雙波長分光光度法測定化橘紅中總黃酮的含量

李瓊霞 黎曉欣 廖 輝

1．廣州市越秀區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣東 廣州 510055；2.廣東省佛山紫云軒藥業(yè)有限公司，廣東 佛山 528000

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雙波長分光光度法測定化橘紅中總黃酮的含量

李瓊霞1黎曉欣1廖 輝2

1．廣州市越秀區(qū)疾病預(yù)防控制中心，廣東 廣州 510055；2.廣東省佛山紫云軒藥業(yè)有限公司，廣東 佛山 528000

目的：建立一種測定化橘紅中的總黃酮含量時能有效消去樣品溶液背景干擾的方法。方法：甲醇超聲提取總黃酮；最大吸收波長283nm為測定波長，325nm為參比波長，雙波長分光光度法測定總黃酮含量。結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)曲線在0～80μg濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9999；方法穩(wěn)定性在0～120min良好，RSD%為1.1%；三個濃度水平加樣回收率在98%～103%之間。結(jié)論：本方法簡單易行，適用于化橘紅產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

雙波長分光光度法；化橘紅總黃酮；含量測定

化橘紅為蕓香科植物化州柚Citusgrandis‘to-mentosa’或柚Citusgrandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮。在化州地區(qū)，按照化州柚植物形態(tài)和果實(shí)形態(tài)化橘紅被分為正毛果和副毛果等類別[1]。正毛果為正毛橘紅樹果實(shí)，其形狀球形，多心室，幼果密披絨毛；副毛果為副毛橘紅樹果實(shí)，其形狀與正毛化州橘紅差異不大，但果實(shí)的絨毛比正毛化州橘紅少,香氣稍淡，功效亦遜于正毛橘紅果。黃酮類成分是化橘紅的主要有效成分[2]，為準(zhǔn)確測定化橘紅中總黃酮的含量，本文選取兩種化橘紅果實(shí)正毛果和副毛果進(jìn)行研究，前期研究中采用多種方法進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)很難消去樣品中的背景干擾?？傸S酮提取液組成復(fù)雜，而且提取過程中不可避免的帶入樣品中的天然色素等雜質(zhì)成分，雖然經(jīng)過分離，但其中仍含有很難分離的干擾性雜質(zhì)，很大程度的影響了總黃酮含量的測定，筆者通過反復(fù)的試驗(yàn)摸索，發(fā)現(xiàn)用雙波長分光光度法[2]測定樣品中總黃酮的含量，能有效的消去雜質(zhì)成分的干擾，為客觀評價(jià)化橘紅中總黃酮含量提供依據(jù)。

AVEVA的解決方案不僅適用于新建成的工廠，對于舊有的工廠，AVEVA也有相應(yīng)的措施。用戶可以使用AVEVA DCS系統(tǒng)，該系統(tǒng)可以通過激光掃描收集數(shù)據(jù)，同時可以對工廠進(jìn)行數(shù)據(jù)監(jiān)控，對可能出現(xiàn)的故障提前預(yù)知，避免過早或過晚對設(shè)備進(jìn)行維護(hù)，可以減少不必要的損失。這種智能化的數(shù)據(jù)處理方式，等同于智能化工廠。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)的是對于已建工廠來講，數(shù)字化資產(chǎn)的旅程是應(yīng)該被完成的，并且是能夠被完成的。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-2550雙光束紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；HN1006超聲波清洗器(華南超聲設(shè)備廠)；MILLIPORE超純水機(jī)(密理博公司)；BP211D電子分析天平(德國賽多利斯公司)。

1.2 材料 柚皮苷對照品(批號：110722-201613，中國食品藥品檢定研究院，含量94.3%)；甲醇(分析純)?；萜蕉ㄦ?zhèn)和寶山鎮(zhèn)兩個產(chǎn)區(qū)的正毛果與副毛果，由佛山紫云軒藥業(yè)采購提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷對照品8.43mg 置100mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含柚皮苷84μg)。2.1.2 供試品溶液的制備 稱取供試品約0.2g置離心管中，加8mL甲醇，超聲60min，取出放冷，加甲醇稀釋定容至10mL，搖勻?yàn)V過，精密吸取續(xù)濾液0.5mL至25mL比色管，加70%的甲醇定容至刻度。2.2 測定波長的選擇 用70%的甲醇做空白，分別對對照品溶液和供試品溶液在200～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，對照品溶液和供試品溶液的光譜圖基本一致，在283nm(±1nm)有最大吸收(如圖1)，但由于樣品和對照品的等吸收點(diǎn)離樣品最大吸收比較近，待測組分在此兩點(diǎn)的吸光度差值不夠大，因此選擇樣品右下側(cè)的一段光譜曲線平緩、斜率變化較小的波長處作為參比波長，據(jù)此，選取最大吸收283nm作為測定總黃酮的測定波長，選擇下端的吸收點(diǎn)325nm作為參比波長。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0mL置10mL比色管中，用70%甲醇定容至刻度，搖勻，制成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。以70%甲醇為空白，于283nm、325nm處掃描測定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，兩點(diǎn)吸收差值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：y=0.02564x+0.00560，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，表明對照品在0～80μg濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度考察 取同一份對照品溶液，照“2.3”項(xiàng)下方法連續(xù)測定6次，測得對照溶液平均濃度為39.48μg/mL，其RSD%為0.02% ，表明檢測精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性考察 取同一份供試品溶液分別在0、10、30、60、90、120min按照“2.3”項(xiàng)下方法測定，結(jié)果總黃酮含量平均值4.50%，其RSD%為1.1%，表明供試品溶液在2h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性考察 取同一批供試品，每份約0.2g，精密稱定，按照供試品溶液制備方法平行制備樣品，按照“2.3”項(xiàng)下方法測定吸光度，結(jié)果總黃酮含量平均值4.46%，其RSD%為2.0%，表明該方法有良好的重現(xiàn)性。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 隨機(jī)抽取兩份供試品，每個樣稱三份，每份約0.2g，分別進(jìn)行三個濃度水平加標(biāo)，按照供試品溶液制備方法制備樣品，按照“2.3”項(xiàng)下方法測定吸光度，結(jié)果如表1。測得加標(biāo)回收率在98%～103%之間，其RSD%為1.8%，表明方法回收率高，準(zhǔn)確度好。

表1 加樣回收率試驗(yàn) (n=6)

2.8 樣品中總黃酮含量測定 取十批化橘紅樣品，按照供試品溶液制備方法制備樣品，再按照2.3項(xiàng)下方法測定吸光度,計(jì)算供試液濃度C，然后按下式計(jì)算總黃酮含量。

總黃酮含量=(C×10×25/0.5)/(m×1000000)× 100%。結(jié)果見表2。

如圖2所示，將滑動軸承內(nèi)孔表面沿著圓周方向展開進(jìn)行劃分網(wǎng)格，圓周方向φ劃分成m格，步長(每格寬度)為Δφ=2π/m；軸向方向λ劃分成n格，步長為Δλ=2/n；用(i，j)表示每個節(jié)點(diǎn)位置，Pi，j表示該節(jié)點(diǎn)壓力。

表2 10份樣品中總黃酮含量

3 討論

化橘紅中的總黃酮主要以柚皮苷的形式存在，其含有多個酚羥基，受光照射或暴露在空氣中，容易變色[3]，當(dāng)用乙醇提取時，會將色素及其他一些組分一起提取出來，這些色素成分很難用石油醚提取除去，而且黃酮中的天然組成復(fù)雜而多樣，難于完全分離，這種多組分混合溶液匹配的對照溶液也難找到，這些因素都會干擾比色測定，用單波長法測定結(jié)果很容易偏高。表2數(shù)據(jù)顯示，用雙波長分光光度法測定10份化橘紅樣品中總黃酮含量，結(jié)果正毛果中總黃酮含量總體高于副毛果，該方法很好的區(qū)分了化橘紅兩個不同品種的果實(shí)。試驗(yàn)結(jié)果表明：用雙波長分光光度法測定化橘紅中的總黃酮含量時，能很好的扣去樣品提取液中的背景干擾，避免檢測結(jié)果偏高的現(xiàn)象。該測定方法操作簡單方便，方法準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性、線性關(guān)系、回收率均良好，在快速篩選優(yōu)質(zhì)化橘紅類產(chǎn)品能發(fā)揮很好的作用。

[1]李潤唐，李映志，汪永保，等.中藥“化橘紅”原料植物化州柚種質(zhì)資源初步研究[J].中國南方果樹，2012，41(4):53-55.

[2] 王雯，沈勇根，上官新晨，等.化橘紅總黃酮純化的工藝研究[J].食品工業(yè)科技，2013，34(7):192-197.

[3] 陳云，封京京.雙波長分光光度法測定油菜蜂蜜中總黃酮含量的研究[J].中國釀造，2016，35(2):133-134.

Determination of Total Flavonoids in Exocarpium Citri Grandis By Double-wavelength Spectrophotometry

LI Qiongxia1LI Xiaoxin1LIAO Hui2

1.Guangzhou Yuexiu District Center for Disease Control and Prevention，Guangzhou 510055，China；2.Foshan Ziyunxuan Pharmaceutical Co.,Ltd,Foshan 528000,China

Objective To establish a method for the determination of the total flavonoids content in exocarpium citri grandis and can effectively eliminate the sample solution background interference.Methods The total flavonoids were extracted by ultrasonic method in Methanol. The maximum absorption wavelength was 283nm, the wavelength was 325nm, the content of total flavonoids was determined by standard curve method.Results The calibration curve was linear in the concentration range of 0～80μg, the correlation coefficient was 0.9999.The stability of the method was good at 0～120min andRSD% was 1.1%.The recoveries of the three levels were 98～103% .Conclusion The method is simple and can be used for the quality control of the exocarpium citri grandis.

Double-wavelength Spectrophotometry；total flavonoids in exocarpium citri grandis；Content determination

廣州市越秀科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015-WS-021)。

李瓊霞(1979-)，女，漢族，碩士，主管藥師，研究方向?yàn)樗幬镔|(zhì)量控制。E-mail：624532408@qq.com

R284.1

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1007-8517(2017)09-0011-03

2017-03-07 編輯：陶希睿)