心肌梗死患者Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)多態(tài)性檢測(cè)的意義

張明明，于悅卿，趙培，楊朝菊，高偉，李亞麗，李芳

(河北省人民醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科，2.生殖遺傳科，3.風(fēng)濕免疫科，河北 石家莊 050051)

·論 著·

心肌梗死患者Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)多態(tài)性檢測(cè)的意義

張明明1，于悅卿1，趙培1，楊朝菊1，高偉1，李亞麗2，李芳3

(河北省人民醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科，2.生殖遺傳科，3.風(fēng)濕免疫科，河北 石家莊 050051)

目的：檢測(cè)Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)突變與心肌梗死(MI)的關(guān)系。方法：檢測(cè)病例組和對(duì)照組Lp-PLA2基因多態(tài)性，Logistic回歸分析Lp-PLA2多態(tài)性與MI的關(guān)系，以及病例組和對(duì)照組血脂、血糖、Lp-PLA2、超敏C反應(yīng)蛋白(HsCRP)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)水平，分析這些指標(biāo)與MI及Lp-PLA2基因突變的關(guān)系。結(jié)果：病例組總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)、Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平及家族史陽性率高于對(duì)照組，HDLC、IL-10水平低于對(duì)照組(P<0.05)；發(fā)病1周、1個(gè)月時(shí)Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平下降，IL-10水平上升(P<0.05)。Lp-PLA2基因型是MI的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論：Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)突變可能是MI的原因。

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2基因；基因多態(tài)性；心肌梗死；遺傳易感性

研究發(fā)現(xiàn)，脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(lipoprotein associated phospholipase A2，Lp-PLA2)基因突變與冠心病有關(guān)[1-2]，但未見Lp-PLA2基因Y160X突變與心肌梗死(MI)關(guān)系的報(bào)道。本研究對(duì)487例MI患者和450例健康體檢者Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)多態(tài)性和血清Lp-PLA2、炎癥因子的差異進(jìn)行比較分析，探討Lp-PLA2基因突變與MI的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2014年4月至2016年4月在我院確診住院的MI患者487例為病例組，其中男294例，女193例，中位年齡47歲。選擇同期來我院體檢的健康人450例為對(duì)照組，男272例，女178例，中位年齡47歲。

1.2 血清采集

病例組于入院24h內(nèi)取空腹靜脈血7ml，2ml用于提取DNA，5ml分離血清，檢測(cè)血脂、血糖(Glu)、Lp-PLA2、超敏C反應(yīng)蛋白(Hs-CRP)、白介素-6(IL-6)及IL-10。入院后1 周和1個(gè)月復(fù)查上述指標(biāo)。對(duì)照組抽取空腹靜脈血7ml，檢測(cè)上述指標(biāo)。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

Beckman AU5821生化儀測(cè)定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDLC)、低密度脂蛋白(LDLC)、Glu水平。Abbott ARCHITECT plus i2000 SR電發(fā)光分析儀檢測(cè)血清Lp-PLA2。Siemens BNⅡ system蛋白分析儀檢測(cè)血清中Hs-CRP水平。ELISA法檢測(cè)IL-6 、IL-10水平，酶標(biāo)儀450nm處讀取OD值。按文獻(xiàn)[3]檢測(cè)Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)多態(tài)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。采用t檢驗(yàn)，F(xiàn)檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、Spearman相關(guān)分析、多因素Logistic回歸分析進(jìn)行處理。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組基本資料比較

病例組TC、TG、LDLC、Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平及家族史陽性率顯著高于對(duì)照組，HDLC、IL-10水平明顯低于對(duì)照組(P<0.01)；Glu水平兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

組 別n年齡/歲家族史TC/mmol·L-1TG/mmol·L-1HDLC/mmol·L-1LDLC/mmol·L-1病例組48747.9±10.3183(37.6)5.19±1.021.85±0.610.77±0.153.58±0.77對(duì)照組45048.0±11.455(12.2)4.19±0.591.07±0.291.27±0.282.43±0.42t/χ2值-0.14179.00218.17624.670-34.42328.058P值0.888<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001組 別nGlu/mmol·L-1LP-PLA2/ng·ml-1HsCRP/mg·L-1IL-6/pg·ml-1IL-10/pg·ml-1病例組4874.88±0.55384.2±75.823.2±4.6573.2±98.7192.5±35.7對(duì)照組4504.83±0.46114.9±29.85.12±0.84148.8±26.8409.6±77.5t值1.50370.49782.11888.255-55.75P值0.103<0.001<0.001<0.001<0.001

注：括號(hào)內(nèi)為百分比

2.2 兩組不同時(shí)間Lp-PLA2、炎癥因子水平比較

Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平隨疾病時(shí)間逐漸下降，IL-10水平逐漸上升。發(fā)病1個(gè)月后HsCRP、IL-6的水平下降至對(duì)照組水平，IL-10水平上升至對(duì)照組水平(P>0.05)，但Lp-PLA2的水平仍高于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

組 別nLp-PLA2/ng·ml-1HsCRP/mg·L-1IL-6/pg·ml-1IL-10/pg·ml-1病例組487 入院時(shí)384.2±75.8ac23.2±4.6ac573.2±98.7ac192.5±35.7ac 入院1周282.4±57.6ab14.6±3.3ab328.5±56.3ab289.4±33.9ab 入院1個(gè)月168.4±44.8abc5.20±0.58bc150.3±27.2bc396.2±58.8bc對(duì)照組450114.9±29.85.12±0.84148.8±26.8409.6±77.5

與對(duì)照組比較，aP<0.05；與同組入院時(shí)比較，bP<0.05；與同組入院1周時(shí)比較，cP<0.05

2.3 Lp-PLA2基因第6外顯子Y160X位點(diǎn)多態(tài)性直接測(cè)序結(jié)果

該位點(diǎn)存在等位基因T和A，有3種基因型：AA(突變純合子)、AT(突變雜合子)、TT(野生型)，見圖1。

圖1 Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)多態(tài)性情況

Fig 1 Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene

2.4 兩組Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布

病例組AA、AT基因型頻率明顯高于對(duì)照組(χ2=13.506，P=0.0002；χ2=49.997，P<0.001)；病例組A等位基因頻率(20.0 %)明顯高于對(duì)照組(6.6%)(χ2=72.383，P<0.001)，見表3。

2.5 病例組入院時(shí)血清Lp-PLA2、HsCRP、IL-6、IL-10之間的相關(guān)性

Spearman結(jié)果顯示，Lp-PLA2與HsCRP、IL-6呈正相關(guān)(r=0.4376；r=0.3152，均P<0.001)，與IL-10負(fù)相關(guān)(r=-0.2755，P<0.001)；HsCRP、IL-6與IL-10負(fù)相關(guān)(r=-0.4016；r=-0.2341，均P<0.001)。

2.6 Logistic回歸分析結(jié)果

以MI(無=0，有=1)為因變量，TC、TG、LDLC、HDLC、Lp-PLA2、HsCRP、IL-6、IL-10、Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)基因型(TT=0，AT=1；AA=2)為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示基因型與Lp-PLA2、MI有關(guān)(分別OR=9.863，95%CI4.107-21.331，P<0.001；OR=1.239，95%CI1.023-2.017，P=0.031)，見表4。

表3 兩組Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)多態(tài)性基因型和等位基因頻率分布 例

Tab 3 The frequency of genotype and alleles of Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene in case group and control group case

組 別n基因型 TT AT AA 等位基因 T A 病例組487318(65.3)143(29.4)a26(5.3)a779(80.0)195(20.0)a對(duì)照組450396(88.0)49(10.9)5(1.1)841(93.4)59(6.6)

注：括號(hào)內(nèi)為百分比

與對(duì)照組比較，aP<0.05

表4 MI危險(xiǎn)因素多因素Logistic回歸分析結(jié)果

Tab 4 Results of Logistic regression analysis for risk factors of MI

變 量B值SE值Wald值df值P值OR值95%CI基因型2.3150.37236.5701<0.0019.8634.107-21.331Lp-PLA20.1450.2314.32710.0311.2391.023-2.017TC0.1340.1950.09410.6340.9140.798-1.139TG0.0450.0810.06910.7100.8390.713-1.094HDLC-0.1210.1971.06810.4371.4370.897-1.683LDLC0.2570.2943.29610.0821.2840.821-1.934HsCRP0.4210.2342.62410.2511.2390.738-1.776IL-60.5940.3931.92710.3421.3010.637-1.835IL-10-0.3600.4123.01410.1310.6970.436-1.096

3 討 論

在MI發(fā)病中遺傳因素、炎癥因子均發(fā)揮了作用[4-5]。Lp-PLA2與冠心病及炎癥因子有關(guān)。HsCRP是反映炎癥情況的靈敏指標(biāo)[6]；IL-6具有刺激炎癥細(xì)胞的作用[7]；IL-10能下調(diào)炎癥反應(yīng)[8]。本研究病例組Lp-PLA2、HsCRP、IL-6水平高于對(duì)照組，IL-10低于對(duì)照組，提示MI的過程有炎癥反應(yīng)參與，Lp-PLA2與MI有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，病例組的TC、TG、LDLC水平高于對(duì)照組，HDLC低于對(duì)照組，提示血脂異常與MI有關(guān)。

Lp-PLA2基因位于6p21.2-p12[9]，Y160X突變導(dǎo)致氨基酸由酪氨酸(Tyr，Y)變?yōu)榻K止密碼子，突變后肽鏈不完整，空間構(gòu)象及功能都可能改變。本結(jié)果顯示，病例組AT、AG基因型以及A等位基因的分布頻率均明顯高于對(duì)照組，提示Y160X位點(diǎn)突變可能與MI的發(fā)病相關(guān)。

Logistic回歸分析結(jié)果顯示，AA基因型與MI關(guān)系密切，是MI的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示Lp-PLA2基因突變與MI有關(guān)。結(jié)果還顯示血清Lp-PLA2的水平也與MI有關(guān)，我們推測(cè)Lp-PLA2可能通過刺激IL-6、抑制IL-10而促進(jìn)了MI的發(fā)生，但具體機(jī)制還有待深入研究。

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Significance of detection the Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene in patients with myocardial infarction

ZHANG Ming-ming1，YU Yue-qing1，Zhao Pei1，YANG Chao-ju1，GAO Wei1，LI Ya-li2，LI Fang3

(1.DepartmentofMedicalLaboratory；2.DepartmentofReproductionandGenetics；3.DepartmentofRheumaticImmunology；HebeiGeneralHospital，Shijiazhuang050051，China)

Objective: To investigate the relationship between Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene and myocardial infarction(MI).Methods:Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene was tested in case group and control group.Logistic regression analysis was used to analyze relationship between Y160X site polymorphism of Lp-PLA2 gene and MI.Serum Lp-PLA2，lipids，glucose，HsCRP，IL-6，IL-10 of the 2 groups were detected simultaneously.Results:The serum levels of TC，TG，LDL-C，Lp-PLA2，HsCRP，IL-6，and positivie rate of family history in case group were higher than those in control group；while the levels of HDL-C，IL-10 were lower than those in control group (P<0.05).Levels of Lp-PLA2，HsCRP，IL-6 decreased after 1 week，1month，whereas the level of IL-10 increased (P<0.05).Genotype of Lp-PLA2 gene was risk factor of MI.Conclusions:The Y160X(T/A) site polymorphism of LP-PLA2 gene may be one pathogeny of MI.

Lp-PLA2 gene；gene polymorphism；myocardial infarction；genetic susceptibility

2016-08-07

2016-08-29

河北省科技支撐項(xiàng)目資助項(xiàng)目(16277771D)

張明明(1976-)，女，河北昌黎人，副主任技師。E-mail:zhangmm197612@126.com

張明明，于悅卿，趙培，等.心肌梗死患者Lp-PLA2基因Y160X位點(diǎn)多態(tài)性檢測(cè)的意義[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2017，36(1)：40-43.

R446.1；R541.4

A

1671-6264(2017)01-0040-04

10.3969/j.issn.1671-6264.2017.01.010