EDTA依賴性假性血小板減少現(xiàn)象和糾正方法分析

嚴(yán)蓓蓓

【摘要】 目的 探討乙二胺四乙酸（EDTA）依賴性假性血小板減少現(xiàn)象和糾正方法。方法 15例EDTA所致血小板減少患者作為研究對(duì)象， 對(duì)其血液標(biāo)本采用不同抗凝劑后進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。結(jié)果 乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝血的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果為（53.2±20.0）×109/L， 分別與枸櫞酸鈉抗凝血的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果（150.5±49.6）×109/L、手工計(jì)數(shù)血小板的結(jié)果（153.0±48.6）×109/L比較， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而枸櫞酸鈉抗凝血的血小板計(jì)數(shù)值與手工計(jì)數(shù)血小板的結(jié)果比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 枸櫞酸鈉抗凝劑無(wú)導(dǎo)致血小板聚集的作用， 在一定的條件下， 可替代EDTA-K2抗凝靜脈血進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。

【關(guān)鍵詞】 乙二胺四乙酸；枸櫞酸鈉；血小板計(jì)數(shù)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.36.042

隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展， 血液分析儀的自動(dòng)化程度越來越高。在臨床診斷、治療及合理用藥方面， 血小板數(shù)量的正確計(jì)算具有十分重要的意義。血小板計(jì)數(shù)的抗凝劑通常是EDTA-K2， 它為國(guó)內(nèi)外自動(dòng)血液分析儀所常用。然而在少數(shù)情況下， 它可能導(dǎo)致假性的血小板減少癥， 如EDTA依賴性假性血小板減少癥[1]。如果在臨床工作中此種現(xiàn)象未及時(shí)發(fā)現(xiàn)， 往往容易引起誤診誤治， 增加患者心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)， 甚至?xí)疳t(yī)療糾紛。EDTA引起的假性血小板減少的標(biāo)本在日常檢測(cè)標(biāo)本中的比例很低， 國(guó)內(nèi)報(bào)告其發(fā)生率約為0.09%～0.20%[2， 3]。檢驗(yàn)人員如何能排除干擾， 及時(shí)發(fā)現(xiàn)并糾正， 如何保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性顯得至關(guān)重要。為了能有效解決因EDTA抗凝劑依賴引起的假性血小板減少這一問題， 翻閱《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》等若干相關(guān)文獻(xiàn)， 找到了一種簡(jiǎn)便可行、血小板結(jié)果可靠的糾正方法， 即枸櫞酸鈉抗凝血。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2015年12月～2016年5月住院的EDTA所致血小板減少患者15例作為研究對(duì)象， 所有患者的皮膚均沒有瘀點(diǎn)和瘀斑， 也沒有鼻出血、胃腸道和泌尿道的出血病癥等。每位患者都被采集末梢血做血小板人工計(jì)數(shù)， 并抽取EDTA-K2和枸櫞酸鈉各一管抗凝靜脈血。

1. 2 儀器與試劑 SYSMEX XN-9000希森美康全自動(dòng)血液分析儀及相應(yīng)配套試劑和質(zhì)控品；雙目顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；改良牛鮑（Neubauer）計(jì)數(shù)盤；瑞氏染液（珠海貝索公司）；草酸銨血小板稀釋液按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》來配置[4]；兩種抗凝管由成都瑞琦公司提供。因枸櫞酸鈉抗凝管中血液與抗凝劑的比例是9∶1， 因而血小板檢測(cè)結(jié)果應(yīng)該乘以系數(shù)1.1， 文中均為校正后的統(tǒng)計(jì)值。

1. 3 檢測(cè)方法

1. 3. 1 儀器分析 嚴(yán)格按照SYSMEX XN-9000全自動(dòng)血液流水線分析儀的操作規(guī)程， 分別對(duì)枸櫞酸鈉和EDTA-K2管中的血小板數(shù)目進(jìn)行檢測(cè)。

1. 3. 2 血小板手工計(jì)數(shù) 由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的主管檢驗(yàn)師嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》的操作規(guī)程[4]， 同時(shí)進(jìn)行血小板的顯微鏡計(jì)數(shù)， 每個(gè)標(biāo)本計(jì)數(shù)兩次取其平均值。將每位患者的EDTA-K2和枸櫞酸鈉抗凝血都進(jìn)行推片， 血涂片經(jīng)瑞氏染液染色后用顯微鏡鏡檢。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

EDTA-K2抗凝血的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果為（53.2±20.0）×109/L， 分別與枸櫞酸鈉抗凝血的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果（150.5±49.6）×109/L、手工計(jì)數(shù)血小板的結(jié)果（153.0±48.6）×109/L比較， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而枸櫞酸鈉抗凝血的血小板計(jì)數(shù)值與手工計(jì)數(shù)血小板的結(jié)果比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。血涂片經(jīng)瑞氏染液染色后， 在顯微鏡下觀察到EDTA-K2抗凝血涂片中有大小不一、數(shù)量不等的血小板聚集；而枸櫞酸鈉抗凝血涂片中的血小板則呈均勻散在分布狀態(tài)。

3 討論

血小板是血液中的有形成分之一， 它在體內(nèi)具有十分重要的生理功能。其主要參與止血過程和血栓的形成， 在炎癥反應(yīng)和動(dòng)脈粥樣硬化中起著重要作用[5， 6]， 是最常用的臨床試驗(yàn)項(xiàng)目之一， 所以血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度是關(guān)鍵。

檢測(cè)血小板目前的常規(guī)方法是通過全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行檢測(cè)。抗凝劑被國(guó)際血液標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）推薦為首選抗凝劑， 是因?yàn)槠淠芘c血液中的鈣螯合形成螯合物， 從而防止血液凝固。但它在臨床的實(shí)際運(yùn)用中， 會(huì)偶爾發(fā)現(xiàn)EDTA-K2導(dǎo)致的假性血小板減少現(xiàn)象[7， 8]。這可能是因EDTA-K2會(huì)導(dǎo)致血小板活化， 使血小板正常形態(tài)發(fā)生改變， 由雙面微凸的圓盤狀轉(zhuǎn)變?yōu)閳A球狀， 從而引起血小板膜表面存在的某種隱蔽性抗原的表位構(gòu)象發(fā)生了改變[9-11]， 與血液中存在的某些自身抗體發(fā)生了免疫反應(yīng)， 并且釋放出多種活性物質(zhì)， 從而最終導(dǎo)致血小板的聚集[12， 13]。如果這種計(jì)數(shù)減少?zèng)]有被及時(shí)發(fā)現(xiàn)， 往往容易引起誤診誤治， 增加患者心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)， 甚至有可能會(huì)引發(fā)醫(yī)療事故或醫(yī)療糾紛， 因此及時(shí)發(fā)現(xiàn)并采取措施糾正顯得十分重要[14， 15]。

EDTA引起的假性血小板減少多見于如敗血癥、腫瘤及肝硬化患者、自身免疫性疾病等某些相關(guān)性疾病及采取治療措施后發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)中15例來自本院腫瘤科7例、呼吸內(nèi)科2例、老年風(fēng)濕科2例、骨科3例、肝膽外科1例， 這些患者中以腫瘤科的患者居多。這可能是由于機(jī)體存在某種自身免疫抗體， 引起體內(nèi)免疫反應(yīng)有關(guān)；也有可能與腫瘤的發(fā)生機(jī)制或采取放化療對(duì)機(jī)體的刺激有關(guān)， 從而導(dǎo)致的血小板假性減少， 這些具體原因還有待于進(jìn)一步的深入研究。

總之， 在檢測(cè)血小板數(shù)量發(fā)現(xiàn)減少時(shí)， 應(yīng)先觀察儀器上血小板直方圖有無(wú)出現(xiàn)翹尾現(xiàn)象；如果儀器有報(bào)警提示血小板聚集， 首先應(yīng)觀察排除微小凝集， 是否由采血不順暢而導(dǎo)致的， 然后推片制作血涂片經(jīng)瑞氏染色后鏡檢， 觀察血小板的分布情況。一旦認(rèn)為屬于是EDTA依賴性假性血小板減少， 應(yīng)及時(shí)跟患者的管床醫(yī)生溝通， 改用枸櫞酸鈉抗凝血進(jìn)行復(fù)查。因枸櫞酸鈉抗凝劑無(wú)導(dǎo)致血小板聚集的作用， 所以在一定的條件下， 它可以替代EDTA-K2抗凝靜脈血進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)， 具有簡(jiǎn)便、可靠、有效等優(yōu)點(diǎn)， 建議將其作為解決EDTA依賴性假性血小板減少這一問題的首選方法進(jìn)行檢測(cè)， 從而避免因假性血小板減少造成的誤診誤治。

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