QuEChERS dSPE EMR—Lipid—LC—MS—MS測定雞蛋中3種聚醚だ囁骨虺嬉┪鋝辛

臧國棟 符靖雯 楊欽沾 黃子敬 陳孟君

摘要[目的]利用 Agilent Bond Elut增強型脂質去除EMR-Lipid技術，建立了以QuEChERS dSPE EMR-Lipid 為前處理測定雞蛋中3種聚醚類藥物殘留的液相色譜-質譜聯用（LC-MS-MS）方法。[方法]雞蛋經酸化乙腈提取，Bond Elut EMR-Lipid QuEChERS凈化，采用HPLC-MS-MS上機檢測。[結果]3種聚醚類藥物殘留在2.0～100.0 μg/L 范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r>0.999），回收率在84.6%～107.0%。[結論]該方法前處理方便快捷、定量結果準確、再現性好，適用于雞蛋中3種聚醚類藥物殘留的測定。

關鍵詞QuEChERS;EMR-Lipid;液相色譜串聯質譜;聚醚類

中圖分類號S851.34+7文獻標識碼

A文章編號0517-6611（2017）32-0075-02

Determination of Three Kinds of Polyether Drug Residues in Eggs by QuEChERS dSPE EMR-Lipid-LC-MS-MS

ZANG Guodong，FU Jingwen，YANG Qinzhan et al（Huizhou Center for Agricultural Products Quality and Safety Supervision and Testing，Huizhou ，Guangdong 516008 ）

Abstract[Objective]To establish a LCMS-MS method for the determination of three kinds of polyether residues in eggs by QuEChERS dSPE EMRLipid as a pretreatment using Agilent Bond Elut enhanced lipid removal EMRLipid technology.[Method]Egg was extracted by acidified acetonitrile，purified by Bond Elut EMRLipid QuEChERS，and detected by HPLCMSMS.[Resul]There was a good linear relationship between the three kinds of polyether residues in the range of 2.0-100.0 μg/L，r>0.999.The recoveries ranged from 84.6% to 107.0%.[Conclusion]The method is convenient and accurate，and the quantitative results are accurate and reproducible.It is suitable for the determination of three kinds of polyether residues in eggs.

Key wordsQuEChERS;EMRLipid;Liquid phase tandem mass spectrometry;Polyether

聚醚類抗生素藥物是現在使用最廣泛的雞用抗球蟲藥，在我國普遍用于治療雞球蟲病。球蟲病是由艾美球蟲屬原球蟲感染所得[1]，可破壞家禽腸道的寄生蟲疾病。感染球蟲病后將會嚴重影響禽類的肉和蛋的產量，感染嚴重可導致禽類死亡。但過量添加聚醚類抗生素會增加動物肌肉和蛋中藥物的殘留，食用后會對人類身體健康不利，甚至可能會加重心血管患者的病情。目前報道的聚醚類抗生素殘留檢測方法，主要有比色法、微生物法[2]、薄層法、免疫分析法[3]、液相色譜法[4-6] 和液相色譜-串聯質譜法[7-13]。比色法、微生物法、薄層法和免疫學法只能檢測單一的藥物殘留，且結果不夠準確;液相色譜法需要衍生化，操作繁瑣;而液相色譜-串聯質譜法靈敏度高，基質效應小，是聚醚類抗生素比較理想的檢測方法。筆者采用 Agilent Bond Elut增強型脂質去除EMR-Lipid技術，建立了以QuEChERS dSPE EMR-Lipid 為前處理測定雞蛋中3種聚醚類藥物殘留的高效液相色譜-串聯質譜法，前處理過程簡單快速，無需衍生，無需固相萃取凈化，檢出限較低，回收率好且再現性高，適用于雞蛋中聚醚類抗生素殘留的檢測分析。

1材料與方法

1.1材料

Agilent G6460 三重串聯四極桿質譜儀，美國Agilent 公司，配電噴霧離子源，配Agilent 1290 超高效液相色譜儀; TGL-16M 高速冷凍離心機，湘儀離心機公司;微孔濾膜（0.22 μm），天津津騰公司。莫能菌素、鹽霉素、甲基鹽霉素，純度均大于95.0%，均來自德國Dr.Ehrenstorfer公司;甲醇、乙腈均為色譜純，MERCK公司;甲酸，色譜純，廣州化學試劑廠;試驗用水為Milli-Q 純水儀凈化的超純水，美國密理博公司。

1.2標準溶液制備

標物儲備液：準確稱取3種標準物質，用甲醇溶解配制成100 μg/mL 標準儲備液，-18 ℃保存。

混合工作液：準確量取上述各儲備液適量，甲醇逐級稀釋制備成1.0 μg/mL混合標準工作液，4 ℃保存。

1.3樣品前處理

準確稱取去殼攪拌均勻的雞蛋樣品2.0 g于50 mL離心管內，然后加入10 mL 5%甲酸乙腈提取溶液，渦旋1 min，8 ℃、12 000 r/min離心5 min，取上清液待用。dSPE EMR-Lipid吸附劑先用5 mL水活化，加入5 mL上述待用上清液，渦旋1 min，在8 ℃、12 000 r /min離心5 min，然后取5 mL上清液加入已裝有NaCl和無水Na2SO4的EMR-Polish管中，充分振動鹽析，8 ℃、12 000 r/min離心5 min，取適量上層乙腈過0.22 μm濾膜，供液質分析。

1.4液相色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse PlusC18柱（2.1 mm×50 mm×1.8 μm），Agilent 公司;柱溫30 ℃; 流速0.3 mL/min; 進樣量5 μL;流動相A為0.1% 甲酸水溶液，B為甲醇; 梯度洗脫程序見表1。

1.5質譜條件

電離方式為電噴霧電離源（ESI），正離子模式掃描，多反應監測（MRM），離子源溫度為350 ℃;氣體為氮氣;干燥氣流速6 L/min;霧化器壓力310 kPa; 鞘氣溫度350 ℃;通過對毛細管電壓、碰撞能等質譜參數的最佳優化，最終確定3種聚醚類藥物質譜條件見表2。

2結果與分析

2.1線性關系及檢出限

配制3種聚醚類藥物混合標準溶液濃度從2.0～100.0 μg/L進行分析，結果表明：在2.0、5.0、10.0、50.0、100.0 μg/L的濃度范圍內，3種藥物都具有良好的線性，線性相關系數r大于0.999，記錄各待測組分色譜峰面積，以各組分的進樣量為橫坐標（X），各組分的峰面積為縱坐標（Y）進行回歸分析，以3倍信噪比（S/N=3） 對應的濃度作為方法檢出限（LOD），檢出限為0.2～0.5 μg/kg，結果見表3。

2.2回收率及精密度

在雞蛋空白樣品中添加2.0、5.0 以

3討論

未來獸藥殘留檢測的趨勢是快速、簡便、準確以及高通量[14]。該試驗將Agilent公司新產品dSPE EMR-Lipid 去除脂質增強型產品結合標準QuEChERS方法，應用于含脂量高的雞蛋樣品，獲得了理想的除脂凈化效果，相比于GB/T 20364—2006《動物源產品中聚醚類殘留量的測定》[15]，前處理過程簡單快速，不需要固相萃取凈化，定量結果準確，回收

率高，能夠滿足平時檢測或大批量篩查的需要。

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