UPLC—Q—TOF/MSE結(jié)合診斷離子過(guò)濾方法快速分析大黃中酚類成分

王晴+盧志威+劉月紅+王美玲+付爽+張清清+趙慧真+張志新+謝紫燁+黃政海+于紅紅+周文卷+高曉燕

[摘要] 采用超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF/MSE）結(jié)合診斷離子過(guò)濾方法對(duì)掌葉大黃中的酚類成分進(jìn)行快速分析鑒定。首先，負(fù)離子模式下對(duì)酚類代表性單體沒(méi)食子酸、（+）-兒茶素、（-）-表兒茶素、（-）-表兒茶素-3-O-沒(méi)食子酸酯和原花青素B2進(jìn)行分析，綜合文獻(xiàn)報(bào)道，總結(jié)質(zhì)譜裂解途徑，確定診斷離子；然后，應(yīng)用診斷離子過(guò)濾快速篩選掌葉大黃提取液中的酚類成分，結(jié)合保留時(shí)間、質(zhì)譜碎片信息、裂解行為和精確質(zhì)量數(shù)（計(jì)算分子式）對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。在掌葉大黃中共鑒定了63個(gè)酚類成分（36個(gè)簡(jiǎn)單酚酸類化合物、8個(gè)類黃酮類化合物和19個(gè)鞣質(zhì)類化合物），其中包括6個(gè)潛在的新化合物。診斷離子過(guò)濾方法可對(duì)大黃中酚類成分進(jìn)行快速分析，并完善了中藥大黃的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞] 超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF/MSE）； 診斷離子； 掌葉大黃； 酚類

[Abstract] Diagnostic ions filter method was used to rapidly detect and identify the phenolic compounds in Rheum palmatum based on ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry （UPLC-Q-TOF/MSE）. The representative authentic standards of phenolic compounds， including gallic acid， （+）-catechin， （-）-epicatechin， （-）-epicatechin-3-O-gallate and procyanidin B2， were subjected to analysis by UPLC-Q-TOF/MSE system with negative ion mode. Fragmentation patterns of each standard were summarized based on assigned fragment ions. The prominent product ions were selected as diagnostic ions. Subsequently， diagnostic ions filter was employed to rapidly recognize analogous skeletons. Combined with retention time， accurate mass， characteristic fragments and previous literature data， the structures of the filtered compounds were identified or tentatively characterized. A total 63 phenolic compounds （36 phenolic acid derivatives， 8 flavonoid derivatives and 19 tennis derivatives） in R. palmatum were identified， including 6 potential new compounds. The method of diagnostic ions filter could rapidly detect and identify phenolic compounds in R. palmatum This study provides a method for rapid detection of phenolic compounds in R. palmatum and is expected to complete the material basis of rhubarb.

[Key words] liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry （UPLC-Q-TOF/MSE）； diagnostic ions； Rheum palmatum； phenolic compounds

大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃R. tanguticum Maxim.ex Balf.或藥用大黃R. offcihale Baill.的干燥根和根莖[1]。大黃具有瀉下攻積，清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)，利濕退黃之功效。大黃所含化合物類型多樣，結(jié)構(gòu)典型，特點(diǎn)明確，除了被認(rèn)為是主要致瀉成分的蒽醌類和蒽酮類成分被報(bào)道較多外，其他類成分鮮有研究。根據(jù)本課題組前期對(duì)唐古特大黃的化學(xué)成分的充分研究發(fā)現(xiàn)，大黃中含有大量酚類成分[2]，根據(jù)結(jié)構(gòu)可分為簡(jiǎn)單酚酸類、類黃酮類和鞣質(zhì)類成分[3]，它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)上具有一定的相似性。大黃中的簡(jiǎn)單酚酸類衍生物通常是以沒(méi)食子酸、對(duì)羥基苯甲酸或?qū)αu基苯烯酸為結(jié)構(gòu)單元的苷類成分；類黃酮類成分主要為黃烷-3-醇，另外還有少數(shù)槲皮素類、山柰酚類和橙皮素類衍生物；鞣質(zhì)類成分為沒(méi)食子酸和/或黃烷-3-醇互相聚合而成的聚合物，如原花青素類成分[4-5]。

診斷離子過(guò)濾方法[6-9]是利用高分辨質(zhì)譜提供的離子精確質(zhì)量信息、基于同類化學(xué)成分的質(zhì)譜裂解特點(diǎn)提出的中藥化學(xué)成分快速篩查手段，非常適合結(jié)構(gòu)類似物的搜索。不同于以往查閱文獻(xiàn)建立化學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)方法，診斷離子過(guò)濾克服了難以發(fā)現(xiàn)潛在新化合物的局限性，從化合物質(zhì)譜裂解碎片信息入手推斷化合物的整體結(jié)構(gòu)。

本研究針對(duì)大黃中酚類成分結(jié)構(gòu)單元固定、質(zhì)譜裂解規(guī)律明顯的特點(diǎn)，采用診斷離子過(guò)濾方法對(duì)掌葉大黃中的酚類化合物進(jìn)行挖掘分析。該方法包括3步：①對(duì)代表性酚類成分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行UPLC-Q-TOF/MSE檢測(cè)，獲得高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)，同時(shí)結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，總結(jié)質(zhì)譜裂解規(guī)律，確定了酚類成分的診斷離子；②根據(jù)診斷離子快速識(shí)別酚類化合物的結(jié)構(gòu)類型；③結(jié)合保留時(shí)間、質(zhì)譜碎片信息、裂解行為、精確相對(duì)分子質(zhì)量（計(jì)算分子式）和在線數(shù)據(jù)庫(kù)（ChemSpider，PubChem，SciFinder）對(duì)化合物進(jìn)行進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)鑒定。本研究對(duì)大黃中除蒽醌類和蒽酮類成分外的酚類成分進(jìn)行分析，為大黃藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了參考。

1 材料

Waters-ACQUITYTM I-Class SYNAPT G2-Si MS超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Waters公司產(chǎn)品，配有電噴霧離子源（ESI）及MassLynx 4.1工作站），UNIFITM 1.7軟件系統(tǒng)（美國(guó)Waters公司產(chǎn)品）。

掌葉大黃藥材（野生），由北京大學(xué)中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心提供，經(jīng)屠鵬飛教授鑒定為蓼科植物掌葉大黃R. palmatum的干燥根及根莖。沒(méi)食子酸、（+）-兒茶素、（-）-表兒茶素、（-）-表兒茶素-3-O-沒(méi)食子酸酯、原花青素B2對(duì)照品：購(gòu)自成都普瑞法科技開發(fā)有限公司。甲醇（HPLC級(jí)）、乙腈（LC-MS級(jí)）、甲酸（LC-MS級(jí)）：賽默飛世爾科技（美國(guó)）有限公司；色譜用水為屈臣氏蒸餾水。

2 方法

2.1 樣品制備

將大黃藥材粉碎，粉末過(guò)20目篩。準(zhǔn)確稱取大黃藥材粉末2.5 g，置具塞錐形瓶中，加入70%甲醇25 mL，搖勻，稱重，超聲30 min，取出放冷，再次稱重，70%甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，12 000 r·min^-1離心10 min，取上清液。甲醇稀釋5倍，取2 μL進(jìn)樣分析。另分別稱取各對(duì)照品1.5 mg置于25 mL量瓶中，用質(zhì)譜級(jí)甲醇定容，4 ℃儲(chǔ)存待用。

2.2 色譜條件

色譜柱Waters ACQUITYTM BEH C18 （2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流動(dòng)相0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B），柱溫40 ℃，樣品室溫度4 ℃，流速0.2 mL·min^-1，進(jìn)樣量2 μL。洗脫程序0～2 min，2% B； 2～3 min，2%～20% B； 3～4 min，20% B； 4～5 min，20%～23% B； 5～6 min，23%～30% B； 6～8 min，30% B； 8～9.5 min，30%～50% B； 9.5～12 min，50%～100% B； 12～13 min，100% B； 13～13.5 min，100%～2% B； 13.5～15 min，2% B。

2.3 質(zhì)譜條件

電噴霧電離離子源（ESI），負(fù)離子模式掃描；掃描范圍m/z 100～1 200；毛細(xì)管電壓和錐孔電壓分別為3 kV，40 V；離子源溫度100 ℃；錐孔氣流速50 L·h^-1；去溶劑氣溫度400 ℃；去溶劑氣流速800 L·h^-1；Lockmass溶液為亮氨酸-腦啡肽溶液，采集不校正。低能量掃描trap電壓為6 V，高能量掃描trap電壓為10～65 V。數(shù)據(jù)采集模式為continuum模式。

3 結(jié)果與討論

3.1 大黃中酚類成分質(zhì)譜裂解規(guī)律

根據(jù)已有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，大黃中酚類成分的基本結(jié)構(gòu)主要包括沒(méi)食子酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸、對(duì)羥基苯丙酸、兒茶素/表兒茶素和原花青素類，少數(shù)槲皮素（圖1）。本研究對(duì)負(fù)離子模式下酚類代表性單體沒(méi)食子酸、（+）-兒茶素、（-）-表兒茶素、（-）-表兒茶素-3-O-沒(méi)食子酸酯和原花青素B2進(jìn)行分析，根據(jù)實(shí)測(cè)碎片信息并結(jié)合參考文獻(xiàn)總結(jié)質(zhì)譜裂解規(guī)律，確定了它們的診斷離子（表1），并將裂解過(guò)程中的其他產(chǎn)物離子作為輔助診斷信息。

大黃中的簡(jiǎn)單酚酸類成分基本結(jié)構(gòu)主要是沒(méi)食子酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸、對(duì)羥基苯丙酸，它們自身的質(zhì)譜裂解行為較為簡(jiǎn)單，主要為取代基羧基和羥基的丟失，表現(xiàn)為脫羧基 （-44）和脫水（-18），如沒(méi)食子酸（圖2）。簡(jiǎn)單酚酸類成分以葡萄糖苷形式存在，并常常與其他成分的羥基結(jié)合為酯鍵形成酚酸衍生物，在負(fù)離子掃描模式下的質(zhì)譜裂解過(guò)程通常表現(xiàn)出基本結(jié)構(gòu)整體丟失、酯鍵斷裂丟失取代基或產(chǎn)生去質(zhì)子化的簡(jiǎn)單酚酸基本母核。

大黃中最主要的類黃酮類成分是黃烷-3-醇，代表性物質(zhì)為兒茶素和表兒茶素，槲皮素類衍生物[10]也有報(bào)道。它們以游離和葡萄糖苷2種形式存在。通過(guò)對(duì)兒茶素和表兒茶素對(duì)照品進(jìn)行分析，總結(jié)了它們的質(zhì)譜裂解規(guī)律（圖3）。兒茶素/表兒茶素的質(zhì)譜裂解過(guò)程分別發(fā)生在A環(huán)、B環(huán)和C環(huán)：首先，C環(huán)的1，4鍵斷裂（1，4A-）、1，3鍵斷裂（1，3A-）、1，2鍵斷裂（1，2A-）會(huì)產(chǎn)生A環(huán)碎片；其次，兒茶素/表兒茶素失去1分子H2O后，會(huì)相繼發(fā)生B環(huán)丟失、丟失C2H2O（B環(huán)）或丟失C3O2（A環(huán)）；此外，兒茶素/表兒茶素還可不經(jīng)過(guò)失水直接產(chǎn)生[M-H-2C2H2O]-和[M-H-C6H6O2]-（丟失B環(huán)）產(chǎn)物離子；兒茶素/表兒茶素經(jīng)A環(huán)失去CO2后，產(chǎn)生丟H2O，C2H2O或C3H6O碎片的產(chǎn)物離子。

大黃中的鞣質(zhì)類成分主要分為多個(gè)沒(méi)食子酸通過(guò)酯鍵相連而成的可水解鞣質(zhì)、兒茶素/表兒茶素經(jīng)碳碳雙鍵聚合而成的聚合鞣質(zhì)和聚合鞣質(zhì)與水解鞣質(zhì)結(jié)合形成的復(fù)合鞣質(zhì)3類。通過(guò)對(duì)代表性成分原花青素B2（圖4）分析并總結(jié)相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，它們的質(zhì)譜裂解規(guī)律與其結(jié)構(gòu)單元相似，主要是沒(méi)食子酸基團(tuán)丟失、兒茶素/表兒茶素B環(huán)RDA裂解（1，3A-）和黃烷醇間的C-C鍵斷裂產(chǎn)生兒茶素/表兒茶素及相關(guān)碎片[11-13]。

3.2 酚類成分鑒定

為了獲得最佳的檢測(cè)條件，對(duì)UPLC-Q-TOF/MSE的液相洗脫程序和質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正離子掃描模式相比，負(fù)離子掃描模式下的大黃提取液的色譜圖顯示的色譜峰個(gè)數(shù)更多、峰強(qiáng)度更大，質(zhì)譜圖中目標(biāo)成分質(zhì)譜碎片更豐富，因此最終選擇負(fù)離子掃描模式對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。

利用已確定的實(shí)驗(yàn)條件對(duì)掌葉大黃提取液進(jìn)行

UPLC-Q-TOF/MSE分析（圖5）。利用總結(jié)的診斷離子，對(duì)掌葉大黃藥材中的酚類成分進(jìn)行快速篩選，根據(jù)一級(jí)和多級(jí)質(zhì)譜碎片信息、精確分子質(zhì)量及計(jì)算的元素組成，結(jié)合同屬植物化學(xué)成分的文獻(xiàn)研究，對(duì)潛在酚類成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。同時(shí)，ChemSpider，PubChem，SciFinder在線數(shù)據(jù)庫(kù)用于確認(rèn)潛在的新化合物。共在大黃藥材中鑒定出63個(gè)酚類成分（表2）。

3.2.1 簡(jiǎn)單酚酸類 采用診斷離子方法共檢出簡(jiǎn)單酚酸類成分19個(gè)（表2）。從表1可見(jiàn)，大黃中酚酸類成分多數(shù)是對(duì)香豆酸（p-coumaric acid）、阿魏酸（ferulic acid）、對(duì)羥基苯甲酸（p-hydroxybenzonic acid）與沒(méi)食子酸（gallic acid）脫水縮合形成的酯，其他成分的母核為沒(méi)食子酸；以上均以葡萄糖苷形式存在。

化合物6，8和12產(chǎn)生相同的母離子[M-H]- m/z 331.06 （C13H16O10），并產(chǎn)生m/z 169.01，125.02沒(méi)食子酸的特征碎片離子。因此推測(cè)三者均為沒(méi)食子酸-O-葡萄糖苷?；衔?較化合物6多162.052 9 （C6H10O5），并同樣產(chǎn)生m/z 331.066 9，169.013 6碎片離子；其他碎片離子（m/z 151.002 9[M-H-Glc-H2O]-，125.023 8[M-H-Glc-CO2]-）也顯示該化合物具有沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)。因此，化合物1被鑒定為沒(méi)食子酸-O-二葡萄糖苷，化合物4，5，7，9為它的同分異構(gòu)體。

從化合物24的二級(jí)質(zhì)譜圖可見(jiàn)，碎片離子m/z 163.002 9由母離子m/z 325.092 4通過(guò)丟失1分子葡萄糖產(chǎn)生，判斷該化合物為對(duì)香豆酸-O-葡萄糖苷，碎片離子m/z 119.033 9由香豆酸丟失-CO2產(chǎn)生?；衔?4的母離子[M-H]-為m/z 477.103 3 （C22H22O12），并具有對(duì)香豆酸母核中性丟失行為（m/z 313.055 5[M-H-C9H8O3]-）和沒(méi)食子酸特征碎片離子m/z 169.013 7，因此推測(cè)該化合物為對(duì)香豆酸-O-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷；由碎片m/z 331.069 1[M-H-C9H6O2]-和m/z 315.054 2[M-H-C6H10O5]-推測(cè)對(duì)香豆酸和葡萄糖分別連接在沒(méi)食子酸的羥基（-OH）上。由相似的質(zhì)譜碎片信息推測(cè)化合物39和44同為對(duì)香豆酸-O-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷?；衔?5的母離子[M-H]-為m/z 629.114 1，由碎片離子m/z 467.070 6[M-H-Glc]-，465.067 1[M-H-Glc-C9H6O2]-，459.090 9[M-H-Glc-C7H6O5]-等推測(cè)該化合物結(jié)構(gòu)為1分子對(duì)香豆酸、1分子沒(méi)食子酸和1分子葡萄糖分別通過(guò)酯鍵與1分子沒(méi)食子酸相連（對(duì)香豆酸-O-二沒(méi)食子酰-葡萄糖苷），化合物48為它的同分異構(gòu)體。

化合物29的母離子為m/z 355.102 2[M-H]-（C16H20O9），經(jīng)中丟失葡萄糖產(chǎn)生阿魏酸診斷離子m/z 193.050 3，碎片m/z 179.070 7[M-H-Glc-CH2]-，149.912 4[M-H-Glc-CO2]-和m/z 134.036 2[M-H-Glc-CH3]-均為阿魏酸的特征離子，因此，推測(cè)該化合物為阿魏酸-O-葡萄糖苷。

化合物37所顯示的質(zhì)譜裂解行為顯示具有葡萄糖（C6H10O5）丟失（m/z 345.077 4）、阿魏酸母核（C10H10O4）丟失（m/z 313.055 5）、阿魏酸取代基（C10H8O3）丟失（m/z 331.068 7）的產(chǎn)物碎片和沒(méi)食子酸的特征離子（m/z 169.013 8，151.003 0，125.023 9），因此將該化合物鑒定為阿魏酸-O-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷。同理，推測(cè)化合物42和46為化合物37的同分異構(gòu)體，并于在線數(shù)據(jù)庫(kù)中未檢索到匹配結(jié)果，因此推測(cè)為潛在的新化合物。

化合物33的母離子為m/z 451.087 2[M-H]- （C20H20O12），281.044 2[M-H-C7H6O5]-，289.071 0[M-H-Glc]-，143.049 9[M-H-C7H6O5-C7H6O3]-推測(cè)該結(jié)構(gòu)具有葡萄糖、對(duì)羥基苯甲酸和沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)單元，m/z 151.003 4推測(cè)為沒(méi)食子酸丟失1分子H2O所產(chǎn)生。因此，推測(cè)該化合物為對(duì)羥基苯甲酸-O-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷。

此外，對(duì)香豆酸、阿魏酸、對(duì)羥基苯甲酸和沒(méi)食子酸也常常單獨(dú)或互相結(jié)合作為其他酚類成分的取代基，因此，使用診斷離子過(guò)濾方法并結(jié)合精確分子質(zhì)量、碎片離子信息鑒定得到17個(gè)簡(jiǎn)單酚酸衍生物（化合物35，36，43，49，51～63），其中，化合物35，61，62在在線數(shù)據(jù)庫(kù)中未檢索到匹配結(jié)構(gòu)，因此推斷其為潛在的新化合物。以化合物36為例說(shuō)明化合物鑒定過(guò)程?；衔?6的母離子為m/z 671.176 1[M-H]- （C36H32O13），碎片離子m/z 169.013 8[C7H6O5-H]-，151.003 0[C7H6O5-H-H2O]-，125.023 9[C7H6O5-H-CO2]-顯示具有沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)；碎片離子m/z 389.065 6[C14H12O3+Glc-H-CO2]-，361.071 6[C14H12O3+Glc-H-CO2]-，227.034 4[C14H12O3-H]-，183.028 1[C14H12O3-H-CO2]-顯示具有白藜蘆醇-O-葡萄糖苷結(jié)構(gòu)；碎片離子m/z 389.065 6由母離子丟失沒(méi)食子?；虲9H6O（推測(cè)為肉桂?；┒茫凰槠x子m/z 509.120 7由白藜蘆醇結(jié)構(gòu)丟失CO2、沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)丟失H2O產(chǎn)生；根據(jù)以上分析，將化合物36鑒定為白藜蘆醇-O-肉桂酰-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷。

3.2.2 類黃酮 提取診斷離子m/z 289.07并輔助鑒定信息，共檢出兒茶素/表兒茶素類成分7個(gè)，此外，經(jīng)沒(méi)食子酸類診斷離子推斷得到1個(gè)槲皮素衍生物（表2）。

化合物22保留時(shí)間為3.01 min，母離子為m/z 289.071 7[M-H]-（C15H14O6），經(jīng)與對(duì)照品比對(duì)相同確定為（+）-兒茶素；其碎片離子m/z 245.081 3[M-H-CO2]-，227.070 4[M-H-CO2-H2O]-，203.070 7[M-H-CO2-C2H2O]-，187.039 3[M-H-CO2-C3H6O]-推測(cè)均由A環(huán)失去CO2后所產(chǎn)生，碎片離子m/z 229.049 4[M-H-H2O-C2H2O]-和161.059 8[M-H-H2O-C6H6O2]-由母核丟失1分子H2O后所產(chǎn)生，m/z 205.049 9由母核丟失2分子C2H2O產(chǎn)生，m/z 179.034 3由母核丟失B環(huán)（C6H6O2）產(chǎn)生，m/z 137.023 8由C環(huán)1，4鍵斷裂產(chǎn)生。同理，經(jīng)與對(duì)照品比對(duì)，化合物16確定為兒茶素的同分異構(gòu)體（-）-表兒茶素?；衔?，14和17的母離子均為m/z 451.12[M-H]- （C21H24O11），并具有兒茶素/表兒茶素準(zhǔn)分子離子峰m/z 289.070 8，推測(cè)由中性丟失葡萄糖基產(chǎn)生，因此，鑒定三者為兒茶素/表兒茶素的葡萄糖苷。

化合物41保留時(shí)間為3.76 min，母離子為m/z 441.082 3[M-H]- （C22H18O10），除產(chǎn)生兒茶素/表兒茶素特征碎片外，還產(chǎn)生碎片m/z 169.013 8，125.023 9，提示存在沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)。經(jīng)與對(duì)照品比對(duì)，將其確定為（-）-表兒茶素-3-O-沒(méi)食子酸酯。化合物21母離子為m/z 603.134 4[M-H]- （C28H28O15），較化合物41正好相差162.052 1，碎片離子m/z 451.036 8提示該化合物可能發(fā)生沒(méi)食子酸（C7H6O5）中性丟失，m/z 289.071 7，245.081 3，227.070 4等碎片離子提示具有兒茶素/表兒茶素結(jié)構(gòu)單元，因此，將化合物21鑒定為兒茶素-O-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷/表兒茶素-O-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷。

化合物26母離子為m/z 615.098 7[M-H]- （C28H24O16），碎片離子m/z 169.013 9顯示具有沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)單元，由母離子丟失沒(méi)食子酰基產(chǎn)生的碎片離子m/z 463.094 9[M-H-C7H4O4]-的計(jì)算分子式為C21H20O12，推測(cè)為槲皮素-O-葡萄糖苷結(jié)構(gòu)。因此，化合物26暫時(shí)鑒定為槲皮素-O-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷。

3.2.3 鞣質(zhì)類 大黃中的可水解鞣質(zhì)同樣由沒(méi)食子酸診斷離子m/z 169.013 7過(guò)濾所得?；衔?母離子為m/z 483.077 1[M-H]- （C20H20O14），經(jīng)丟失葡萄糖基產(chǎn)生碎片離子m/z 321.041 7[M-H-Glc]-，繼續(xù)丟失沒(méi)食子酰基產(chǎn)生沒(méi)食子酸準(zhǔn)分子離子峰m/z 169.013 6[M-H-Glc-C7H4O4]-，其他碎片離子m/z 465.085 2[M-H-H2O]-，439.085 1[M-H-CO2]-，151.002 9[M-H-Glc-C7H4O4-H2O]-，125.023 8[M-H-Glc-C7H4O4-H2O-CO2]-均由沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)產(chǎn)生。因此，將化合物2鑒定為di-O-galloyl-glucose。同理，將化合物13和18鑒定為沒(méi)食子酸-O-沒(méi)食子酰-葡萄糖苷，化合物25鑒定為沒(méi)食子酸-O-二沒(méi)食子酰-葡萄糖苷。

通過(guò)提取原花青素類成分的共有碎片結(jié)構(gòu)m/z 425.086 7，407.076 1，結(jié)合精確相對(duì)分子質(zhì)量、碎片信息，共鑒定出15個(gè)原花青素類成分?；衔?1的母離子為m/z 593.128 7[M-H]-，計(jì)算分子式為C30H26O13，推測(cè)可能為原花青素或其同分異構(gòu)體，碎片信息歸屬如下：因丟失H2O產(chǎn)生碎片離子m/z 575.120 3[M-H-H2O]-，隨后連續(xù)丟失C2H2O或CO2碎片產(chǎn)生m/z 407.076 3[M-H-H2O-4C2H2O]-，405.102 6[M-H-H2O-CO2-3C2H2O]-；由RDA裂解產(chǎn)生碎片離子m/z 421.019 6[M-H-H2O-C7H6O4]-?；衔?5，30與化合物15具有相同的母離子和相似的質(zhì)譜裂解行為，因此也將其鑒定為原花青素或其同分異構(gòu)體。經(jīng)與對(duì)照品比對(duì)，將化合物23確定為原花青素B2。根據(jù)相似的質(zhì)譜裂解行為，將化合物19和31推斷為原花青素二聚體，因無(wú)法判斷手性碳構(gòu)型，因此二者均暫時(shí)鑒定為原花青素B或其同分異構(gòu)體，將化合物10，20和28暫時(shí)鑒定為原花青素C或其同分異構(gòu)體。此外，化合物27，32，38，40，47和50除了顯示原花青素二聚體的特征碎片外，還出現(xiàn)C7H6O5中性丟失行為，推測(cè)具有沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)，因此結(jié)合精確分子量及計(jì)算分子式將它們鑒定為原花青素B-O-沒(méi)食子酸酯或原花青素B-O-二沒(méi)食子酸酯。

4 討論

本文采用診斷離子過(guò)濾方法對(duì)UPLC-Q-TOF/MSE檢測(cè)的掌葉大黃提取液中的酚類化合物進(jìn)行挖掘。代表性酚類成分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的實(shí)測(cè)高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，確定了酚類成分的診斷離子和輔助診斷信息，確?；衔锝Y(jié)構(gòu)單元的準(zhǔn)確性；同時(shí)，結(jié)合保留時(shí)間、質(zhì)譜碎片信息、裂解行為和精確質(zhì)量數(shù)（計(jì)算分子式）對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；ChemSpider，PubChem，SciFinder在線數(shù)據(jù)用于確認(rèn)潛在的新化合物。本研究共鑒定了63個(gè)酚類成分，包括36個(gè)簡(jiǎn)單酚酸類化合物，8個(gè)類黃酮類化合物和19個(gè)鞣質(zhì)類化合物，其中有6個(gè)為潛在的新化合物。本研究對(duì)大黃中除蒽醌類和蒽酮類成分外的酚類成分進(jìn)行分析，有助于大黃化學(xué)成分研究的全面性，為中藥大黃藥效物質(zhì)研究提供物質(zhì)參考。

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[責(zé)任編輯 丁廣治]