近紅外熒光法聯合美藍染料法在早期乳腺癌SLNB中的應用

侯丁丁 康驊 王亞軍 趙菁 李開富 韓婧

【摘要】目的探討近紅外熒光法聯合美藍染料法在早期乳腺癌前哨淋巴結活組織檢查（SLNB）中的應用價值。方法應用近紅外熒光法和美藍染料法對141例臨床腋窩淋巴結檢查陰性的早期原發性乳腺癌患者行SLNB，記錄單用近紅外熒光法或美藍染料法以及聯合2種方法檢出前哨淋巴結（SLN）的數目和檢出率，比較聯合法檢出的SLN術中冰凍病理檢查與術后石蠟病理檢查結果，分析BMI對近紅外熒光法檢出SLN情況的影響。結果141例中近紅外熒光法檢出SLN（2.78±1.28）枚/人，優于美藍染料法檢出的（2.29±1.31）枚/人（t=4.640，P<0.01），兩者檢出率比較差異有統計學意義（χ2=4.083，P=0.039）；聯合法檢出SLN（3.11±1.30）枚/人，優于美藍染料法（t=10.360，P<0.01），兩者檢出率比較差異有統計學意義（χ2=8.100，P=0.002）。聯合法檢出的140例SLN術中冰凍病理檢查與術后石蠟病理檢查陽性率比較差異無統計學意義（χ2=0.250，P=0.625）。BMI≥24 kg/m2者共86例（61.0%），近紅外熒光法中共3例未測出發熒光的SLN，而BMI<24 kg/m2者的近紅外熒光法SLN檢出率為100%。結論近紅外熒光法聯合美藍染料法可提高SLN的檢出率和檢出數目，提高SLNB的準確性，但如何提高肥胖患者的檢出率是值得進一步研究的問題。

【關鍵詞】乳腺癌；前哨淋巴結；前哨淋巴結活組織檢查；近紅外熒光法；美藍染料法

【Abstract】ObjectiveTo investigate the clinical value of near-infrared fluorescent method combined with methylene blue method for sentinel lymph node biopsy （SLNB） in patients with early breast cancer. MethodsIn total， 141 patients diagnosed with early primary breast cancer who were negative for armpit lymph node examination received SLNB by near-infrared fluorescent method combined with methylene blue method. The quantity and detection rate of sentinel lymph node （SLN） by near-infrared fluorescent method or methylene blue method alone and combined application of two methods were recorded. Pathological examination of intraoperative frozen sections and postoperative paraffin-embedded sections were compared， evaluate the effect of BMI upon the detection results of SLN by near-infrared fluorescent method. ResultsThe mean quantity of SLN detected by near-infrared fluorescent method was （2.78±1.28）， significantly higher compared with （2.29±1.31） by methylene blue method （t=4.640， P<0.01）. The detection rate of SLN significantly differed between two methods （χ2=4.083， P=0.039）. The average quantity of SLN detected by combined methods was （3.11±1.30）， significantly higher than that detected by methylene blue method alone （t=10.360， P<0.01）. The detection rate of SLN also significantly differed between two approaches （χ2=8.100， P=0.002）. For the SLN detected by the combined methods in 140 cases， the positive rate between intraoperative frozen sections and postoperative paraffin-embedded sections did not significantly differ （χ2=0.250， P=0.625）. For 86 patients with BMI≥24 kg/m2， SLN was not detected in 3 cases by near-infrared fluorescent method alone， whereas the detection rate was up to 100% for those with BMI<24 kg/m2. ConclusionCombined application of near-infrared fluorescent method and methylene blue method can enhance the detection rate and quantity of SLN and increase the accuracy of SLNB. However， how to enhance the detection rate of SLN for obese patients remains to be investigated.

【Key words】Breast cancer； Sentinel lymph node； Sentinel lymph node biopsy；

Near-infrared fluorescent method； Methylene blue method

目前乳腺癌前哨淋巴結活組織檢查（SLNB）的標準方法包括美藍染料法、放射性核素法及兩者的聯合，其中聯合法具有最佳的檢出率和特異性，已成為西方國家臨床常規方法[1]。但我國尚無批準的商品化核素示蹤劑，加之核素法具有放射性輻射、價格昂貴、需特殊的檢測設備等，導致該法的應用在國內受到諸多限制[2]。近年來有文獻報道近紅外熒光法具有較高敏感性與特異性，且具有操作簡單、無放射性、價格低廉等優點[3]。結合以上背景，為探討適合國內廣泛開展并能提高早期乳腺癌SLNB檢出率的方法，從2013年8月至2017年3月，筆者聯合應用近紅外熒光法和美藍染料法對我院普外科乳腺病區某個治療小組收治的早期乳腺癌患者進行了SLNB，分析了該法對SLNB的應用價值，以期為同行提供參考依據。

對象與方法

一、研究對象

1.試驗設計

我院普外科乳腺病區某個治療小組在2013年8月至2017年3月共收治141例早期原發性乳腺癌患者，術前均經粗針穿刺活組織檢查（活檢）確診。141例中男3例、女138例，年齡（57.8±12.9）歲，BMI（25.1±3.9）kg/m2。141例均符合以下標準，納入標準：①經活檢病理診斷為原發性乳腺癌；②臨床分期為cTisN0M0、cT1-2N0M0，即早期乳腺癌，或經新輔助化學治療降期至cT1-2N0M0；③臨床腋窩淋巴結檢查陰性[4-5]。排除標準：①炎性乳腺癌；②對示蹤劑過敏；③臨床觸診或者影像學檢查提示腋窩淋巴結陽性；④腋窩手術史及放射史；⑤妊娠哺乳期乳腺癌；⑥有遠處轉移[6]。本研究經我院醫學倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

二、方法

對每例患者均采用近紅外熒光示蹤法和美藍染料法進行SLNB，并將采用不同方法識別的SLN進行分組以便進行患者的自身對照，其中僅由近紅外熒光法識別的前哨淋巴結（SLN）為近紅外熒光組，僅由美藍染料法識別的SLN為美藍染料法組，由美藍染料法聯合近紅外熒光法識別的SLN為聯合法組。對行SLNB后發現有SLN轉移者，則在行乳腺手術后進一步行腋窩淋巴結清掃術（ALND），無轉移者則不再行ALND。

1.儀器和試劑

SLNB熒光探測系統（南京產）；亞甲藍注射液（即美藍注射液，2 ml，每瓶20 mg，濟川產）；注射用吲哚菁綠（10 ml，每瓶25 mg，遼寧產）。

2.示蹤劑注射方法及部位

亞甲藍注射液注射方法：術前5～10 min用皮試針在腫瘤表面及乳暈周圍3點（12點、4點、7點）的皮內注射亞甲藍，注射量約1 ml，示蹤劑注射后均按摩5 min左右。注射用吲哚菁綠注射方法：術前5 min用皮試針在腫塊表面及乳暈周圍4點（12點、3點、6點及9點）的皮內注射濃度為0.03%的吲哚菁綠（具體配制方法為用1 ml皮試針抽取原液0.1～0.15 ml，繼續抽取無菌注射用水稀釋至1.0 ml），注射量約0.5～1.0 ml。

3.操作方法

操作方法如下：①按照以上方法及部位注射美藍和吲哚菁綠示蹤劑，5 min后關閉無影燈，使用紅外觀測相機成像系統可見由注射部位至腋窩顯示熒光的淋巴管，在熒光消失的皮膚處作標記；②在腋窩部順皮紋方向做3～5 cm切口，切開皮膚及皮下組織，采用鈍性分離和電刀緩慢切割相結合，尋找藍染的淋巴管，循藍染的淋巴管方向，同時通過紅外觀測相機成像系統找到顯示熒光的SLN；③將藍染或者顯示熒光的SLN取出；④再次通過熒光探測系統觀察腋窩術區，切除能發出熒光的淋巴結；⑤記錄2種方法各自檢出SLN的數目、大??；⑥將活檢的SLN送快速冰凍和石蠟病理檢查，病理檢查顯示SLN轉移陽性者，進一步行ALND，陰性者不再行ALND；⑦乳腺病灶具體術式視病情行單純腺體切除術、局部擴大切除術或乳腺腺體切除一期乳房假體置入術等。

4. SLN及SLN轉移陽性判斷標準

①近紅外熒光法檢出的SLN為單純有熒光或者既有熒光又有藍染的淋巴結；②美藍染料法檢出的SLN為單純有藍染或者既有藍染又有熒光的淋巴結[7]。滿足以上條件之一的均為SLN。通常將SLN轉移狀態分為宏轉移、微轉移及孤立腫瘤細胞（ITC）轉移。鑒于有ITC轉移的患者即使不接受腋窩治療其腋窩復發率也不會升高，通常將有ITC轉移的SLN視為SLN轉移陰性，而將宏轉移和微轉移的SLN視為SLN轉移陽性[8]。

三、統計學處理

用SPSS 19.0處理數據，2組率的比較運用配對χ2檢驗，計量資料采用±s表示，組間比較采用配對t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

三、聯合法檢出的140例SLN術中冰凍病理檢查與術后石蠟病理檢查的比較

聯合法檢出的140例SLN術中冰凍病理檢查示陽性為28例、陰性為112例，術后石蠟病理檢查示1例為假陽性，3例為假陰性，兩者陽性率比較差異無統計學意義（χ2=0.250，P=0.625），見表2。

五、不良反應

所有患者注射美藍和吲哚菁綠示蹤劑后在圍手術期均未出現過敏反應，部分患者術后出現皮膚綠染、壞死等并發癥，均給予了對癥處理。

目前美藍染料法、放射性核素法及兩者的聯合方法均為臨床腋窩淋巴結陰性早期乳腺癌SLNB的標準方法。在本研究中，單獨近紅外熒光法在SLN的檢出率和檢出數上均優于單獨美藍染料法。與Sugie等[9]報道的近紅外熒光法較美藍染料法更具有優勢的結論相似（檢出率99% vs.78%，P<0.001）。

有研究顯示，切除1、2、3個SLN其預測腋窩淋巴結轉移的準確性分別為88.6%、96.2%、100%，理論上，切除越多的SLN預測腋窩淋巴結轉移的準確性越高，但切除過多的SLN可能會加重患者術后淋巴水腫等并發癥的程度[12]。Ban等[13]建議SLNB的個數以3～4枚最佳，既能獲得較滿意的準確性（96.5%～100%），又能降低假陰性率（0%～11.1%）。本研究結果顯示，聯合法識別SLN的總數及平均數均優于單獨美藍染料法，因此聯合法較單獨美藍染料法的準確性更高。

在SLNB過程中需注意患者的BMI、術中冰凍病理檢查與術后石蠟病理檢查、新輔助化學治療等對檢查結果的影響。肥胖會增加SLN精確定位難度，熒光透過脂肪組織時更易于衰減，而且衰減的程度與BMI相關，超過皮下1 cm的熒光信號不易被檢測到，本研究結果顯示，超體質量和肥胖患者采用近紅外熒光法時有3例未能檢出發熒光的SLN，而對于BMI<24 kg/m2的患者均能檢出發熒光的SLN，因此對于超體質量和肥胖的患者，聯合應用近紅外熒光法和美藍染料法更顯重要。對比術中冰凍病理檢查與術后石蠟病理檢查的結果顯示，盡管前者假陰性3例、假陽性1例，但兩者陽性率比較差異無統計學意義，提示術中冰凍病理檢查對SLN的病理狀態具有較好的預測價值，可較準確判斷腋窩淋巴結狀態。此外對于腋窩淋巴結陰性的乳腺癌患者，若在術前接受了新輔助化學治療，雖然該治療會改變淋巴回流途徑，但并未改變SLN的位置，因此對于接受了新輔助化學治療后的腋窩淋巴結仍為陰性的乳腺癌，SLNB亦是可行的[14]。

本研究結果顯示，在國內缺乏推廣放射性核素法的條件下，在采用美藍染料法的基礎上聯用近紅外熒光法可提高SLNB的SLN檢出率和檢出數目，并提高其準確性，該聯合法適用于臨床腋窩淋巴結陰性早期乳腺癌的SLNB。

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（收稿日期：2017-07-23）

（本文編輯：洪悅民）