIHUZZMAN M， HAREEM S， TALI S， et al， 1983. Studies on αglucosidase inhibition and antiglycation potential of Iris loczyi and Iris unguicularis [J]. Phytochemistry， 22（5）： 1306-1307.

SHAO YF， HU FQ， ZOU C， et al， 2012. Advances on studies of chemical constituents and pharmacology of plants from Dendrobium SW [J].Nat Prod Res Dev， 24：152-157，121. [邵曰鳳，胡粉青，鄒澄，等， 2012. 石斛屬植物化學成分和藥理活性研究現狀 [J].天然產物研究與開發， 24：152-157，121.]

VERMES B， OTTO S， HILDEBERT W， 1991. Synthesis of biologically active tetrahydrofurofuranlignan （syringin， pinoresinol） mono and bisglucosides [J]. Phytochemistry， 30（9）： 3087-3059.

WAGNER H， CHARI VM， SONNENBICHLER J， 1976. Carbon13 NMR spectra of naturally occurring flavonoids [J]. Tetrahedron Lett， 21： 1799-1802.

WANG L，ZHANG CF，WANG ZT， et al， 2011. Studies on the chemical constituents of Dendrobium crystallinum [J]. Chin Trad Herb Drugs， 42（1）： 31-33. [王磊， 張朝鳳， 王崢濤， 等， 2011. 晶帽石斛化學成分研究 [J]. 中草藥， 42（1）： 31-33.]

WANG L，ZHANG CF，WANG ZT， et al， 2008. Studies on the chemical constituents of Dendrobium crystallinum [J]. Chin J Chin Mat Med， 33（15）： 1847-1848. [王磊， 張朝鳳， 王崢濤， 等， 2008. 晶帽石斛化學成分的研究 [J]. 中國中藥雜志， 33（15）： 1847-1848.]