外周血循環腫瘤細胞在胰腺癌患者中的表達及臨床病理診斷意義

劉憶華 成善原 李麗 李婷 鄭安斌

·論著·

外周血循環腫瘤細胞在胰腺癌患者中的表達及臨床病理診斷意義

劉憶華 成善原 李麗 李婷 鄭安斌

目的 探討外周血循環腫瘤細胞(CTCs)在胰腺癌患者中的表達及臨床病理診斷意義。方法 選取2013年6月至2015年12月期間收治的87例胰腺癌患者，采取免疫磁珠負性富集和免疫熒光鑒定的方法對入選患者的外周血循環腫瘤細胞進行檢測，并在患者經治療后進行定期隨訪以采集患者的臨床資料。結果 對入選患者外周血CTCs的檢測結果進行統計分析，結果顯示87例胰腺癌患者中CTCs在外周血中的檢出率為63.2%(55/87)，其中檢測到的個數為0～212個，平均有1.97個/ml。通過對病理因素和CTCs的影響分析，顯示腫瘤大小、淋巴結轉移以及侵犯被膜等均和CTCs存在著極大的相關性(P<0.05)；并且在CTCs和患者預后的關系分析中，顯示入選患者中一年生存率為22.3%中位生存時間為142.3d，CTCs檢測結果陽性者以及術后檢測CTCs數目上升者多預后不良。結論CTCs是臨床上胰腺癌患者預后判斷的重要指標之一，對胰腺癌患者的臨床病理診斷存在非常重要的意義。

外周血循環腫瘤細胞；胰腺癌；臨床病理；診斷意義；預后

外周血循環腫瘤細胞(CTCs)是臨床上惡性腫瘤患者的常規檢測手段之一，在臨床上得以廣泛的推廣和運用[1]。胰腺癌則是臨床上較為常見并且預后最差的惡性腫瘤之一，其病死率和五年生存率均居高不下[2]。為了臨床上能夠及時對胰腺癌患者的病情發展及預后作出準確評估，從而對患者制定和實施科學有效的個體化治療方案，我院選取胰腺癌患者展開相關研究，探討CTCs在胰腺癌患者中的表達及臨床病理診斷意義，報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取我院于2013年6月至2015年12月期間收治的87例胰腺癌患者，采集入選患者的年齡、性別、體征、主要癥狀、影像檢查等資料以及主要實驗室檢查結果等。其中男42例，女45例；年齡 42～72歲，平均年齡(58.2±6.1)歲。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①所有患者均確診為胰腺癌；②所有患者均無除胰腺癌外其他惡性腫瘤疾病；③所有患者均知情同意并自愿參與本次研究。

1.2.2 排除標準：①有既往腫瘤病史；②有嚴重心、肝、腎等功能不全；③因各種原因無法配合本次試驗進行的患者。

1.3 患者外周血液的采集 臨床根據患者的個體差異結合其實際診療情況制定不同的采血計劃：對于住院患者均于術前1d采集清晨靜脈血7.5ml，術后1周則采集術后靜脈血7.5ml；而對于門診患者則采集清晨空腹外周靜脈血7.5ml。此外對患者術中則采集門靜脈血或腸系膜靜脈血7.5ml[3]。

1.4 儀器與試劑 研究中所用的白細胞共同抗原體等多種白細胞表面抗原免疫磁珠均采購于德國MiltenyiBiotec公司；而牛血清蛋白則采購于Sigma-Aldrich公司；磁珠分離器采購于Promega公司；BioPhoto光學顯微鏡采購于Olympus公司；細胞核熒光染料DAPI則采購于北京中山金橋生物公司。

1.5 研究方法 采取免疫磁珠負性富集和免疫熒光鑒定的方法對入選患者的CTCs進行檢測，并在患者經治療后進行定期隨訪以采集患者的臨床資料[4]。

2 結果

2.1 外周血CTCs的檢測 根據我院對入選患者外周血CTCs的檢測結果進行統計分析，結果顯示87例胰腺癌患者中CTCs在外周血中的檢出率為63.2%(55/87)，其中檢測到的個數為0～212個，平均有1.97 個/ml。其中判斷標準為抗CD45-Alexa594染色陰性，抗CK8/18/19-Alexa 488染色陽性，DAPI染色陽性，且細胞呈橢圓形或圓形，形態大于絕大部分白細胞，同時細胞核較大等[5]。見表1。

2.2 病理因素對CTCs的影響 根據我院對所有患者的臨床資料進行統計分析，結果顯示腫瘤大小、淋巴結轉移以及侵犯被膜等均和CTCs存在相關性(P<0.05)。見表2。

表1 外周血CTCs的檢測情況

2.3CTCs和患者預后的關系比較 對組織學明確診斷的54例患者進行1～15個月的隨訪，結果顯示入選患者中1年生存率為25.9%(14/54)，中位生存時間為142.3d。根據CTCs情況對患者生存情況進行分組研究，以術前是否發現有CTCs以及術前后CTCs改變情況為分組標準。見表3。

3 討論

胰腺癌是臨床上較為常見的一種消化道惡性腫瘤，同時也是目前預后最差的惡性腫瘤之一[6]。根據有關資料報道，臨床上有90%的胰腺癌起源于腺管上皮的導管腺癌[7]。由于其惡性程度高，臨床上胰腺癌患者的診療也極為困難，5年生存率不及1%[8]。其致病機制至今尚未明確，據有關調查資料顯示多與飲酒、吸煙、高蛋白飲食、遺傳因素、過量飲用咖啡以及環境污染等因素有關[9,10]。并且女性絕經前發病率遠低于男性，絕經后發病率則與男性相當；糖尿病人群中胰腺癌發病率也遠高于普通人群[11]。臨床上胰腺癌在早期不易確診，治愈率低且手術病死率較高[12]。隨著胰腺癌的部位、有無轉移、病程早晚、鄰近器官是否累積等情況的不同，其臨床表現也有所不同[13]。通常以上腹部疼痛為主要癥狀，少數患者以左右下腹或全腹疼痛為主訴，其次黃疸亦是胰腺癌的重要癥狀之一，同時還包括消瘦、乏力、腹部包塊、惡心嘔吐等消化道癥狀、癥狀性糖尿病、腹水、血栓性靜脈炎以及精神癥狀等[14,15]。目前對于胰腺癌患者的根本治療原則仍然是以手術治療為主，同時結合化療和放療等進行綜合治療[16]。但是至今為止胰腺癌的臨床治療預后仍然不容樂觀，病死率居高不下[17]。我院為了探討CTCs在胰腺癌患者中的表達及臨床病理診斷意義，選取了87例胰腺癌患者參與了本次研究。

表2 病理因素對CTCs的影響 例

表3 CTCs和患者預后的關系比較

臨床上是指進入了人體外周血液的各類腫瘤細胞，由于實體腫瘤病灶的脫落，大部分循環腫瘤細胞進入外周血后出現凋亡或被吞噬，但是還有少數能夠逃逸并且發展成為轉移灶，大大增加了惡性腫瘤患者的死亡風險[18]。因此，對于惡性腫瘤患者的CTCs檢測對患者預后判斷及療效評價和個體化治療均存在極為重要的指導作用。同時，與腫瘤組織樣本相比血壓樣更容易獲取并且可以反復采集，具有較好的臨床實用性，是臨床常規監測中比較理想的標本獲得途徑[19]。本次研究采取免疫磁珠負性富集和免疫熒光鑒定的方法對入選患者的CTCs進行檢測，并在患者經治療后進行定期隨訪以采集患者的臨床資料。根據我院對入選患者外周血CTCs的檢測結果進行統計分析，結果顯示87例胰腺癌患者中CTCs在外周血中的檢出率為63.2%(55/87)，其中檢測到的個數為0～212個，平均有1.97個/ml。通過對病理因素和CTCs的影響分析，顯示腫瘤大小、淋巴結轉移以及侵犯被膜等均和CTCs有相關性(P<0.05)；并且在CTCs和患者預后的關系分析中，顯示入選患者中1年生存率為25.9%中位生存時間為142.3d，提示了CTCs對患者的預后有極大的指示作用，CTCs檢測結果陽性者以及術后檢測CTCs數目上升者多預后不良。并且隨著胰腺癌患者進入中晚期，其外周血CTCs數目也隨之增多，更容易出現遠處轉移和術后復發的情況[20]。

綜上所述，CTCs是臨床上胰腺癌患者預后判斷的重要指標之一，對胰腺癌患者的臨床病理診斷存在非常重要的意義。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.10.017

435200 湖北省陽新縣人民醫院病理科(劉憶華、成善原、李麗、李婷)，消化內科(鄭安斌)

鄭安斌，435200 湖北省陽新縣人民醫院消化內科；

E-mail:3235750657@qq.com

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